一步法RT-PCR检测禽呼肠孤病毒方法的建立与应用(摘要)

禽呼肠孤病毒(ARV)是呼肠孤病毒属的成员,在临床上主要引起鸡病毒性关节炎/腱鞘炎、吸收障碍综合症等多种疾病.禽呼肠孤病毒感染导致鸡群的饲料报酬降低、生产能力下降、屠宰废弃率高和引起免疫抑制而造成其它疾病的并发或继发感染,使鸡群死亡率升高,其危害相当严重.     

多重聚合酶链反应快速检测鉴别鸡毒支原体强毒株和弱毒疫苗株的研究

根据鸡毒支原体强毒株和弱毒疫苗株基因组的结构特点，设计合成了二对引物XZ1，XZ2和XZ45、XZ46，建立了一种同时检测鉴别MG野毒株和弱毒疫苗株的多重PCR技术。试验结果表明，用这两对引物对MG强毒株和弱毒疫苗侏进行多重PCR，强毒株只扩增出732bp一条带，而弱毒疫苗株则可同时扩增出732bp、524bp二条带，而对其他种类鸡支原体和其它禽病病原的扩增不出现任何条带，结果均为阴性；敏感性测定结果表明，该多重PCR最低能检出1Pg的MG强毒株和弱毒疫苗株的DNA模板。     

一步法RT-PCR检测禽呼肠孤病毒的研究

根据已发表的禽呼肠孤病毒（ARV）S1133株S1基因序列，设计合成了一对扩增跨幅为532bp的引物。这对引物对ARV标准株，分离株以及人工感染SPF鸡跗关节组织抽提的核酸进行一步法RT-PCR扩增，即将反转录和PCR反应在一个PCR反应管中一次性完成。结果该方法对ARV4个标准株和5个分离株的扩增均获得了与预期大小一致的RT-PCR产物，而对照样品的扩增全为阴性；该方法最低可检测到0.16ng的ARV RNA，还可以直接从感染鸡关节组织抽提的核酸中检测到ARV RNA，表明该一步法RT-PCR对于ARV的检测是可行的。     

鸡毒支原体PCR检测试剂盒的研制与应用

根据基因库中鸡毒支原体 1 6SrRNA的序列研制PCR检测试剂盒 ,用于检测鸡毒支原体 (MG)。结果表明该MG PCR检测试剂盒对不同MG参考菌株和地方分离株均能特异性地扩增出 732bp条带 ,而对其他禽支原体和禽病病原体的扩增结果为阴性。该MG PCR试剂盒最低能检测出 1 0 0fg的MGDNA模板。保存期测定结果表明 ,该MG PCR试剂盒在 - 2 0℃条件下保存至 1 ,3 ,6和 9个月时 ,其敏感性无明显变化 ,仍能检测到 1 0 0fg至 1pg的MGDNA模板。保存至 1 2个月时其敏感度虽降低了 1个滴度 ,但仍能 1 0 0 %检出人工感染鸡的临床样品     

鸡毒支原体PCR诊断试剂盒的研制及应用(摘要)

鸡毒支原体(MG)主要引起鸡的慢性呼吸道病,造成肉鸡胴体品质下降,种鸡产蛋率、受精率和孵化率下降等.当MG与其它病原合并感染时,还会引起严重的并发症,导致鸡群死亡率增高,给养鸡业带来严重危害.MG在我国鸡群中的感染相当普遍,据对全国20个省市调查结果表明,该病的平均感染率高达78%,我们对广西调查结果显示,鸡群中该病平均感染率为56.9%,种鸡群中阳性率更高达89.5%,严重危害我国养鸡业的健康发展.快速准确诊断是有效防治MG的前提,由于MG所需培养条件苛刻,传统病原分离培养需要2-3周,甚至更长时间才得出结果,不适于临床诊断需要,为此我们建立了快速检测MG的PCR方法,并在此基础上研制出MG PCR诊断试剂盒,并在生产中推广应用.     

鸡毒支原体PCR诊断试剂盒的研制及应用

鸡毒支原体 (ＭＧ)主要引起鸡的慢性呼吸道病 ,造成肉鸡胴体品质下降 ,种鸡产蛋率、受精率和孵化率下降等。当ＭＧ与其它病原合并感染时 ,还会引起严重的并发症 ,导致鸡群死亡率增高 ,给养鸡业带来严重危害。ＭＧ在我国鸡群中的感染相当普遍 ,据对全国 2 0个省市调查结果表明 ,该病的平均感染率高达 78% ,我们对广西调查结果显示 ,鸡群中该病平均感染率为 5 6 9% ,种鸡群中阳性率更高达89 5 % ,严重危害我国养鸡业的健康发展。快速准确诊断是有效防治ＭＧ的前提 ,由于ＭＧ所需培养条件苛刻 ,传统病原分离培养需要 2- 3周 ,甚至更长时间才得…     

RT-PCR检测猪瘟病毒方法的建立与应用

建立RT PCR检测猪瘟病毒的方法。根据已发表的猪瘟病毒E2基因 (囊膜糖蛋白gP55基因 )序列 ,设计合成了一对特异性引物 ,扩增片段的大小为 50 7bp ,用RT PCR技术对石门系标准株和 1 0株分离株进行检测。结果这对引物对标准株和 1 0株分离株均能扩增出与预期大小相符 50 7bpRT PCR产物 ,而对其他 6种猪病病原核酸的扩增结果为阴性。该RT PCR可检出 1 0 0pg的猪瘟病毒RNA模板 ,对人工感染猪不同组织样品进行检测 ,结果对白细胞抽提的核酸样品检出率最高为 1 0 0 % (2 4 / 2 4 ) ,其次为扁桃体、脾、肾 ,检出率为 83 3 % (2 0 / 2 4 ) ,再者为淋巴结 ,检出率为66 7% (1 6/ 2 4 )。对送检的 1 9份疑似猪瘟的病死猪病料组织进行RT PCR检测 ,结果有 1 6份样品为猪瘟病毒阳性。兔体交叉反应试验结果RT PCR阳性的 1 6份病料中 ,有 1 4份样品被判为含有猪瘟病毒 ,其他病料兔体交叉反应试验结果全为阴性     

二温式PCR检测对虾白斑综合征病毒

本研究设计了一对能扩增大小为306bp对虾白斑综合征病毒(WSSV)某段基因的特异性引物，优化建立了能快速检测WSSV的二温式PCR，在对包括105份临床样品、10份SPF南美白对虾组织样品和其他对虾病害病原在内的样品检测结果中，有65份临床样品呈现WSSV阳性，而10份SPF南美白对虾组织样品和其他对虾病害病原的PCR结果为阴性。该二温式PCR最低能检测到1pg的WSSV感染对虾组织样品总DNA。这些结果表明，该PCR具有高度的特异性和敏染性。     

应用多重PCR检测鉴别对虾白斑综合征病毒和桃拉病毒

研究建立了一种可同时检测对虾白斑综合征病毒(WSSV)和桃拉病毒(TSV)的多重聚合酶链式反应(多重PCR)技术。根据WSSV和TSV基因序列，设计合成了2对分别与WSSV和TSV某段基因序列互补的引物，用这2对引物对同一样品中的WSSV DNA和TSV RNA模板进行多重PCR扩增。结果均同时得到了2条特异的与实验设计相符的306bp(WSSV)和231bp(TSV)多重PCR扩增带，而对其他对虾病病原的PCR扩增结果均为阴性；敏感性测定结果表明，该多重PCR技术能检出10pg的WSSV DNA和1pg的TSV RNA模板。     

中小猪场猪瘟与大肠杆菌的诊断与防治

依据发病猪只的症状、病理变化,结合实验室诊断,确诊为猪瘟与大肠杆菌混合感染。根据检测结果,提出处理方案,控制了疫情。