藏獒犬IFNγ基因的克隆表达及其生物学活性测定

通过RT-PCR技术从刺激的藏獒犬外周血淋巴细胞中成功克隆IFNγ全基因,其大小为501bp,编码167个氨基酸,前23个AA为信号肽,与GenBank上发表的犬IFNγ((NM001003174.1)比较,序列的同源性为99.4%。构建了原核表达载体pET-30a-IFNγ,转化BL2L,IPTG诱导后表达约23Kd的重组蛋白,经镍琼脂糖凝胶层析柱纯化后,纯度达90%以上;利用抑制病毒噬斑法测定重组藏獒犬γ干扰素的生物学活性,结果显示纯化的蛋白具有一定的抗病毒活性,本研究结果为进一步研究犬γ干扰素的抗病毒活性奠定基础。     

藏獒犬白介素18基因的克隆及原核表达

通过RT-PCR技术从刺激的藏獒犬外周血淋巴细胞中成功克隆白介素18基因全长,其大小为582bp,编码194个氨基酸。与GenBank上发表的犬IL-18(NM001003305)比较,序列的同源性为100%,与犬、猫、猪,牛、羊、人的IL-18基因核苷酸同源性分别为100%、91.2%、91.1%、88.5%、89.3%、84.4%。系统进化树可以看出,藏獒犬基因与犬的亲缘关系最近,与猫的其次,与人是较远的。然后构建-IL18去信号肽的原核表达载体pET-30a-IL18,转化BL2L,IPTG诱导,表达产物经SDS-PAGE分析表明,表达出25kd融合蛋白而且目的蛋白主要以包涵体的形式存在,westbloting验证表达的蛋白正确。