鸡传染性囊病病毒青岛分离株VP2基因的克隆及序列分析

为了克隆传染性囊病病毒青岛分离株(IBDV-QD)的VP2 基因及对其高变区序列进行分析,首先根据GenBank上已经发表的传染性囊病病毒(IBDV)UK661株的核苷酸序列,设计并合成了一对特异性的扩增IBDV-QD VP2 基因的引物.以IBDV-QD株基因组为模版,利用RT-PCR技术扩增出长约1.5 kb的基因片段,将其连接到pGEM-T-Easy载体上.经酶切分析、PCR鉴定及核苷酸序列测定,成功获得该分离株VP2基因的重组质粒.将IBDV-QD株VP2基因的高变区核苷酸序列及推导出的氨基酸序列与GenBank中公布的14株IBDV相应序列应用软件进行同源性比较,并构建系统进化树.同源性比较和进化树分析表明,IBDV-QD与IBDV超强毒株(vvIBDV)关系最近,与标准强毒株、弱毒株、变异株相差较远;并且我国不同地区的vvIBDV存在差异,这为我国传染性囊病的流行病学调查奠定了基础.     

朊病毒致病机理研究进展

朊病毒是一种无核酸但具有感染力的异常朊蛋白,可引起人和动物的神经退行性病变,该病结局是死亡。作者就朊病毒中枢神经系统感染机理,局部组织P rP sc聚集分布与P rP sc对神经组织损伤的关系、朊病中正常P rP c生理功能、细胞死亡可能机制、朊病中的神经炎—小胶质细胞的反应、补体激活作用;朊病毒外周神经系统感染机理,入侵门户、胞内转运机制、外周感染靶器官、胞内聚集与复制、神经入侵及朊病进程中已发现的几种受体细胞的重要作用等作一综述,为进一步研究该病提供理论依据。     

RNAi抑制PrP表达载体的构建及其在PrP功能研究中的初步应用

本文旨在构建有效抑制朊蛋白（Prion protein，PrP）表达的重组质粒，并以此为工具控制PrP表达，从而探讨PrP对细胞SOD活性的影响。设计并化学合成1对含有发夹结构的寡核苷酸片段（shPrP），退火后与表达载体pG-super（Hairpin siRNA expressing vector）定向连接，构建重组质粒pG-super-shPrP。对重组子进行PCR鉴定，测序正确后，脂质体法转染C6细胞，采用实时荧光定量RT-PCR检测PrP mRNA的表达水平，以验证pG-super-shPrP的抑制效率；结果表明：重组质粒pG-super-shPrP构建成功，且显著降低C6细胞PrP mRNA表达（P〈0．05），抑制效率为34．2％。利用pG-super、pG-super-shPrP分别转染C6细胞，并检测细胞SOD总活性及SOD表达水平，探讨PrP对细胞SOD活性的影响及其作用机制，结果表明PrP促进细胞SOD的活性（P〈0．01），但对细胞SOD的表达量无影响，即PrP对SOD活性的促进作用与SOD1的表达量无关。本研究在成功构建了PrP的RNA干扰表达质粒的基础上，利用此质粒，在细胞水平上揭示了PrP对细胞SOD活性的促进作用。     

3种肝损伤模型的组织病理学特征观察

1材料与方法 1．1动物与试剂 1．1．1动物SD大鼠：雌雄各半，体重170～180g，合格证号：SCXK（京）2002—0003，SPF级，北京维通利实验动物技术有限公司提供。     

内蒙古地方品种绵羊朊蛋白基因多态性分析

对中国内蒙古的乌珠穆沁羊（46）、苏尼特羊（34）和蒙古羊（22）进行朊蛋白基因的克隆和多态性分析。结果表明,发现了8个朊蛋白基因多态性位点,其中M157I、Q220H、R223K为未见报道的朊蛋白基因多态性位点;痒病中度易感的朊蛋白基因ARQ/ARQ占74.5%,具有痒病抗性朊蛋白基因ARR/ARR占7.9%,未检出对痒病高度易感的朊蛋白基因VRQ/VRQ。从基因水平上推论,乌珠穆沁羊携带的羊痒病抗性的ARR/ARR基因频率较高（15.2%）,占ARR/ARR基因型的87.5%,发生羊痒病风险较低。该研究结果在中国活羊的出口贸易和品种选育方面有重要的意义,为出入境动物检疫中羊痒病的风险分析和风险评估提供重要的基础理论资料。     

犬睾丸莱迪希细胞瘤病例

观赏动物医院送检一例比格犬睾丸肿物,手术前单侧睾丸肿物增大,且触摸有痛感,持续一段时间后未见好转,故手术切除.未发现其他明显临床症状.据病理观察结果诊断为睾丸莱迪希细胞瘤.     

绵羊朊病毒受体37kD/67kD LRP/LR实时荧光定量PCR标准质粒和标准曲线的构建

为实时相对荧光定量PCR检测绵羊组织中朊病毒受体LRP/LRmRNA表达水平,构建目的基因LRP/LR、内参基因β-actin的标准质粒和标准曲线;根据GeneBank中绵羊37 kD/67 kDLRP/LR(LRP/LR)和β-actin基因编码区保守序列,设计特异引物;提取肠道组织mRNA,经反转录RT-PCR扩增,产物回收纯化后,与pGEM-T-easy载体连接,转化大肠杆菌感受态细胞DH5α;质粒提取后经酶切、PCR和测序鉴定后,获得阳性LRP/LR,β-actin重组质粒;将阳性重组质粒107~102梯度稀释作为模板,然后进行实时荧光定量PCR;系统软件自动生成标准曲线及回归方程。结果显示产物溶解曲线峰值单一,说明无引物二聚体及引物特异性高;LRP/LR和-βactin标准曲线相关系数分别为r2=0.999,r2=0.997,说明线性关系好;重复性试验结果显示所构建的重组质粒10次同条件扩增均Ct值具有较好的重现性,且变异率均小于5%,说明标准曲线重复性好,稳定性高。说明成功构建目的基因LRP/LR,内参基因β-actin标准质粒和标准曲线,为实时荧光定量PCR检测绵羊组织中朊病毒受体mRNA表达水...     

猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)检测方法的建立

根据GeneBank中已经发表的PRRSV毒株的ORF6基因高度保守序列,设计并合成了一对特异性引物,建立了用于检测PRRSV的RT-PCR诊断方法。从感染PRRSV-QD的Marc-145细胞中提取病毒RNA,然后经RT-PCR扩增,获得预期266 bp的目的片断,而猪伪狂犬病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)、猪圆环病毒(PCV)细胞培养物及Marc-145细胞进行同条件检测,结果为阴性;PRRSV扩增产物测序结果与GeneBank中已发表的PRRSV毒株序列同源性达94.4%~97.4%且应用本研究检测方法对已知基因型的10株PRRSV盲检,检出率100%。上述研究结果表明,所建立的RT-PCR诊断方法特异性好、敏感性高,可进一步应用于猪繁殖与呼吸综合征的临床诊断。     

免疫印迹法检测绵羊朊蛋白prpc的研究

蛋白免疫印迹法在目前已有的朊病检测方法中具有敏感性和特异性高的特点，是检测痒病的金标准。本实验室为国家动物海绵状脑病实验室，负责检测北方地区的牛羊海绵状脑病，自2003年成立以来，在羊痒病流行病学调查、痒病易感性相关分子机理方面及病理组织学检查、免疫组织化学检测法等领域进行了广泛深入的研究，同时基本建立了羊痒病免疫印迹检测方法。     

禽流感病毒的理化消毒

禽流感是影响世界养禽业的重要疫病之一，此外还对人类公共卫生造成重要威胁：禽流感的一种可能传播途径是通过人类相关的活动，如人员的流动，运载工具如车辆及其它污染物和未进行彻底消毒的感染动物等。因此，假如人员、衣服、鞋、车辆，农具及其它材料不能够彻底消毒，则禽流感的感染就会持续存在，同时对养禽业及公共卫生的威胁就不会根除。为此，清除并消毒被认为是控制禽流感过程中必不可少的步骤：本文重点阐述当前禽流感病毒的物理、化学消毒剂的研究现状及每类消毒剂的适用范围和注意事项。