| 绵羊朊病毒受体37kD/67kD LRP/LR实时荧光定量PCR标准质粒和标准曲线的构建 |
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| 引用本文： | 乔俊文,苏晓鸥,赵德明,李玉荣,王伊琴.绵羊朊病毒受体37kD/67kD LRP/LR实时荧光定量PCR标准质粒和标准曲线的构建[J].中国农业大学学报,2009,14(4). |
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| 作者姓名： | 乔俊文 苏晓鸥 赵德明 李玉荣 王伊琴 |
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| 作者单位： | 1. 中国农业大学动物医学院/国家动物海绵状脑病实验室,北京,100193
2. 河北农业大学动物科技学院,河北保定,071001 |
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| 基金项目： | 国家科技支撑计划项目(2006BAD06A14) |
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| 摘 要： | 为实时相对荧光定量PCR检测绵羊组织中朊病毒受体LRP/LRmRNA表达水平,构建目的基因LRP/LR、内参基因β-actin的标准质粒和标准曲线;根据GeneBank中绵羊37 kD/67 kDLRP/LR(LRP/LR)和β-actin基因编码区保守序列,设计特异引物;提取肠道组织mRNA,经反转录RT-PCR扩增,产物回收纯化后,与pGEM-T-easy载体连接,转化大肠杆菌感受态细胞DH5α;质粒提取后经酶切、PCR和测序鉴定后,获得阳性LRP/LR,β-actin重组质粒;将阳性重组质粒107~102梯度稀释作为模板,然后进行实时荧光定量PCR;系统软件自动生成标准曲线及回归方程。结果显示产物溶解曲线峰值单一,说明无引物二聚体及引物特异性高;LRP/LR和-βactin标准曲线相关系数分别为r2=0.999,r2=0.997,说明线性关系好;重复性试验结果显示所构建的重组质粒10次同条件扩增均Ct值具有较好的重现性,且变异率均小于5%,说明标准曲线重复性好,稳定性高。说明成功构建目的基因LRP/LR,内参基因β-actin标准质粒和标准曲线,为实时荧光定量PCR检测绵羊组织中朊病毒受体mRNA表达水...
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| 关 键 词： | LRP/LR Real-time PCR 绵羊 重组质粒 标准曲线 |
Construction of standard plasmid and standard curve of Real-time RT-PCR for scrapie agent receptor gene-37kD/67kD LRP/LR |
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| QIAO Jun-wen,SU Xiao-ou,ZHAO De-ming,LI Yu-rong,WANG Yi-qin.Construction of standard plasmid and standard curve of Real-time RT-PCR for scrapie agent receptor gene-37kD/67kD LRP/LR[J].Journal of China Agricultural University,2009,14(4). |
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| Authors: | QIAO Jun-wen SU Xiao-ou ZHAO De-ming LI Yu-rong WANG Yi-qin |
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| Institution: | 1.College of Veterinary Medicine;China Agricultural University/ National Animal Transmissible Spongiform Encephalopathies Laboratory;Beijing 100193;China;2.College of Animal Science and Technology;Heibei Agricultural University;Baoding 071001;China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | LRP/LR Real-time PCR sheep recombinant plasmid standard curve |
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