反转录病毒载体介导的EGFP基因在SP2/0小鼠骨髓瘤纽胞中的表达

为了构建携带报告基因增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的反转录病毒载体,并观察EGFP基因在SP2/0小鼠骨髓瘤细胞中的表达情况.试验将增强型绿色免疫荧光基因片段定向插入反转录病毒载体pFB-neo,获得重组反转录病毒质粒pFB-NE,利用三质粒共转染系统,将含有目的基因的重组反转录病毒质粒pFB-NE以及含有辅助病毒...     

延边地区布鲁菌bp26基因的克隆、序列分析及蛋白结构预测

布鲁菌病(brucellosis)是由布鲁菌引起的人兽共患传染病,家畜牛、羊、猪最常发生,且可传染给人和其他家畜,其特征是生殖器官和胎膜发炎,引起流产、不育和各种组织的局部病灶。本病广泛分布于世界各地,目前在我国人畜间仍有发生,给畜牧业和人类的健康带来严重危害[1]。外膜蛋白bp26又名CP28或OMP28,基因开放阅读框长753 bp,编码250个氨基酸,表达出的蛋白分子质量为28 ku,是一种可溶蛋白,属于布鲁菌三组     

一例猫下泌尿道综合征的诊断与治疗

<正>家庭中饲养猫咪,会在一定程度上限制它的运动,有些疾病随之而来。猫下泌尿道综合征就是一个高发的困扰主人和兽医师的疾病之一。下面介绍一例该综合征的治疗,以期为临床诊断与治疗提供参考。1基本情况初诊时间2018年5月21日,品种:暹罗猫,性别:雄性已绝育。年龄:2岁10个月。体重:4.1 kg。主诉:经常蹲猫砂,排尿姿势还叫,但猫砂里没有结块。2临床基础检查体温39.2℃,脉搏148次/min,呼吸41次/min,精神状态尚可,触诊腹部膀胱肿大,呈拳头大小。导尿管探查有阻力,没有成功导尿。     

犬附红细胞体抗原分析

[目的]为了解犬附红细胞体抗原特性。[方法]对犬附红细胞体进行体外培养,培养后对解离的犬附红细胞体经超声波裂解,制备粗提抗原并提纯,对所提抗原进行SDS—PAGE及免疫印迹分析。[结果]犬附红细胞体抗原在电泳图谱上出现了3条主蛋白带,其分子量分别为66、32和25kD,其中32和25kD的抗原具有较好的免疫性,且不与犬附红细胞体阴性血清发生交叉反应,具有较好的特异性。[结论]该研究为犬附红细胞体的抗原成分及犬附红细胞体病的免疫学诊断等研究奠定了基础。     

猪附红细胞体病间接ELISA诊断试剂盒的研制及初步应用

以纯化的猪附红细胞体特异性抗原为包被抗原,在建立猪附红细胞体病间接ELISA检测方法的基础上对各反应参数进行了优化,并初步组装成试剂盒。组装的试剂盒抗原最佳包被质量浓度为30 mg/L,被检血清稀释度为1∶100,酶标二抗的最适工作滴度为1∶4 000,底物TMB最适反应条件为室温15 min;检测血清的判定标准为D450值≥0.13定为阳性反应,D450值≤0.11定为阴性反应,0.11~0.13定为疑似反应;该试剂盒不与猪大肠杆菌病、猪弓形虫病及猪瘟等阳性血清发生交叉反应,具有较好的特异性;在不同时间对阴阳性样品重复检测8次,阴阳性血清的D450值变异系数均未超过10%,说明该试剂盒具有良好的重复性;通过对组装试剂盒中各组分的稳定性和保存时间的测定结果证实,该试剂盒的保质期暂定为6个月;应用保存6个月的试剂盒通过对吉林省延边地区的60份猪血清样本检测,并与间接ELISA比较,其阳性符合率达100%,说明该试剂盒具有较好的稳定性。     

反转录病毒介导的稳定表达HIV-1Gag蛋白和增强型绿色荧光蛋白细胞系的建立

本研究旨在建立中国流行株人免疫缺陷病毒(HIV-1)衣壳蛋白(Gag)哺乳动物稳定表达细胞系。将HIV-1核心蛋白基因gag和增强型绿色荧光蛋白基因EGFP依次串联插入反转录病毒载体pFB-neo,构建重组反转录病毒载体pFB-gag-EGFP,并与含有辅助病毒gag-pol和env基因的质粒pVPack-GP、pVPack-10A1共转染HEK293T细胞,包装出的反转录病毒感染小鼠骨髓瘤细胞SP2/0。荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白EGFP表达,验证HIV-1核心蛋白Gag表达,G418抗性筛选阳性细胞。结果表明,HIV-1核心蛋白Gag和增强型绿色荧光蛋白可在SP2/0细胞中稳定表达,HIV-1核心蛋白gag基因稳定表达细胞系成功建立,为抗AIDS治疗用基因工程制剂及靶向药物的活性检测提供了理想方法。     

一例金毛幼犬蜂窝织炎的诊断与治疗

<正>幼犬蜂窝织炎又称作幼犬腺疫或者幼犬脓皮病。该病发病原因复杂,可能与免疫系统异常、遗传因素、皮肤屏障受到损坏、各种变态反应及内分泌失调等有关。此病高发于3周龄到6月龄的任何品种的幼犬。目前诊断方法主要为病变部位细胞学检查及皮肤组织病理学检查。1 病例介绍就诊时间是2019年4月16日,发病犬为72日龄金毛母犬,发病前已经注射两针卫佳伍疫苗,同时服用超可信驱虫药。主诉3 d前开始出现问题,但精神良好,当天精神不好不爱吃粮了。