沙门氏菌鞭毛蛋白属共同抗原表位的定位

用淋巴细胞杂交瘤技术研制成４株沙门氏菌属特异单抗ＣＢ８，ｄｅ７，ｃｃ６，ＤＤ４，在免疫转印试验中，证实它们所识别的抗原表位位于鞭毛蛋白上，ＥＬＩＳＡ相加试验及竞争试验显示，ＣＢ８和ｃｃ６与ｄｅ７，ＤＤ４识别的抗原表位不同，表明鞭毛蛋白的属共同抗原具有多种表位的特性。用胰蛋白酶消化鞭毛蛋白，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ结果出现两条新带，分子量分别为４２０００（Ｆ４２），２７０００（Ｆ２７），长时间消化，最终只剩下Ｆ２７条带，它可抵制该酶的消化。对该酶切样品的免疫转印结果表明，沙门氏菌鞭毛蛋白属共同抗原表位出现于Ｆ４２和Ｆ２７上，而相应的沙门氏菌分型Ｈ抗原单抗或因子血清识别的表位也在Ｆ４２和Ｆ２７上都得到了证实。这为沙门氏菌鞭毛蛋白抗原的多样性及结构和功能研究提供了证据。     

鸡沙门氏菌弱毒冻干苗的研制

由减毒鸡沙门氏苗97A疫苗株作为制苗用菌种，经普通琼脂培养，冷冻真空干燥等工艺生产鸡沙门氏菌弱毒疫苗4批，每批疫苗分别以免疫剂量接种6日龄AA肉鸡，免疫第14天时，用强毒株Sg9和Sp4攻击，免疫组死亡保护率均达90％以上，试验结果表明，该苗具有良好的安全性和免疫效果。     

PRRSV间接免疫荧光检测法的建立和应用

以猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ATCC VR-2332株人工单独感染3头3周龄仔猪，并用PRRSV ATCC VR-2332株和猪圆环病毒2型(PCV2)联合感染2头3周龄仔猪，每日检查试验猪体温、采食情况及临床表现，并用HerdChek IDExx试剂盒测其血清抗体。PRRSV PCV2联合感染猪分别在感染后1、3周剖杀，PRRSV单独感染猪和健康对照猪分别在感染后1、2和3周剖杀，对全部试验猪的肺组织进行灌洗处理以获得肺泡巨噬细胞(PAM)．用PAM进行抹片，同时用肺组织直接进行触片做间接免疫荧光(IIF)检测。结果表明，用所获得的3株单克隆抗体均检测到人工感染猪肺组织中的PRRSV抗原。另外，用IIF检测7头临床疑似PRRS病猪的PAM抹片。其中沭阳县的2头猪呈现阳性反应；对这2头猪的肺组织进行病毒分离。在盲传到第4代时Marc-145细胞上产生明显的细胞病变，进一步证实用所获得的3株单克隆抗体检测临床样品的结果准确而可靠，且获得的3株单克隆抗体均可通过IIF用于检测猪肺组织中的PRRSV抗原。     

大肠埃希氏菌F18ab菌毛F亚单位基因的克隆与鉴定

根据已发表的大肠埃希氏菌F18ab菌毛F亚单位(FedF／ab)的基因(fedF／ab)序列，设计了1对引物，利用PCR技术从大肠埃希氏菌F107／86、YCED1、YCED2、C、D和12F株中分别扩增获得了一段序列，并克隆至pGEM—T载体，获得了重组质粒TF107F、TYCED1F、TYCED2F、TCF、TDF、T12FF。经琼脂糖凝胶电泳、序列测定及分析，6个重组质粒的大小均为903bp，与fedF／ab基因大小一致。其中大肠埃希氏菌F107／86、YCED1、C和12F株的fedF基因序列完全相同；只有YCED2株在第181位碱基处存在1个C→T的无义变异差异，D株在第655位碱基处存在1个T→C变异差异并在氨基酸水平出现1个S→P变异。结果表明，所克隆的序列均为F18ab菌毛F亚单位的基因。     

江苏地区猪圆环病毒2型流行病学调查

应用复合PCR方法,对江苏地区的162份可疑病料进行了检测,结果72份病料为PCV2阳性,17份为PCV1阳性,其中7份同时感染PCV1和PCV2。从发病时间看,以9~11月发病最多,阳性率高达54.67%。样品较多的保育猪和育肥猪的阳性率分别是26.03%和68.12%。通过流行病学调查,表明该病已在江苏地区呈流行趋势。同时对18头PCV2阳性猪病料的心、肝、脾、肺、肾、脑、腹股沟淋巴结、肠系膜淋巴结、扁桃体进行PCV2检测,结果有7头PCV2阳性猪的各个脏器都能检测出PCV2;在这些脏器中,肺、腹股沟淋巴结、扁桃体的检出率都为100%,较其他受检脏器更适合作为PCV2的检测样品。     

某大型鸡场鸡大肠杆菌病流行病学调查

某大型鸡场的28个分场分离到的菌株，经生化检验为大肠杆菌的有87株，经O血清测定定型65株，4株自凝，18株未能定型，其中O78占20株，O1占14株，O2占5株，这些分离株中O78、O1、O2有39株占定型菌株的60．0％，因此可以认定O78、O1和O2为该大型鸡场的优势血清型，以不同场分离的菌株，以每分离株10^7菌落形成单位(CFU)细菌气管接种1日龄易感鸡，根据接种后7天内发生死亡和病变鸡的比例，确定出高致病株、中等致病株和低致病株分别为87．36％、8．05％和4．59％。     

猪细小病毒的PCR检测、分离及鉴定

根据GenBank中报道的猪细小病毒基因组序列,利用PCR引物设计软件,设计并合成了1对引物,通过对PCR反应条件的优化,成功地扩增出了511bp的目的片段,建立了PCR检测PPV的方法。利用该方法对120份临床样品进行检测,共检测到4份阳性样品,并成功地分离到2株PPV,1#病毒分离株理化特性鉴定表明其符合PPV的特性。     

猪圆环病毒重组Cap蛋白单克隆抗体的制备及初步应用

利用重组杆状病毒表达系统在昆虫细胞中表达PCV2-ORF2基因,并以构建的重组杆状病毒为免疫原,通过杂交瘤技术,研制针对PCV2的单克隆抗体,为建立准确快速的PCV2诊断方法奠定基础。首先将PCV2-ORF2基因克隆到杆状病毒的转移载体pFastBacTM1中,然后将其转化入大肠杆菌感受态细胞DH10Bac中,与DH10Bac中的穿梭载体Bacmid发生转座,通过抗性和蓝白斑筛选,得到重组杆状病毒质粒reBacmid-ORF2,通过脂质体介导reBacmid-ORF2转染Sf9细胞,成功获得了表达PCV2-ORF2基因的P1代重组杆状病毒。将所获得的重组杆状病毒经Vivaflow200浓缩后,免疫6~8周龄BALB/c小鼠,取其脾脏与Sp2/0细胞融合,以IFA进行筛选,经多次亚克隆后得到3株能稳定分泌抗体的杂交瘤细胞,分别命名为5H6、4E2和5F7。通过IFA、IPMA及Western-blot试验对3株单抗特异性进行分析鉴定。结果显示,3株单抗均能与PCV2-Cap蛋白产生特异性的反应,并利用流式细胞术初步建立了对PCV2毒株感染PK15细胞的检测方法,从而为快速检测PCV2病毒奠定了基础。     

两种染色法测定禽源性大肠杆菌分离株的外膜蛋白型

对江苏地区２５个禽源性大肠杆菌Ｏ１，Ｏ２和Ｏ７８分离株的外膜蛋白型进行测定。用Ｎ－十二烷酰肌氨酸提取其外膜蛋白，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳后，分别以考马斯亮蓝染色法和银染法测定其外膜蛋白型。８个Ｏ１分离株，９个Ｏ２分离株分属２个ＯＭＰ型，其中的１个为二者所共有，而８个Ｏ７８分离株的ＯＭＰ型亦有该型相同；两种染色法对ＯＭＰ型的测定结果一致。     

掺沙对盐渍土土块崩解和土壤盐分淋洗的影响机理

黄河三角洲地区的土壤入渗性能差,且盐分含量高,掺沙可以加速盐渍土块崩解,改良土壤质地与结构,从而改善入渗性能和水盐在土壤运移过程。以黄河三角洲地区盐渍土土块为研究对象,采用室内土柱模拟试验,设置3种掺沙比例：CK （0）、S1（20%）、S2（50%）,土块组成：<1 mm （20%）,1~2 mm （28%）,2~5 mm （34%）,5~10 mm （18%）研究积水入渗条件下掺沙比例对相继2次入渗过程中盐渍土土块崩解及其对水盐运移的影响,从而明确掺沙对盐渍土的改良效果。结果表明,在第1次灌水淋洗和水分再分布后,用干筛法和湿筛法测量得到S1和S2土壤> 0.25 mm的土块含量,较对照组分别降低17.92%,15.50%和51.45%,32.00%;不同掺沙比例下,同一时刻的湿润锋和累计入渗量均表现为S2 > S1 > CK,且S1和S2的稳定入渗率在第1次和第2次入渗过程中,较对照组分别增加60.00%,66.67%和400.00%,900.00%;同一土层深度的脱盐率随掺沙比例增加,掺沙比例为50%时,脱盐深度比20%和对照组分别增加33.3%和45.45%,脱盐量分别提高1.19%~19.01%和4.21%~77.52%。综上,盐渍土掺沙可以有效促进盐渍土块崩解,提高入渗速率和洗盐效率。研究结果可为盐碱地改良提供参考依据。