牦牛WDR43基因的克隆、表达和功能分析

WDR43(WD Repeat Domain 43)是一种核糖体生成因子。本研究旨在分析牦牛WDR43序列的结构功能及其在牦牛组织和早期胚胎不同阶段的表达情况，从而为研究WDR43在牦牛早期胚胎发育过程中的作用机制提供实验依据。本实验选取30～90 d胚龄左右的牦牛胎儿（n=2）和3～4岁健康的母牦牛（n=2）作为材料，克隆获得牦牛WDR43的编码区，生物信息学分析预测WDR43功能并通过qRT-PCR获得WDR43在牦牛不同组织的表达情况。结果表明，牦牛WDR43编码区长度为2 046 bp，编码681个氨基酸，该序列有45.23%可能形成无规则卷曲，29.37%形成α螺旋，20.41%形成延伸链，4.99%形成β-转角。WDR43总体带正电荷，属于不稳定蛋白，无跨膜结构及信号肽。WDR43氨基酸序列高度保守，与牛、山羊、绵羊和野猪WDR43基因同源性较高，分别为98.85%、98.53%、98.09%和93.83%。WDR43在卵巢的表达量显著高于其他组织，并且在早期胚胎过程中均有表达，说明WDR43可能参与了牦牛的早期胚胎发育。本研究成功获得了牦牛WDR43基因编码区序列，分析其...     

遗传算法与模拟退火算法在神经网络优化中的性能分析

神经网络有以任意精度逼近未知函数的能力，所以被广泛应用于各种领域中。目前广泛应用于神经网络优化的方法是反向传播（BackPropagation，BP），但是BP的全局搜索能力很有限，而全局搜索方法是神经网络优化问题很有潜力的办法。文中研究了两种全局优化算法：遗传算法（GeneticAlgorithm，GA）和模拟退炎（Simu-lated Annealing，SA），并且比较了它们在神经网络优化中的性能。     

工厂供电系统预算的软件设计

本软件是在IBM-PC机上实现的。采用BASIC语言编程,具有通用性强、使用灵活、方便,可根据键入的设备类别随机检索。对于缩短工厂供电系统的设计周期具有重要意义。本文叙述了软件的设计思想及方法等。对于微机在林业企业管理方面的应用具有较高实用价值。该软件经过上机调试运行,确认预算结果准确,运算速度快,解决了手工编制供电系统预算周期长、效率低等一系列缺点。是林业系统及其它厂矿单位进行供电系统预算的强有力工具。     

重组Hu-IFN-α基因在草鱼中的整合和表达

采用显微注射法将人α干扰素(HuIFNα)重组基因转入草鱼Ⅰ～Ⅱ细胞期的受精卵,然后对转化培育出的草鱼个体提取血液总DNA进行PCR和Southern杂交检测及ELISA检测,以研究重组基因在受体基因组上的整合和表达情况。实验结果显示:HuIFNα重组基因能整合在草鱼基因组上,但其整合是随机的,整合位点没有固定区域,而且整合在受体草鱼基因组上的HuIFNα基因的表达率较低,表达水平在个体间有很大差异。大部分转基因个体外源基因表达水平集中在39～74pg/mL之间,表达最高个体HuIFNα浓度为1450pg/mL。     

金属硫蛋白对应激猪血清中某些酶活性的影响

金属硫蛋白是一类低分子量、富含半胱氨酸的金属结合蛋白。它与应激及应激性疾病有关。本文试探讨金属硫蛋白对应激猪血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶、乳酸脱氢酶、超氧化物歧化酶活性的影响，以便为金属硫蛋白在畜牧业生产中的应用提供一定的理论依据。     

CAF-1在体细胞重编程中的作用机制

染色质组装因子1（chromatin assembly factor-1，CAF-1），是由p150、p60、p48三个亚单位组成的组蛋白伴侣。CAF-1主要功能是在DNA复制中与增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）相互作用，负责募集组蛋白H3、H4沉积在新合成的DNA上以促进核小体装配。越来越多的研究解析CAF-1复合体的结构及其生物学功能，并发现CAF-1在体细胞重编程过程中发挥重要作用。因此，本文重点介绍了CAF-1的结构、生物学功能和在体细胞重编程中的作用。     

亮甲酚蓝染色法筛选卵母细胞对牛体细胞克隆胚体外发育的影响

为探索用亮甲酚蓝染色法筛选卵母细胞是否有利于牛体细胞克隆胚的体外发育,将采集的卵母细胞分成3组:对照组,采集后的卵母细胞直接放入成熟液培养,不用亮甲酚蓝处理;控制对照组,卵母细胞于PBS 中放置90 min后放入成熟液中培养;试验组,将采集的卵母细胞在含有26 μmol/L亮甲酚蓝的PBS中放置90 min.然后将处理过的卵母细胞根据着色情况分为两组,即BCB+(胞质呈蓝色,成熟卵母细胞)和BCB-(胞质未着色,生长期卵母细胞).各组卵母细胞24 h体外成熟培养,统计各组卵母细胞成熟率.分别用成熟后的各组卵母细胞用于细胞核移植,统计体细胞核移植的卵裂数、囊胚数和囊胚细胞数.结果表明,BCB+组卵母细胞的成熟率明显高于BCB-组卵母细胞的成熟率(74.0%,53.4%),差异显著(P<0.05).BCB+组的囊胚率(45.0%)与对照组、控制对照组和BCB-组的囊胚率(34.9%,36.4%和5.2%)相比差异显著(P<0.05).另外BCB+组的囊胚细胞总数(114.5±7.5)较其他组差异显著(P<0.05).表明通过亮甲酚蓝染色法筛选出成熟的高质量牛卵母细胞用于体细胞核移植,可以获得更高的克隆囊胚率.     

疑似新种--花垣小鲵的形态和性腺组织学观察

对采自湖南花垣的一种小鲵活体样本进行了形态学和性腺组织学研究，样本与小鲵属的其他种相比。尾长与头体长的比例相近，肋沟11条，掌(zhi)突不明显，腹部有云斑，但它们又有明显的不同：1)样本前后肢贴体相向相距2个肋沟，而小鲵属的其他种则相遇；2)样本的眼间距明显大于鼻间距，几乎是鼻间距的2倍，而小鲵属的其他种的眼间距与鼻间距基本相等；3)样本体形明显大于小鲵属其他种的体形；4)精卵细胞组织学的形态相比，样本和可比小鲵科其他种不仅在精巢数目上，而且在形态上也存在着显著的差异，样本有8个卵圆形精巢呈圆筒形，而小鲵属的其他种则各只有一对精巢，样本的卵巢扁平，带状，曲折，而小鲵属的其他种的卵巢位于体腔腹部，呈囊状结构，据此差异，样本应分属不同的种，初步定为一疑似新种，暂定名为花垣小鲵（Hynobius huayuanensis sp.nov）。     

体细胞核移植技术生产转入溶菌酶基因(hLYZ)牛胚胎的研究

本研究主要探讨经基因修饰和筛选后转基因供体细胞的挑选及处理对牛转入溶菌酶基因克隆胚胎早期发育的影响.用含人溶菌酶基因(human lysozyme,hLYZ)乳腺特异表达载体pEBH重组质粒转染高产荷斯坦牛成纤维细胞,经G418筛选后的转基因阳性细胞作为核供体细胞成功构建了转hLYZ基因克隆胚胎.结果发现,基因转染及筛选过程对转基因重构胚的发育有不利的影响,囊胚发育率显著降低;以注核针内径为参照,挑选直径为15～20μm的转基因阳性细胞作为供体细胞,重构胚的融合率和囊胚率较其它组差异显著(分别为80.4%和33.8%,P<0.05);生长旺盛期的细胞构建的转基因克隆胚的卵裂率及囊胚发育率显著高于经血清饥饿和生长接触抑制处理组(P＜0.05);所有的转基因克隆胚在体外发育的各个发育时期都能观察到绿色荧光蛋白的表达,但表达的强弱在不同个体及相同个体不同发育时期之间存在差异.随机挑选10枚囊胚以PCR法进行鉴定,结果全部为阳性转基因胚胎.研究结果表明,利用体细胞核移植方法可以获得转舰hLYZ基因的克隆胚胎,重构胚可成功的发育到囊胚阶段;挑选生长旺盛期的直径为15～20 μm的转基因阳性细胞作为供体细胞可显著提高转基因克隆胚的融合率和囊胚率.     

欧拉藏绵羊MSTN基因单碱基编辑体系的建立

肌肉生长抑制素（Myostatin,MSTN）基因突变时会导致肌纤维增粗，肌肉细胞增多，表现出双肌性状。为敲除欧拉藏绵羊MSTN基因以获得产肉性状更优的欧拉藏绵羊，利用胞嘧啶碱基编辑系统（CBE）在欧拉藏绵羊MSTN基因编码区提前引入终止密码子。在MSTN基因3个外显子区域上各设计1条sgRNA，分别连接至pEF1a-BE4max-NG-mU6-gRNA-blast质粒并转染欧拉藏绵羊耳成纤维细胞，通过Sanger测序和T-A克隆检测，成功筛选出1条靶向外显子I的符合预期的sgRNA，编辑效率20%。本研究成功通过单碱基编辑技术在欧拉藏绵羊耳成纤维细胞MSTN基因编码区进行定点编辑，为通过分子育种培育产肉性状更佳的欧拉藏绵羊新品种奠定基础。