黄颡鱼STAT3乙酰化位点验证及其与SIRTs去乙酰化酶的关系

为研究黄颡鱼STAT3乙酰化位点及其与SIRTs去乙酰化酶家族之间的关系,实验首先构建带Flag标签的STAT3过表达质粒及带HA、GFP标签的SIRTs过表达质粒,并对STAT3可能发生乙酰化的位点进行突变体构建;其次,转染STAT3及突变体和STAT3、SIRTs共转染于HEK293T细胞,利用免疫印迹、免疫沉淀和...     

黄颡鱼硒蛋白基因的克隆与分析

为探讨黄颡鱼硒蛋白selenow2a、selenop2和selenot2基因之间的关系，采用3′/5′ RACE PCR克隆得到3个基因的cDNA全长，分别为891、1 998和1 432 bp，其中ORF长度分别为288、828和600 bp，编码95、275和219个氨基酸。在线工具SECISerach3对3个基因的cDNA序列分析结果显示，它们都含有可以编码硒代半胱氨酸的终止密码子，以及在3′非编码区存在SECIS元件。通过氨基酸序列比对和系统发育树分析，发现selenow2a、selenop2和selenot2基因预测得到的氨基酸序列与斑马鱼（Danio rerio）氨基酸相似性分别为82.24%、66.19%和79.45%，而与斑点叉尾鮰（Ictalurus punetaus）的氨基酸相似性分别为94.74%、68.50%和90.95%，在发育树上则显示为树杈相接近。采用实时荧光定量PCR检测3个硒蛋白基因的mRNA在黄颡鱼心脏、肝脏、肌肉、脑、肠、脾脏、精巢和卵巢组织中的表达，结果显示其mRNA表达水平呈现组织特异性。表明3个基因拥有硒蛋白家族的特征，但在组织表达上具有特异性。     

广东地区吉富罗非鱼无乳链球菌病的流行情况与耐药性

为了调查广东省惠州、肇庆、珠海、湛江4个吉富罗非鱼主养区链球菌病的流行情况和耐药性,并进一步分析β-内酰胺酶基因与青霉素类药物的耐药性关系。本实验通过传统的方法对菌株进行分离纯化,扩增特异性基因cfb以及16s r DNA对各菌株进行鉴定;采用k-b法测定分离菌株的药物敏感性;通过PCR检测β-内酰胺酶类基因在分离菌株中的分布情况,并用Statistic6.0统计分析各β-内酰胺酶基因与青霉素类药物的耐药关系。实验结果表明,吉富罗非鱼无乳链球菌的阳性率从高到低的顺序为惠州(46.46%)湛江(43.24%)肇庆(17.30%)珠海(4.17%);药敏结果显示各地区无乳链球菌分离株对青霉素(耐药率为94.29%)和磺胺二甲基嘧啶(耐药率为86.40%)普遍耐药,对恩诺沙星最为敏感(耐药率为3.99%);β-内酰胺酶基因分布与细菌耐药性统计结果显示,无乳链球菌基因组中的9个β-内酰胺酶基因在各分离菌株中的分布呈高度多态性,其中SAG0658基因与氨苄青霉素抗性显著相关,提示SAG0658基因在无乳链球菌耐氨苄青霉素过程中发挥主要作用;此外,9个β-内酰胺酶基因与青霉素抗性无相关性,说明其在菌株对青霉素耐药过程中并未发挥明显作用,提示分离菌株对青霉素的耐药性可能依赖其他途径。