豫皖小麦田麦根腐平脐蠕孢交配型基因检测

麦根腐平脐蠕孢是一种可以引起多种植物病害的病原真菌，广泛分布于世界各地，对全世界的禾谷类作物生产带来了不可估量的损失。子囊菌交配型基因具有一定的广泛性，其编码的产物是调控子囊菌有性生殖的重要转录因子。为了对河南、安徽小麦田分离获得的麦根腐平脐蠕孢群体的MAT基因型进行探索，对在河南、安徽两省不同地区分离获得33株麦根腐平脐蠕孢菌株，利用麦根腐平脐蠕孢菌的MAT特异性引物进行基因型检测，并对不同交配型代表菌株进行生长形态、孢子形态观察和致病力测定，对麦根腐平脐蠕孢菌 MAT-2基因进行了系统发育分析。结果表明，河南、安徽两省存在两种MAT基因型的麦根腐平脐蠕孢群体，含有 MAT-2基因的菌株21株，含 MAT-1基因的菌株12株，比例为7∶4（ MAT-2∶ MAT-1）。两种交配型菌株的生长形态、孢子形态和致病力无显著差异，整体分析结果与物种的分子系统学分析表现出来的亲缘关系基本一致。     

陕西苹果树腐烂病菌(Cytospora spp.)不同分离株的生物学特性与致病性研究

 本研究从陕西分离得到61株苹果树腐烂病菌(Cytospora spp.),选取在PDA培养基上菌落特征差异明显的7个分离株,对其生物学特性及致病性进行研究。结果表明:各分离株在PDA、PSA、PMA和PEMA培养基上菌落生长较好,但在PDA上的菌落颜色和产孢情况差异很大。各分离株均能在5~32℃生长,但对35℃以上高温的适应性差异较大;所有分离株均能在pH4~9的条件下生长,最适pH为5~6;光照对各分离株的菌落生长有明显的促进作用。各分离株均可在Cza-pek培养基及供试的其它碳、氮源培养基上生长,其中以葡萄糖、麦芽糖和酵母膏为最佳碳、氮源。采用烫伤接种的方法,分别以菌饼和分生孢子悬浮液接种苹果离体枝条,两者均可侵染发病,但各分离株致病力差异显著,其中菌落颜色为黄褐色的菌株致病性强。因此,根据菌落颜色、致病性和生物学特性可将这7个分离株划分为3个类群:Ⅰ型为黄褐色强致病类群,但各分离株的产孢量有差异;Ⅱ型为乳白色不产孢的弱致病类群;Ⅲ型为灰褐色易产孢弱致病类群。其余54株分离物均属于Ⅰ型,这些结果说明陕西省苹果树腐烂病菌具有多样性和致病性分化现象。     

铁皮石斛DoAGL6基因及启动子克隆与分析

AGL6基因是MADS-box转录因子家族中的一员,是植物特有的转录调控因子,参与花器官形成,对唇瓣的形成起到关键作用。获得铁皮石斛DoAGL6基因及其启动子,并进行生物信息学分析,对DoAGL6基因启动子进行瞬时表达活性验证,可为进一步研究DoAGL6基因的功能提供参考。本研究克隆DoAGL6基因及其上游的启动子序列,利用在线软件对克隆得到的目的基因序列、启动子序列进行预测,分别构建由全长启动子和5'端缺失启动子驱动GUS的重组表达载体并瞬时转化拟南芥及铁皮石斛原球茎,探究其表达活性。结果表明,成功克隆了DoAGL6基因及其启动子,DoAGL6基因编码区长729 bp,编码243个氨基酸,编码蛋白分子式为C₁₂₁₃H₁₉₅₅N₃₅₉O₃₇₅S₁₂,预测亚细胞定位于细胞核中;保守结构域分析表明,DoAGL6具有保守的MADS-box和K-box两个结构域,属于MADS基因家族MIKC亚家族。启动子序列长度为1891 bp,顺式作用元件分析结果显示,DoAGL6基因启动子中除了核心启动元件TATA-box、CAAT-box外,还有许多其他顺式作用元件,如脱落酸响应元件（ABRE）、光反应顺式调节元件（G-Box）、茉莉酸甲酯响应元件（TGACG-motif）、MADS-box蛋白结合位点（GArG-Box）等。成功构建融合表达载体pCAMBIA1300-A1-promoter::GUS、pCAMBIA1300-A2-promoter::GUS、pCAMBIA1300-A3-promoter::GUS,拟南芥和铁皮石斛原球茎瞬时转化及GUS组织化学染色结果表明,随着启动子5'端缺失片段的增长,GUS活性逐渐降低,启动子活性逐渐减弱,即全长启动子A1（-1891~1）的活性最强,5'端缺失片段A2（-1488~1）次之,A3（-784~1）活性最弱。瞬时转化后的拟南芥和铁皮石斛原球茎GUS染色均呈现蓝色,但与对照相比均较浅,说明全长启动子和2个5'端缺失启动子都具有驱动GUS的活性,但启动活性都比CaMV35S启动子的启动活性弱。     

陕西省关中地区苹果树腐烂病调查初报

于2003-09~2004-06在陕西杨凌、周至、礼泉、淳化、黄陵等地,对苹果树腐烂病的发生情况,以及危害的严重程度进行了初步调查。结果显示,树龄与苹果树腐烂病的发生直接相关,表现为随着树龄的增加腐烂病危害逐渐加重。地区之间苹果树腐烂病严重程度存在着不同程度的差异,除地区间小气候外,管理水平也是影响腐烂病发生的重要因素。     

基于灰色系统理论对产业结构型综合发展系数的研究——以黑龙江省林业产业为例

灰色发展系数是灰色GM(1,1)模型的核心,在运用灰色GM(1,1)模型进行预测时,灰色发展系数一般为定值,然而在实际情况中发展系数往往是变动的,其中一个重要的影响因素就是产业结构的变动.该研究通过将次级产业发展系数进行产值加权,得到灰色产业结构型综合发展系数和灰色产业综合发展模型,并将其运用于黑龙江省林业产业发展分析与预测中,计算得出2013 ～2017年黑龙江省林业产业结构型综合发展系数分别为0.243 1、0.259 3、0.276、0.295 2、0.314 9,并据此对其相应年份的林业总产值进行了预测,取得了良好的应用效果.研究表明,分析产业结构型综合发展系数使产业发展情况更能体现出产业结构的影响.     

不同地区枣树干腐病病原鉴定及多样性分析

为有效防控枣树干腐病,以47株不同来源的枣树干腐病斑分离物为材料,采用ITS和EF-1α基因序列比对分析以及室内接种方法,对枣树干腐病病原菌进行鉴定,并分析其分布特点及致病力差异。结果显示,47株不同来源的枣树干腐病病原菌包括葡萄座腔菌（Botryosphaeria dothidea）、希氏座腔菌（Spencermartinsia viticola）、平截色二孢（Diplodia mutila）、色二孢菌（D. seriata）和火炬树暗葡腔菌（Phaeobotryon rhois）5个种,其中,S. viticola的分离频率最高,约65.96%,B. dothidea的分离频率次之,为17.02%;河南和河北的优势病原菌分别为葡萄座腔菌（B. dothidea）和色二孢菌（D. seriata）,山西、甘肃和宁夏的优势病原菌均为希氏座腔菌（S. viticola）;枣树干腐病的5种病原菌中B. dothidea的致病力最强,P. rhois的致病力最弱;病原菌S. viticola在山西和河北的分离株致病力较强,在河南、宁夏和甘肃的分离株致病力较弱。以上研究表明,枣树干腐病的病原主...     

苹果树Valsa malicola的发现及其致病性研究

从苹果树腐烂病病斑上分离得到分离物,其在PDA培养基上菌落颜色为乳白色,30d未形成产孢体,在37℃高温下不能生长。在20%苹果树皮煎汁培养基（ABA）上于25℃培养6d即可形成大量微小（直径0.1～0.5mm）的产孢体,每皿（直径9cm）数量平均达140～250个。根据其在枝条上产生的有性型和无性型子实体的形态特征,鉴定为Valsa malicola Z.Urb.及其无性型Cytospora schulzeri Sacc.＆P.Syd。进一步的ITS序列聚类结果也表明,陕西各分离株与美国和南非的V.malicola聚为一类。采用菌丝块接种烫伤的离体苹果枝条（秦冠、富士）,发现其在伤口部位扩展缓慢、病斑面积很小,但8～9d后仍可形成大量产孢体,而常见的致病种V.ceratosperma形成的病斑面积很大,在接种后20d才能在接种枝条上形成产孢体。     

防治苹果树腐烂病杀菌剂的室内筛选

 The inhibitory effects of 10 fungicides on apple tree valsa canker were compared on dishes and twigs. The results showed that conidia germination and mycelial growth were inhibited by all fungicedes tested. The EC₅₀ value of Difenoconazole was 6. 1×10^-3μg·mL^-1, the lowest among tested fungicide in inhibiting conidia germination. Tebuconazole and Imazalil also showed obvious inhibition effect. Thiophanatemethyl was the least efficient with the EC₅₀ value 2.6×10¹ μg·mL^-1. Difenoconazole also showed the highest activity for inhibiting mycelial growth with ECho value of 2.3×10^-2 μg·mL^-1. Tebuconazole was better than other fungicide. Thiophanate-methyl and Propineb were the least efficient with quite high EC₅₀ value. Furthermore, the size of the lesion after inoculation on excised twigs also revealed that Difenoconazole was most efficient because it showed the smallest lesion of 394 mm² compared with other tested fungicides. So Difenoconazole and Tebuconazole could be used to control apple tree valsa canker in field to subsititute forbided fungicides such as asomate.     

葡萄座腔菌(Botryosphaeria dothidea)全基因组分泌蛋白的预测及功能分析

 葡萄座腔菌(Botryosphaeria dothidea)是引起多种果树和林木枝干溃疡病和果实腐烂病的重要病原菌。为明确葡萄座腔菌的致病机理,采用SignalP、WoLF PSORT、TMHMM、GPI-SOM等软件,对葡萄座腔菌全基因组14 998条蛋白序列进行了分泌蛋白预测和功能分析。结果表明B.dothidea全基因组编码蛋白中有851条序列具有典型的分泌蛋白特征,占蛋白总数的5.67%,其长度主要分布在100~700个氨基酸范围内。信号肽的分析结果表明,以19个氨基酸为信号肽的分泌蛋白数目最多,非极性氨基酸丙氨酸(A)在信号肽中的使用频率最高,而有带电侧链的天冬氨酸(D)和谷氨酸(E)使用频率最低,信号肽-3和-1位置的氨基酸相对保守,其切割位点属于典型的A-X-A型。对分泌蛋白功能预测结果表明,578个分泌蛋白获得了功能注释,其功能主要涉及碳水化合物的运输、代谢过程,蛋白翻译后修饰和氨基酸代谢、运输过程。分泌蛋白中效应蛋白(effector)预测结果表明,B. dothidea分泌蛋白中共有119个潜在的效应蛋白,其中11个可被PHI数据库注释到,其与引起其他植物病原菌致病力变化的致病效应蛋白具有较高的相似性。碳水化合物活性酶类(CAZymes)的预测结果表明,B. dothidea分泌蛋白组中共有279个CAZymes,其中GHs家族最多。这些结果的获得为今后进一步筛选B. dothidea的效应蛋白,明确B. dothidea的致病机理,以及筛选寄主新的抗性基因提供了必要的基础。