MFLP分子标记技术及其应用

微卫星锚锭片段长度多态性(MFLP)是建立在PCR技术基础上、结合了扩增片段长度多态性(AFLP)和微卫星锚锭引物技术(SSR-anchor primer)双重原理的新一代分子标记技术。与其他标记技术相比,MFLP具有分辨率高、重复性好、多态性强等优点。本文介绍了MFLP的原理、特点、技术流程,并阐述和讨论了其在遗传连锁图谱构建、目的基因定位、遗传多样性研究、标记辅助育种等方面的应用及前景,旨在为相关研究提供参考。     

高温胁迫诱导烟草对TMV的抗性效应研究

通过室内盆栽和大田试验开展了高温诱导烟草对TMV抗性效应研究,筛选出烟草抗TMV的适宜高温诱导条件,初步研究分析了高温诱导烟草抗病毒的机理,为烤烟生产过程中烟草病毒病绿色防控手段的开发应用提供理论依据。结果表明:感染TMV的烟株经过高温胁迫处理后,表现出对TMV显著的抑制作用,其中,感染病毒但未表现明显症状或轻微发病的烟株通过高温处理可表现更好的抗性效果。此外,高温胁迫处理使烟株症状减轻和生长恢复并不是高温胁迫对烟株或烟株体内TMV直接作用的结果,而是高温胁迫影响了烟草-TMV的互作,激发了寄主的一系列抗病防卫反应。     

过敏素类蛋白研究进展

从过敏素类蛋白的结构、性质、诱导抗病反应的特点、及其在植物抗病反应信号传导和基因工程研究中的价值等方面进行了概述，提出了存在的问题，对其发展前景进行了展望．     

不同地区枣树干腐病病原鉴定及多样性分析

为有效防控枣树干腐病，以47株不同来源的枣树干腐病斑分离物为材料，采用ITS和EF-1α基因序列比对分析以及室内接种方法，对枣树干腐病病原菌进行鉴定，并分析其分布特点及致病力差异。结果显示，47株不同来源的枣树干腐病病原菌包括葡萄座腔菌（Botryosphaeria dothidea）、希氏座腔菌（Spencermartinsia viticola）、平截色二孢（Diplodia mutila）、色二孢菌（D. seriata）和火炬树暗葡腔菌（Phaeobotryon rhois）5个种，其中，S. viticola的分离频率最高，约65.96%,B. dothidea的分离频率次之，为17.02%；河南和河北的优势病原菌分别为葡萄座腔菌（B. dothidea）和色二孢菌（D. seriata），山西、甘肃和宁夏的优势病原菌均为希氏座腔菌（S. viticola）；枣树干腐病的5种病原菌中B. dothidea的致病力最强，P. rhois的致病力最弱；病原菌S. viticola在山西和河北的分离株致病力较强，在河南、宁夏和甘肃的分离株致病力较弱。以上研究表明，枣树干腐病的病原主...     

抗病基因VpPR10转化‘砀山酥梨’及转化条件的优化

将源自中国野生华东葡萄的抗病基因——病程相关蛋白基因导入‘砀山酥梨’,并对转化系统条件进行优化。首先将VpPR10基因重组于中间表达载体pWR-Ⅱ,得到重组质粒pWR-Ⅱ-VpPR10;继而以改进冻融法将其导入根癌农杆菌EHA105,再利用根癌农杆菌介导的叶盘转化法进行遗传转化。根癌农杆菌浓度OD600=0.5,离体叶片侵染5min,在含有100μmol·L-1乙酰丁香酮的培养基中暗处共培养48h有利于砀山酥梨的遗传转化;经PCR分析、Southern blot和RT-PCR检测,证明目的基因VpPR10已导入并整合到砀山酥梨基因组中;转化率为1.08%。     

培养基和培养条件对‘砀山酥梨’转基因试管苗生根的影响

为优化‘砀山酥梨’转基因试管苗的生根条件,解决梨试管苗生根的难题,以‘砀山酥梨’转基因试管苗作为试验材料,研究了基本培养基类型、培养方式、不同的间苯三酚(PG)浓度、不同的IBA浓度和暗培养时间对生根的影响。结果表明:采用两步生根法,试管苗在附加80 mg/L PG和20 mg/L IBA的ASH基本培养基上暗培养7d后转入附加80 mg/L PG的ASH培养基上进行光照培养,生根率达到91.7%。     

小麦条锈菌MFLP分子标记体系的建立与优化

【目的】建立并优化小麦条锈菌的MFLP技术体系。【方法】以小麦条锈菌混合菌种为材料,通过对DNA提取、限制性内切酶2次酶切、PCR双重扩增等试验因素的选择优化,建立适用于小麦条锈菌的MFLP分析体系。【结果】改良的CTAB/SDS法有较好的破壁效果,所提取的DNA品质良好,完全符合MFLP的操作要求。优化确定的最佳MseⅠ酶切反应时间为4h,预扩增最适退火温度为55℃,选择性扩增使用的模板为预扩增产物的100倍稀释物,其最适退火温度为58℃。【结论】建立的MFLP技术体系可提供清晰、稳定的MFLP指纹图谱,为小麦条锈菌等专性寄生菌的群体遗传学与流行学研究提供了新的技术手段和方法。     

'砀山酥'梨叶片再生体系的建立

以‘砀山酥’梨(Pyrus bretschneidericv.Dangshansu)叶片为材料,研究基本培养基种类、植物生长调节物质浓度、抗氧化剂、碳源对再生的影响,以及不同浓度生长激素对再生芽生根的影响。结果表明:NN69培养基是叶片再生不定芽的最佳培养基,诱导不定芽的分化以培养基NN69+6-BA 3.0 mg/L+IBA 0.2 mg/L+琼脂6 g/L为佳;AgNO3比活性炭和PVP更利于叶片的诱导;与蔗糖相比山梨醇更适宜作为叶片再生的碳源,最佳浓度是10 mg/L,叶片再生频率最高为74.03%,平均再生芽数1.01。生根培养基以ASH+IBA 10 mg/L+间苯三酚80 mg/L+蔗糖15 g/L+琼脂6 g/L为佳,生根率高且根粗壮。     

河南烟草马铃薯Y病毒体外特性及其与 CMV,TMV的相互作用研究

用生物学方法研究了河南烟草马铃薯Y病毒(PVY)的体外特性．结果表明，河南PVY的稀释限点为10^-6～10^-7．致死温度为70～75℃，体外存活期为4～6d，在PVY与CMV，TMV相互作用的研究中发现混合侵染的症状比单独侵染严重．且表现症状不同．     

玉米矮花叶病毒株系、寄主范围及辅助成分的研究

对纯化的玉米矮花叶病毒进行株系鉴定，因人工接种约翰逊草不侵染，故定为MDMV-B株系；4科36种植物的接种试验表明。19种禾本科植物可作为其其寄主，以不同病毒汁液进行的蚜虫薄膜饲毒试验表明，存在不同于Con A的一种辅助成分。