香蕉GAPDH基因家族的生物信息学及转录表达分析

从香蕉基因组数据库和NCBI数据库中检索香蕉GAPDH基因家族的所有成员,并采用生物信息学方法对其进行亚细胞定位、进化树分析和保守结构域预测。克隆测序发现,巴西蕉内的GAPDH基因家族成员序列与小果野蕉基因组数据库中提供的序列基本一致,同源性超过98%。转录表达分析表明,GAPDH基因家族成员在巴西蕉不同器官的表达模式多样:MaGAPCP1,MaGAPC6/8/10/11成组成型表达,其余的基因则在各组织器官间成差异型表达,且差异型表达的基因在不同组织器官中表达模式也不相同,组成型表达的基因在不同组织器官中表达模式虽相同,但表达量有差异。GAPDH基因家族成员在表达模式上的多样化,可能暗示其功能的多样化,这种多样化可能是在进化过程中为适应环境而出现的功能分化或冗余。结果为进一步研究GAPDH基因家族成员在香蕉生长、发育,非生物胁迫,果实后熟等重要生物学过程中的功能奠定基础。     

文丘里阀密闭箱PAO检漏及腔体的消毒效果评价

P3实验室通风管道中文丘里阀由于其结构设计中存在泄漏风险,在文丘里阀外周安装密闭箱可消除这一风险,但仍需对该密闭箱是否存在泄漏风险以及箱体内部消毒效果进行评价。本文专门介绍了文丘里密闭箱PAO检漏及其箱体内部H2O2消毒后的消毒效果评价方法。     

浙江省猪流行性腹泻病毒S1基因克隆与序列分析

本研究旨在分析浙江省猪流行性腹泻病毒（PEDV）的遗传变异情况,利用实时荧光定量RT-PCR方法对2015-2016年浙江省内收集的58份猪腹泻样品进行检测,设计2对特异性引物对16份来自浙江不同地区PEDV阳性样品的S1基因进行RT-PCR扩增、克隆及序列测定,并应用生物信息学软件对16株PEDV浙江毒株的S1基因进行分析。结果显示,48份样品为PEDV阳性。16个毒株之间S1基因片段核苷酸和氨基酸同源性分别为93.1%~99.8%和92.4%~99.7%,与疫苗株CV777的核苷酸同源性为92.3%~95.7%,氨基酸同源性为90.7%~95.7%。与疫苗株CV777相比,15个毒株在S1基因区域存在着15个核苷酸插入和6个核苷酸缺失。系统进化分析表明,大部分毒株与国内外流行的基因Ⅱ型PEDV毒株亲缘关系较近,15个毒株与2011-2016年中国流行的基因Ⅱ型PEDV毒株核苷酸和氨基酸同源性均在96.6%以上;与早期分离的CV777株、LZC株亲缘关系较远,核苷酸和氨基酸同源性均在93.4%以下;1个毒株（ZJ16NB6）与国内外流行的S-INDEL样毒株较近,核苷酸和氨基酸的同源性较高,均在98.4%~99.5%之间。本研究结果表明,2015-2016年浙江省仔猪腹泻主要是由PEDV感染引起的,浙江省流行的PEDV同时存在着基因Ⅱ型和S-INDEL样毒株,但以基因Ⅱ型毒株为主。     

浙江省动物血清库建设与信息化管理

动物血清库在动物疫病监测、新发病追踪溯源、流行病学研究等方面发挥了重要作用。国家动物血清库自建设运行以来,为动物免疫情况调查和流行病学调查研究等方面提供了丰富的样本素材。本文分析了浙江省结合计算机数据库管理系统、二维码信息系统、超低温冰箱等而建立的一套动物血清库系统,从硬软件设备、样品录入、样品质量与人员运维管理等层面进行了详阐,以期实现省级动物血清库的系统化与信息化管理,助力今后动物疫病研究工作的有效开展。     

浙江省猪流行性腹泻病毒S1基因克隆与序列分析

本研究旨在分析浙江省猪流行性腹泻病毒(PEDV)的遗传变异情况,利用实时荧光定量RT-PCR方法对2015-2016年浙江省内收集的58份猪腹泻样品进行检测,设计2对特异性引物对16份来自浙江不同地区PEDV阳性样品的S1基因进行RT-PCR扩增、克隆及序列测定,并应用生物信息学软件对16株PEDV浙江毒株的S1基因进行分析。结果显示,48份样品为PEDV阳性。16个毒株之间S1基因片段核苷酸和氨基酸同源性分别为93.1%~99.8%和92.4%~99.7%,与疫苗株CV777的核苷酸同源性为92.3%~95.7%,氨基酸同源性为90.7%~95.7%。与疫苗株CV777相比,15个毒株在S1基因区域存在着15个核苷酸插入和6个核苷酸缺失。系统进化分析表明,大部分毒株与国内外流行的基因Ⅱ型PEDV毒株亲缘关系较近,15个毒株与2011-2016年中国流行的基因Ⅱ型PEDV毒株核苷酸和氨基酸同源性均在96.6%以上;与早期分离的CV777株、LZC株亲缘关系较远,核苷酸和氨基酸同源性均在93.4%以下;1个毒株(ZJ16NB6)与国内外流行的S-INDEL样毒株较近,核苷酸和氨基酸的同源性较高,均在98.4%~99.5%之间。本研究结果表明,2015-2016年浙江省仔猪腹泻主要是由PEDV感染引起的,浙江省流行的PEDV同时存在着基因Ⅱ型和S-INDEL样毒株,但以基因Ⅱ型毒株为主。     

浙江省一规模猪场副猪嗜血杆菌的分离鉴定

2017年12月,浙江省杭州市萧山区某规模猪场保育舍猪群出现高热(41.5℃)、咳嗽、腹式呼吸、关节肿胀伴有跛行和被毛粗乱等临床症状。为确诊疾病,明确病因,剖检2头40日龄病死猪,用接种环刮取肺脏病料接种血平板,再用金黄色葡萄球菌作交叉划线,于37℃5%CO2条件下培养24 h。结果显示:病料培养血平板上生长出大量半透明、不溶血小菌落,菌落直径为0.5~1 mm;靠近金黄色葡萄球菌菌苔的菌落较大,随着与葡萄球菌生长线距离的增加而变小或不生长,呈"卫星现象"。挑取可疑菌落进行纯化培养,将纯培养物制成菌悬液,以DNA纯化试剂盒提取DNA并进行PCR检测。扩增产物电泳后,被检菌株电泳道出现一条1 090 bp条带,表明该菌株为副猪嗜血杆菌。     

细胞分裂素的生物合成及信号途径的研究进展

主要对细胞分裂素的生物合成及信号途径进行系统阐述。     

一起规模猪场胸膜肺炎放线杆菌的分离鉴定及药敏试验

正胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)是猪胸膜肺炎的病原菌,为一种革兰氏阴性、有荚膜、具有典型球杆菌形态的小杆菌。根据是否需要NAD(烟酰胺腺嘌呤二核苷酸),将其分为生物I型(依赖于NAD)和生物II型(不依赖于NAD)。生物I型在葡萄球菌菌落周围形成菌落呈"卫星"状,培养24 h后形成0.5~1 mm     

一种简便有效的香蕉小分子RNA提取方法

【目的】提供一种简单、经济、高效的香蕉小分子RNA提取方法,以满足RT-PCR、Northern杂交等分子生物学研究的需要。【方法】以巴西蕉(Musa acuminata L.AAA group,‘Brazilian’)的叶片、雄花、果实和根系为材料,利用改良的CTAB法,结合使用PEG8000分级沉淀DNA和大分子RNA,从而获得小分子RNA。【结果】琼脂糖凝胶电泳显示小RNA带型清晰,无DNA和大分子RNA干扰,说明小RNA质量较好。获得的小RNA经紫外光谱分析其A260/A280的比值在1.872~2.020,产量可达35μg·g-1。以提取的各组织小分子RNA为模板,利用茎环RT-PCR方法在香蕉不同组织小RNA中均检测到mi RNA156a,其扩增片断大小约为70 bp,且测序结果与预测的香蕉mi R156a序列一致。【结论】本实验提供了一种简便高效的香蕉小分子RNA提取方法,可满足RT-PCR、Northern blotting及小RNA文库构建等后续分子生物学研究的需要,为研究人员在实际工作中提供了更多的选择。     

一种快速提取香蕉叶片总核酸、总RNA和总DNA的新方法

在SDS法的基础上,以富含多糖、多酚等次生代谢物质的香蕉叶片为材料,通过选择性添加适量5 mol/L KAc(pH4.8)或不同体积无水乙醇分别提取香蕉叶片总核酸、总RNA(不含DNA)和总DNA(不含RNA)。结果表明:不添加KAc的可提取到总核酸;添加1/3体积和2/3体积的KAc得到总RNA,添加1/3体积无水乙醇处理得到总DNA。该结果获得一种简单、快速,能在1次实验中添加不同试剂提取香蕉叶片总核酸、总RNA和总DNA的新方法。