应用电导法配合Logistic方程确定‘多福’甜椒的抗寒性

为利用低温半致死温度(LT50)快速鉴定评价甜椒的抗寒性,本研究以‘多福’甜椒叶片为试材,通过测定不同低温强度(12℃,8℃,4℃,0℃,-4℃)和不同处理时间(0 h,1 h,2 h,4 h,8 h,16 h,24 h)下的相对电导率(REC)变化情况,分析温度和处理时间对REC的影响,并拟合应用Logistic方程计算其LT50。研究结果表明,甜椒叶片REC随处理温度的降低和处理时间的延长呈现逐渐上升趋势,当低温处理8 h以上时,甜椒叶片REC均随着处理温度的降低而呈"S"形上升,其变化规律符合Logistic方程,拟合度R2在0.975~0.980范围内,由此计算出"S"形拐点对应的温度即为甜椒叶片的LT50,其值在6.36℃~8.71℃之间,这可作为鉴定评价甜椒抗寒性的重要指标,为进一步研究甜椒品种的抗寒性及抗寒品种的选育提供理论依据。     

长走茎类野生蕉田间保存技术

长走茎类野生蕉引种时保留部分地下茎;田间保存采用小区块种植,区块间设置保护行作为品种(品系)间缓冲;保护行内先行种植栽培香蕉培育蕉园下层共生植物;截杆处理促进野生蕉无性繁殖,新生的吸芽与母株通过地下走茎相连,共同组成生长较为稳定的野生蕉株丛,有效提高长走茎类野生蕉引种及田间保存成活率,为野生蕉种质资源的田间保存提供技术参考。     

闽粤血叶兰野生种质资源引种研究初报

引种福建、广东血叶兰野生种质资源,进行形态比较、移栽等初步研究,以期为血叶兰野生种质资源的引种、保护、利用提供参考。研究结果显示,两省血叶兰野生资源按照外观形态特征大致可分为7份种质,在漳州地区1-6月份,月均温15℃至30℃间,均可进行引种移栽,3-6月份引种有利于其地下茎的二次萌发;除"绿密银"种质成活率较低外,其余种质引种成活率均可达70%以上;在一定范围内温度越高引种移栽成活率越高;相近温度条件下,引种地的距离可直接影响到引种移栽成活率,距离越近,成活率越高。     

天宝野生蕉花粉活力快速检测方法筛选

以天宝野生蕉Musa spp.AB为材料,采用不同染色方法检测天宝野生蕉花粉活力,对野生蕉花粉进行离体萌发培养,通过染色检测与花粉培养结果之间的对比验证,筛选快速、准确检测野生蕉花粉活力的方法。联苯胺——甲萘酚染色法处理花粉形态较模糊;醋酸洋红染色法、I2-KI染色法、TTC染色法,花粉形态清晰,均能取得较好的染色效果;联苯胺——甲萘酚染色法、醋酸洋红、I2-KI染色法检测结果与花粉培养结果差异极显著;TTC染色法出现深红、浅红两种染色差异,其结果与花粉培养结果相关性最好,筛选TTC染色法作为野生蕉花粉活力快速检测方法。     

利用RAPD、ISSR分子标记分析野牡丹属亲缘关系

采用ISSR和RAPD分子标记技术对9个种44份野牡丹属种质资源进行了亲缘关系分析。结果表明:11条ISSR引物共扩增出91条谱带,其中多态性条带90条,多态性条带的比率为98.9%;16条RAPD引物共扩增出113条谱带,其中101条多态性条带,多态性比率为89.38%。2种分子标记相比较,ISSR分子标记检测出的多态性比率更高。44份野牡丹属种质明显聚为2组,种质资源遗传相似系数在0.61~0.88,平均相似系数0.75。基于不同引物的条带组合构建了供试的44份野牡丹属种质资源的ISSR和RAPD指纹图谱,采用这2种指纹图谱可对供试的所有野牡丹属种质资源进行鉴定。     

甘蔗黄叶病及其病原分子生物学研究进展

甘蔗黄叶病是由甘蔗黄叶病毒(Sugarcane yellow leaf virus,SCYLV)引起的一种病毒病害,在全球主要甘蔗种植国家或地区普遍发生,危害日益严重。SCYLV经甘蔗蚜虫以持久性方式传播,在寄主植株内主要侵染韧皮部组织。该病毒起源于黄症病毒科属间基因重组,被国际病毒分类命名委员会确认为黄症病毒科马铃薯卷叶病毒属成员。文章综述了甘蔗黄叶病毒生物学特征、病害发生和危害、病原鉴定和检测、分子进化和遗传多样性、基因组结构和基因功能以及抗病转基因等方面研究进展,并对甘蔗黄叶病抗病育种和防治措施作了讨论。     

甘蔗黄叶病毒P0蛋白分子特性及其抑制RNA沉默活性

【目的】甘蔗黄叶病（yellow leaf,YL）是一种主要的甘蔗病毒病害,在全球多数甘蔗种植国家或地区普遍发生,已对甘蔗生产造成严重威胁。其病原为甘蔗黄叶病毒（Sugarcane yellow leaf virus,SCYLV）,属于黄症病毒科马铃薯卷叶病毒属成员。研究SCYLV编码的沉默抑制子P0蛋白的分子特征、保守结构域及其在自然寄主甘蔗上抑制RNA沉默的功能,为下一步从RNA沉默水平解析SCYLV致病分子机理奠定基础。【方法】利用RT-PCR克隆技术获得SCYLV中国分离物CHN-FJ4编码的RNA沉默抑制子基因P0及其两个缺失突变体P0^Δ2-15（N端缺失15个氨基酸）和P0^Δ155-256（C端缺失102个氨基酸）,然后定向克隆到单子叶植物表达载体pUbi-nos（空载体）上,获得重组质粒。利用甘蔗嫩叶组织瞬时表达系统鉴定病毒RNA沉默抑制子技术,结合ImageJ软件定量分析P0及其两个缺失突变体抑制外源基因EYFP瞬时表达活性的变化。番茄丛矮病毒（Tomato bushy stunt virus,TBSV）编码的P19作为沉默抑制子阳性对照。【结果】P0核苷酸序列的遗传进化分析结果显示,所获得的SCYLV病毒分离物CHN-FJ4为BRA基因型,与其他BRA基因型分离物氨基酸序列一致性为96.1%-98.4%。利用MEME在线软件预测P0蛋白的保守结构域,结果表明P0蛋白含有3个显著的保守区。分别位于第1-60、76-125和161-210氨基酸残基。通过Datamonkey在线服务器（http://www.datamonkey.org）提供的5种运算方法分析P0蛋白氨基酸位点的选择压力,结果显示P0蛋白具有8个氨基酸正向选择位点。将含有P0及其缺失突变体的重组质粒连同含EYFP报告基因的pTEM12质粒采用基因枪轰击法分别导入甘蔗嫩叶组织细胞,轰击后48-120 h,P0和P19逐渐地提高EYFP荧光表达点数和荧光表达水平;在120 h,与pUbi-nos空载体（不含沉默抑制子）对照组相比,P0和P19均显著地提高甘蔗嫩叶组织EYFP荧光表达点数和荧光表达水平,分别达1.6倍和4.0倍以上。P0与P19抑制RNA沉默活性水平没有显著差异（P>0.05）。P0蛋白N端缺失15个氨基酸（P0^Δ2-15）和C端缺失102个氨基酸（P0^Δ155-256）均丧失了沉默抑制子的功能,荧光表达与不含沉默抑制子对照组相当。【结论】在甘蔗嫩叶组织EYFP瞬时表达体系上,P0能够显著地提高外源基因EYFP表达水平。P0蛋白N端15个氨基酸和C端102个氨基酸含有显著的保守区域,是P0发挥沉默抑制子功能所必需的。     

两种辣木DNA提取方法比较

以辣木嫩叶为材料,分别通过改良CTAB和试剂盒法提取7个品系辣木的总DNA,结果表明,试剂盒法提取的辣木DNA在琼脂糖凝胶电泳中条带清晰,DNA纯度高,完整性好,且操作简单,快速,满足分子标记中模板的需要,解决了辣木提取中蛋白杂质多的问题。因此,在辣木分子标记实验中,选择试剂盒法提取辣木总DNA是较为适宜的。     

盐胁迫对甜椒种子萌发、幼苗生长及PSⅡ光化学特性的影响

采用不同浓度的NaNO_3、Na_2SO_4及其混合盐模拟次生盐胁迫,对甜椒种子和幼苗进行处理,研究次生盐分胁迫对甜椒种子萌发、幼苗生长及光系统Ⅱ(PSⅡ)光化学特性的影响。结果表明:盐分胁迫显著抑制了甜椒种子萌发和幼苗生长,表现为盐分胁迫下甜椒种子发芽指数、胚根长度和侧根数、幼苗株高和根长显著下降,叶片相对电导率和丙二醛(MDA)含量显著增大,且盐分浓度越大,甜椒所受抑制程度越强。随着盐分浓度的增大,甜椒叶片PS最大光化学效率(φ_(Po))、用于电子传递的量子产额(φ_(Eo))、捕获的激子将电子传递到电子传递链中超过Q_A~-的其它电子受体的概率(φo)、光合性能指数(PI_(ABS))、光合推动力(DF_(ABS))逐渐降低,反应中心吸收的光能用于热耗散的量子比率(φ_(Do))逐渐升高。与φ_(Po)相比,PI_(ABS)能更好地反应盐分胁迫对甜椒叶片光合性能的影响。     

辣木SCoT-PCR反应体系建立和引物筛选

SCoT-PCR是一种单引物扩增分子标记方法,具有丰富的多态性,低廉的成本和较好的引物通用性,已在多种植物上加以应用。本研究采用L16(45)正交试验设计,对SCoT-PCR的影响因素进行优化试验,建立了适用于辣木的最佳SCoT-PCR反应体系,并对40条SCoT引物进行筛选。结果表明,25μL最佳反应总体积包含2.0 mmol/L Mg~(2+),0.3 mmol/L d NTPs,1.5 U ExTaq,1.25μmol/L引物,50 ng DNA模板,其中,dNTPs对该体系的影响程度最大。此外,40条SCoT引物共筛选出15条多态性好且适合辣木扩增的引物。该体系的建立为今后利用SCoT分子标记分析辣木种质资源鉴定与多样性、构建指纹图谱和辅助选择育种提供新的技术手段。