禽白血病病毒J亚群诱导蛋鸡群多种肿瘤

2009年8月,山东泰安某海兰褐商品蛋鸡场,开产后产蛋率只有60％～70％,31周龄时,死亡率突然增加,最高达20％.患病鸡经大体剖检、病理组织学、PCR和免疫组织化学检测确诊为J亚群禽白血病.病理组织学检测发现送检鸡除了髓细胞瘤外,还存在明显的纤维肉瘤、组织肉瘤、腺癌和血管内皮瘤等肿瘤.纤维肉瘤单独存在,组织肉瘤、腺癌和血管内皮瘤分别和髓细胞瘤混合存在,本文详细描述了各肿瘤的组织学特点.ALV-J从肉种鸡传向商品蛋鸡后引起肿瘤谱扩展的原因和机制值得进一步研究.     

实时荧光定量RT-PCR检测禽白血病病毒J亚群

将禽白血病病毒J亚群(ALV-J)NX0101毒株接种1日龄和7日龄SPF雏鸡并设阴性对照组,采用实时荧光定量RT-PCR方法,定期检测病毒在体内的复制情况。根据GenBank发表的ALV-Jenv基因保守序列(AY897227)设计1对特异性引物扩增目的基因;根据鸡的3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)基因序列(K01458),在保守区内设计1对引物扩增内参照基因,分别克隆入质粒作为标准品制作标准曲线,采用SYBR GreenⅠ染料建立荧光定量PCR法,并对方法的特异性、敏感性和重复性进行评价。结果显示,标准曲线的Ct值与标准品浓度的对数值之间存在线性关系;最低每个反应可检测到60个拷贝的病毒数,比常规PCR灵敏度高1 000倍。检测结果分别采用绝对定量法和相对定量法进行分析,都达到了良好的效果。通过对病毒含量变化的检测发现,在雏鸡4周龄时,2个接毒组ALV-J病毒突然呈对数式增长。据此分析ALV-J病毒在体内经过3~4周潜伏后,突然呈暴发式增长,这种情况可能和临床表现的免疫抑制直接相关。结果表明,本试验建立了一种特异性强、敏感性高、可定量分析ALV-J病毒增殖的方法,为进一步相关研究奠定了基础。     

禽白血病病毒J亚群自然感染商品蛋鸡致瘤性新特征

2009年8月,山东省邹城市某海兰褐蛋鸡群,160日龄发病,死亡率为7％.患鸡经大体剖检、病理组织学、PCR和免疫组织化学等检测,确诊为禽白血病病毒J亚群(ALV-J)感染.病理组织学检测发现,病鸡单独患血管瘤,或髓细胞瘤和纤维肉瘤多发性出现,由ALV-J自然感染引起同一鸡体出现髓细胞瘤和纤维肉瘤尚属国内外首次报道.肝脏研磨接种DF-1细胞培养7d后传3代,细胞无病变,ELISA检测感染细胞上清ALV p27抗原阳性,进一步确诊此鸡群为ALV感染.对病变严重的鸡进行病毒分离及ALV-J gp85基因同源性比较显示与原型株HPRS-103的同源性最高,达94.1％.本研究丰富了ALV-J感染的临床诊断依据,并为ALV-J在我国蛋鸡群中多潜能致瘤机制的研究提供了科学基础.     

银杏叶提取物对热应激致鸡心肌细胞氧化损伤的保护作用研究

本试验旨在研究银杏叶提取物（Ginko biloba extract,GBE）对热应激致鸡心肌细胞氧化损伤的保护作用。取12日龄AA肉鸡心脏制备鸡原代心肌细胞,向原代心肌细胞培养板中分别加入0、5、10、50、100、150 mg/mL GBE,CCK-8试剂盒检测心肌细胞存活率;将原代心肌细胞以1×10⁴个/孔接种于96孔板,培养48 h,分别加入0、5、10、50、100、200、500、1 000 μg/mL GBE,Hoechst 33258检测心肌细胞凋亡率,确定最适GBE浓度。42℃热应激处理（0、0.5、1、2和4 h）建立心肌细胞损伤模型,ELISA试剂盒检测乳酸脱氢酶（LDH）、细胞丙二醛（MDA）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）含量,以及超氧化物歧化酶（SOD）活性;Western blotting检测Hsp72蛋白表达。结果显示,高浓度GBE具有细胞毒性,50、100、150 mg/mL GBE能极显著抑制细胞生长（P<0.01）,50 μg/mL GBE能够极显著提高细胞增殖率（P<0.01）。热应激后细胞发生凋亡,细胞内MDA、LDH含量增加,SOD活性、GSH-Px含量减少,产生氧化损伤;GBE可以降低热应激时细胞LDH和MDA的含量,增加SOD活性和GSH-Px的含量,热应激2、4 h,GBE处理效果明显。此外,GBE可增加心肌细胞中Hsp72蛋白的表达。综上所述,GBE能降低热应激状态下心肌细胞的氧化损伤,其机制可能与提高抗氧化酶活性及提高Hsp72的表达有关。     

微贮笋壳对湖羊生长性能、肉品质及血液生理生化指标的影响

试验旨在研究微贮笋壳替代花生秧对湖羊生长性能、肉品质、血清生化指标和血常规的影响。选取2月龄、体重(12.41±0.21)kg的健康公湖羊18只,随机分为3组,每组6只。对照组以花生秧为粗料(占比60%),试验组分别以微贮笋壳和花生秧(各占30%)、微贮笋壳(占比60%)为粗料,预试期10d,正试期60 d。结果表明:与对照组相比,微贮笋壳部分替代花生秧对湖羊日增重、耗料增重比以及生理生化指标无显著影响,而微贮笋壳完全替代花生秧能提高湖羊平均日增重(P<0.05)、降低耗料增重比(P<0.05),有降低血清胆固醇含量(P=0.065)和血糖含量(P=0.092)的趋势,不影响肝肾功能以及其他血清生化和血常规指标。综上所述,微贮笋壳替代花生秧能提高湖羊生长性能,有降低血清胆固醇和血糖的作用,不影响湖羊健康状况。     

银杏叶提取物对热应激致鸡心肌细胞氧化损伤的保护作用研究

本试验旨在研究银杏叶提取物(Ginko biloba extract,GBE)对热应激致鸡心肌细胞氧化损伤的保护作用。取12日龄AA肉鸡心脏制备鸡原代心肌细胞,向原代心肌细胞培养板中分别加入0、5、10、50、100、150 mg/mL GBE,CCK-8试剂盒检测心肌细胞存活率;将原代心肌细胞以1×104个/孔接种于96孔板,培养48h,分别加入0、5、10、50、100、200、500、1 000μg/mL GBE,Hoechst 33258检测心肌细胞凋亡率,确定最适GBE浓度。42℃热应激处理(0、0.5、1、2和4h)建立心肌细胞损伤模型,ELISA试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)、细胞丙二醛(MDA)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量,以及超氧化物歧化酶(SOD)活性;Western blotting检测Hsp72蛋白表达。结果显示,高浓度GBE具有细胞毒性,50、100、150mg/mL GBE能极显著抑制细胞生长(P0.01),50μg/mL GBE能够极显著提高细胞增殖率(P0.01)。热应激后细胞发生凋亡,细胞内MDA、LDH含量增加,SOD活性、GSHPx含量减少,产生氧化损伤;GBE可以降低热应激时细胞LDH和MDA的含量,增加SOD活性和GSH-Px的含量,热应激2、4h,GBE处理效果明显。此外,GBE可增加心肌细胞中Hsp72蛋白的表达。综上所述,GBE能降低热应激状态下心肌细胞的氧化损伤,其机制可能与提高抗氧化酶活性及提高Hsp72的表达有关。     

应用型本科院校《动物病理学》课程教学改革探索与实践

以应用型人才培养的实施为切入点,构建产教融合、注重实践的动物病理学教学课程改革方案,利用"产学研"基地、新媒体辅助技术等手段,采取"以赛促学"、"双师同课"等方式,从课程目标、教学模式、教学方法、实践教学、考核评价方面进行探索和实践,为应用型地方本科院校动物医学专业课程改革提供参考。     

急性热应激对鸡呼吸系统损伤及肺脏热休克蛋白表达的影响

为探讨热应激对鸡肺脏组织损伤的影响,将60只35日龄SPF鸡随机分为对照组,热应激1、2、3、5、10 h组,每组10只,试验开始后环境温度迅速从25℃升高到35℃,观察热应激组鸡临床症状,热应激结束迅速剖杀、取病料,检测血清pH值、乳酸脱氢酶(LDH)、钾离子和钙离子浓度,石蜡切片检测肺脏组织结构,Western blot检测肺脏组织中热休克蛋白(HSPs)表达量。结果显示:与对照组相比,热应激组血清pH值显著升高(P<0.05),LDH水平均极显著升高(P<0.01),随着热应激时间增加,血钾和血钙浓度开始降低,热应激5、10 h后血钾和血钙浓度显著减低(P<0.05);病理组织学结果显示热应激后,肺组织内血管充血,肺房结构基本完整,热应激5 h后肺房内有大量的红细胞存在,热应激10 h肺房内的异物减少,但肺上皮细胞大量脱落,组织结构损伤严重;Western blot结果显示与对照组相比,HSP27和HSP72表达量极显著升高(P<0.01)HSP60表达量在热应激1 h后显著升高(P<0.05),随后呈降低的趋势,HSP90表达量在热应激5 h后显著升高(P<0.05),随后呈降低的趋势,HSC70表达量无明显变化。热应激可对鸡呼吸系统造成损伤,提高肺脏HSPs表达量。     

蛋种鸡ALV-J与REV共感染病变新特点

2009年8月,山西榆次某鸡场蛋种鸡群产蛋量急剧下降,部分鸡产蛋停止.病理组织学观察发现,病鸡肝脏、肾脏、肺脏、心肌等组织中出现小灶状淋巴细胞瘤,肿瘤细胞为成熟的淋巴细胞；聚合酶链式反应(PCR)、酶联免疫吸附试验(ELISA)和间接免疫荧光(IFA)检测显示,被检鸡ALV-J感染率为8/8,而且7/8为病毒血症,与REV共感染率为2/8,未出现REV单感染；从发病情况看,淋巴细胞瘤均出现于共感染病例,特别是ALV-J病毒血症的共感染鸡病变最为严重,但未见ALV-J的特征性髓细胞瘤.囊膜蛋白氨基酸同源性分析显示,ALV-J毒株与英国HPRS-103原型株同源性最高(96.9％以上),共感染的REV毒株与suv-env株同源性最高(93.8％).本病例揭示,先天传播的ALV-J引起的病毒血症状态可能为REV的致瘤创造了环境,使临床罕见的REV淋巴瘤早于髓细胞瘤出现,因此,严格种鸡群的ALV-J净化是防控此病的重中之重.对于ALV-J与REV协同的机制还需进一步研究.     

外泌体介导PCV2通过Toll7/8/9-MyD88-NF-κB信号通路诱导淋巴细胞分泌IL-10

以接种PCV2的PK-15细胞所分泌的外泌体(P-Exo)孵育的脾脏淋巴细胞为研究对象,采用Western blot、间接免疫荧光、ELISA和qPCR等方法,分析外泌体对脾脏淋巴细胞IL-10分泌的影响及其信号通路。结果显示,P-Exo呈杯状,平均直径为50~150 nm,表达标志蛋白CD81和TSG101,包含PCV2 Cap蛋白;P-Exo孵育淋巴细胞后在细胞浆内观察到Cap蛋白;与PCV2组相比,P-Exo组IL-10含量显著升高(P<0.05),P-Exo lysis组和P-Exo BAY组则无明显变化;与对照组相比,P-Exo组淋巴细胞Toll7、Toll8和Toll9 mRNA表达量极显著升高(P<0.01),Toll3 mRNA表达量显著升高(P<0.05),Toll2和Toll4 mRNA表达量无明显变化;P-Exo能够显著升高淋巴细胞胞浆MyD88和p-IκBα蛋白含量,降低胞浆NF-κB/p65的含量,促进NF-κB/p65入核。结果表明,PCV2通过外泌体感染淋巴细胞,激活Toll7/8/9-MyD88-NF-κB信号通路促进淋巴细胞分泌IL-10。