罗非鱼病害防治技术要点分析与研究

正罗非鱼的养殖最主要是的是减少病害问题的出现,否则会严重影响到罗非鱼的成活率以及养殖质量。从大量的调查报告中可以看出,很多罗非鱼已经出现了死亡的现象。这是养殖业的一大损失。从罗非鱼死亡的主要原因上进行分析,更多地是由于病害防治方法不科学,技术应用不到位等现象造成。其中比较典型的就是生态环境的改善程度不高,罗非鱼体的抵抗能力较低等等。接下来,笔者就从罗非鱼病害防治技术方面进行细致探讨。     

斑节对虾钙网蛋白基因cDNA克隆和表达分析

采用cDNA末端快速扩增技术(rapid amplification of cDNAends,RACE)获得了1 672 bp的斑节对虾钙网蛋白(Penaeusmonodon calreticulin,PmCRT)基因cDNA序列。该序列包含37 bp的5’非编码区(UTR)和414 bp的3’非编码区(UTR)以及1 221 bp的开放阅读框(ORF),可编码406个氨基酸。预测的分子量约为46.8ku,理论等电点为4.13。序列比对分析表明PmCRT与中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)的相似性和同源性最高,分别为100%和98.8%。实时荧光定量PCR对组织表达检测的结果可知,PmCRT的mRNA在卵巢、肝胰腺、肌肉、脑、心脏、胃、眼柄和肠均有表达,卵巢的表达量最高,肌肉次之;对卵巢发育6期变化检测可知,PmCRT的mRNA在Ⅲ期卵巢表达量最高,Ⅰ期的表达量最低。以期为进一步研究该基因在斑节对虾卵巢发育中的作用提供基础数据。研究亮点:目前对斑节对虾卵巢发育的分子调控机理还知之甚少,有大量卵巢发育相关基因还不为人所知。本文研究了钙网蛋白在斑节对虾卵巢发育各期的表达谱,为阐明斑节对虾卵巢发育分子调控机理提供基础数据。     

使用氨基酸指标鉴别掺假鱼粉研究概况

鱼粉是饲料生产中最重要的原料之一,由于渔业资源的逐年匮乏,价格一直高攀,导致市场上各种掺假掺杂现象层出不穷。特别是近年来,随着渔业资源的锐减,掺假技术愈发精湛,常规的检测已经很难有效的判断鱼粉的掺假。     

小鼠早期胚胎发育过程中的DNA去甲基化

表观遗传修饰在基因转录与表达、细胞生长与分化以及动物个体正常发育等过程中都具有重要的调控作用。表观遗传修饰发生异常,会引起机体生长发育中的各种异常。哺乳动物从精卵受精到附植前的胚胎早期发育阶段会发生重要的表观遗传重编程,主要包括DNA甲基化和组蛋白修饰。精卵受精后DNA发生主动和被动2种方式的去甲基化。本文主要综述了与DNA甲基化相关的蛋白和早期胚胎发育过程中的去甲基化机制,并对小鼠附植前胚胎发育过程中的DNA甲基化的动态变化进行了详细的论述。     

丽水市城区园林病虫危害现状及综合防治

通过对丽水市城区园林病虫害发生的现状调查,分析了丽水市城区园林病虫害发生的原因,提出了应以生态系统全局为出发点,利用自然界对病虫害的控制因素,合理运用各种防治方法,以达到控制病虫害发生,降低环境污染的目的。     

N端融合TAT穿膜肽的piggyBac转座酶的原核表达及其在HEK 293细胞中的功能验证

为了增加piggyBac(PB)转座系统在转基因操作中安全性和减少PB转座系统的辅助质粒带来的副作用,本研究利用N端融合人免疫缺陷病毒反式激活因子(Human immunodeficiency virus transactivator,TAT)穿膜肽的原核表达PB转座酶替代辅助质粒在人肾胚细胞(HEK293细胞)介导PB转座的发生,同时建立一种由TAT介导的外源功能蛋白进入真核细胞的方法。构建了N端和C端分别融合TAT的PB转座酶原核表达载体(pET28A-Pbase 1,pET28A-Pbase 2)。利用pET28A-Pbase1载体在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中成功表达出N端含有TAT的PBase重组蛋白,纯化并对其进行蛋白定量,然后以100mg/mL的浓度加入细胞培养液中,转导进入HEK 293细胞,利用免疫荧光技术观察该酶能否进入HEK293细胞核,利用热不对称PCR(Tail-PCR)进行整合位点侧翼DNA序列检测,亚甲蓝进行阳性细胞克隆染色并利用非配对t检验统计细胞克隆数。聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western blot鉴定结果表明PBase在大肠杆菌中成功表达,经分析发现其主要以可溶蛋白形式存在。免疫荧光结果表明,N端融合TAT穿膜肽的PBase定位于细胞核,但是整合位点检测和转座效率统计结果表明,原核表达的PBase蛋白在HEK 293细胞中无法介导转座事件的发生。该转座系统能否在其他真核细胞中正常发挥作用,还需要进一步的研究。然而,本研究为由TAT穿膜肽介导的外源蛋白在真核细胞中的跨膜转运提供了一种可靠的方法。     

虫肽素替代鸡肉粉对鲈鱼(Lateolabrax japonicus)生长性能的影响

本实验旨在研究虫肽素替代鸡肉粉对鲈鱼生长性能的影响。选用初始体重约36g的鲈鱼(Lateolabrax japonicus)鱼苗,以15%进口鸡肉粉含量的配合饲料为对照组,用虫肽素替代进口鸡肉粉,分别添加3.5%、5.5%的虫肽素,配制成2种等氮等能实验饲料,饲喂180天,以此研究虫肽素替代鸡肉粉对鲈鱼生长性能的影响。实验结果表明:虫肽素的添加量为3.5%时,鲈鱼增重率、成活率、饲料系数、脏体比、肝体比均有显著影响(P<0.05),鲈鱼的肥满度无显著影响(P>0.05),增重率、脏体比、肝体比显著低于对照组(P<0.05),成活率、饵料系数显著高于对照组(P<0.05)。虫肽素的添加量为5.5%时,鲈鱼的成活率、脏体比、肝体比有显著影响(P<0.05),饲料系数、增重率、肥满度无显著影响(P>0.05),成活率显著高于对照组(P<0.05),脏体比、肝体比显著低于对照组(P<0.05)。虫肽素的添加量为3.5%时,脏体比最小;虫肽素的添加量为5.5%时,肝体比最小。综上所述:虫肽素是一种可以应用到鲈鱼饲料中的蛋白源原料,在本实验条件下,虫肽素可以提高鲈鱼的养殖成活率,有效降低鲈鱼的脏体比和肝体比。在不影响鲈鱼增重率和饲料系数的情况下,5.5%的虫肽素添加量较为合适。     

金刚虾养殖现状及存在的问题分析

金刚虾,又名南非斑节对虾,2008年从非洲引进,具有耐高温,生长快,抗病性强,价位高,产量高等特点,广受市场的青睐。本文分析了金刚虾的养殖现状及存在的苗种国内选育缺乏、专门饲料短缺,病害问题。     

家畜多能干细胞的研究现状与应用

多能干细胞(pluripotent stem cells,PSCs)包括从胚胎内细胞团中分离出的胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs),外胚层干细胞(epiblast stem cells,EpiSCs),从原始生殖细胞(primordial germ cells,PGCs)分离出的胚胎生殖细胞(embryonic germ cells,EGCs)和诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSCs).这些细胞都具有向各种类型细胞发育的潜能,因此,PSCs为再生医学的发展,人类基因疾病的动物模型的建立,异种器官移植和高质量抗病新品种的培育提供了有效的途径.迄今为止,PSCs在小鼠(Mus musculus)模型和人类物种已经做了大量研究,同时,家畜的ESCs和iPSCs也取得了有效的进展,表明其不仅可以应用于特定家畜优良品性的稳定遗传和优育,而且可以以家畜为载体生产人类需要的化学药品和抗体,甚至应用在人类疾病的临床前应用中.然而,家畜的ESCs相对来说是难分离和富集的,体外培养建立稳定的ESCs系具有更大的难度和挑战.近年来,得益于对家畜ESCs和相关iPSCs相关的持续研究,已初步揭示了家畜ESCs的独特生物学特性.PSCs已经成为生命科学和高科技农业和生物学一个创新的研究领域.在本文中,本文综述了家畜PSCs的发展历程与应用前景.