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mdm2(murine double minute 2,鼠双微粒体-2)是抑制p53(肿瘤抑制因子)活性的重要分子之一,它们之间相互作用对细胞的生存具有重要功能。克隆得到小鼠Mus musculus mdm2 cDNA,构建其真核表达载体p3xFLAG-CMV-7.1-mdm2,Western blotting验证其在真核细胞中的表达大约为60 kDa的蛋白表达产物,间接免疫荧光技术检测mdm2的表达和亚细胞定位,mdm2主要在细胞核内表达。利用p53蛋白泛素化试验和p53报告基因活性检测试验,验证了FLAG-mdm2的活性,构建了mdm2调节p53泛素化和抑制p53活性的细胞模型,为研究p53活性调控、mdm2与p53相互作用等提供了基础和研究手段。图5参15 相似文献
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以中国荷斯坦奶牛为实验材料,研究了Mg^2+浓度、dNTPs浓度、引物浓度、模板DNA浓度、TaqDNA聚合酶,以厦退火温度对RAPD反应的影响,建立一套适合中国荷斯坦牛的最佳RAPD反应体系,反应总体积为20μL。Mg^2+浓度为2.5μmol/L,TaqDNA聚合酶浓度为1U,引物浓度为2μmol/L,dNTPs浓度为400μmol/L.模板DNA浓度为100ng。PCR反应程序:94℃预变性2min→40循环(94℃变性1 min→36℃退火1min→72℃延伸lmin)→72℃延伸5min. 相似文献
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以中国荷斯坦奶牛为实验材料,研究了Mg2+浓度、dNTPs浓度、引物浓度、模板DNA浓度、TaqDNA聚合酶,以及退火温度对RAPD反应的影响,建立一套适合中国荷斯坦牛的最佳RAPD反应体系。反应总体积为20μL,Mg2+浓度为2.5mmol/L,TaqDNA聚合酶浓度为1U,引物浓度为2μmol/L,dNTPs浓度为400μmol/L,模板DNA浓度为100ng。PCR反应程序:94℃预变性2min→40循环(94℃变性1min→36℃退火1min→72℃延伸1min)→72℃延伸5min。 相似文献
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马立克氏病病毒(MDV)被膜蛋白VP22被证实能在细胞间高效转导,为了进一步证明VP22能够作为蛋白转运的载体,将4种不同的异源蛋白与MDV 1型(MDV-1)CVl988/Rispens株VP22蛋白融合表达,通过观察这些融合蛋白的细胞定位以及它们的细胞间扩散能力来研究VP22转运蛋白的情况.结果发现,禽流感病毒(AⅣ)核蛋白(NP)、牛γ干扰素(BoIFN-γ)及新城疫病毒(NDV)F蛋白能够被MDV-1 VP22转运,而鸡法氏囊病病毒(IBDV)蛋白VP2不能被MDV-1 VP22转运,上述结果说明MDV-1 VP22蛋白能够作为蛋白转运的载体,但对所转运的蛋白具有选择性. 相似文献
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马立克氏病病毒(MDV)被膜蛋白VP22被证实能在细胞间高效转导,为了进一步证明VP22能够作为蛋白转运的载体,将4种不同的异源蛋白与MDV1型(MDV-1)CV1988/Rispens株VP22蛋白融合表达,通过观察这些融合蛋白的细胞定位以及它们的细胞间扩散能力来研究VP22转运蛋白的情况。结果发现,禽流感病毒(AIV)核蛋白(NP)、牛-γ干扰素(BoIFN-γ)及新城疫病毒(NDV)F蛋白能够被MDV-1VP22转运,而鸡法氏囊病病毒(IBDV)蛋白VP2不能被MDV-1VP22转运,上述结果说明MDV-1 VP22蛋白能够作为蛋白转运的载体,但对所转运的蛋白具有选择性。 相似文献
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荷斯坦奶牛随机扩增多态DNA(RAPD)反应条件的优化 总被引:3,自引:1,他引:3
以中国荷斯坦奶牛为试验材料,研究了Mg2 浓度、dNTPs浓度、引物浓度、模板DNA浓度、TaqDNA聚合酶,以及退火温度对RAPD反应的影响,建立一套适合中国荷斯坦牛的最佳RAPD反应体系。反应总体积为20μL,Mg2 浓度为2.5mmol/L,TaqDNA聚合物浓度为1U,引物浓度为2μmol/L,dNTPs浓度为400μmol/L,模板DNA浓度为100ng。PCR反应程序:94℃预变性2min→40循环(94℃变性1min→36℃退火1min→72℃延伸1min)→72℃延伸5min。 相似文献
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根据GenBank发表的日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)基因序列,合成用于克隆编码病毒NS3蛋白C端的基因片段(955~1857 bp)的引物。从感染JEV的细胞样品中,采用RT-PCR扩增出大小约900 bp的目的片段,插入到pET-28a(+)表达载体,诱导表达出NS3C蛋白。将该重组蛋白免疫小鼠制备NS3C抗血清,通过间接免疫荧光和Western blot验证,该抗血清能特异识别JEV感染Vero细胞中的NS3蛋白。使用该抗血清研究了JEV在神经细胞内的亚定位,发现NS3主要定位于JEV感染的神经细胞的胞浆中,并在细胞核周围分布明显。 相似文献
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