粮用豌豆组织培养及植株再生条件优化

为了豌豆遗传转化及优良品种快速繁殖提供借鉴,进行了豌豆组织培养及植株再生条件试验。结果表明:豌豆的叶柄是诱导愈伤组织的最佳材料,在MS培养基中添加2,4-D(1 mg/L)和BA(0.5mg/L),愈伤诱导率达100%,但愈伤组织在分化培养基中未能分化出芽;豌豆子叶节是芽分化的最佳材料,在分化培养基上可分化出丛生芽,不同激素条件下萌发率均达100%。在MS+ZT(1mg/L)条件下,丛生芽最长;而在MS+BA(10 mg/L)条件下,丛生芽最多。豌豆子叶节丛生芽在MS+IBA(0.5mg/L)培养基上生根率最高,达40%以上,试管苗的移栽成活率为90%以上。     

实时定量PCR检测豌豆黄化苗中肌动蛋白异型体Ⅱ的表达

以18S rRNA为内参照基因,利用实时定量PCR方法检测了豌豆黄化苗在生长过程中肌动蛋白异型体ⅡPEAcⅡ的表达情况。结果表明:豌豆黄化苗中PEAcⅡ的表达量在检测的第1小时明显升高,约为起始表达量的2倍。随着培养时间延长,表达量下降,第12小时的表达量约为起始表达量的0.6倍。与光照培养下的正常苗相比,黄花苗中PEAcⅡ的表达量较高,在检测的第8小时,约为正常苗表达量的2.4倍。该试验建立的实时定量PCR方法可有效地用于豌豆肌动蛋白异型体基因表达的定量分析。     

水分亏缺条件下豌豆肌动蛋白异型体PEAcII基因的表达

以培养3～4 d的豌豆幼苗为试验材料,以18S rRNA基因为内参基因,豌豆幼肌动蛋白异型体PEAcII基因为检测基因,在PEG6000模拟水分亏缺条件下,采用半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)体系检测肌动蛋白异型体PEAcII基因在豌豆幼苗中的表达情况。在正常供水条件下,PEAcII在处理的第8 h表达量最高,水分胁迫下,PEA-cII基因在处理的0.5 h表达量下降,在处理的1 h时表达量最高,而后下降。无论是正常供水还是水分胁迫条件下,PEAcII基因的表达都是一个动态变化的过程。试验结果表明,肌动蛋白异型体PEAcII表达量的高低可能与豌豆幼苗适应水分亏缺的生理过程有关,这对于研究豌豆幼苗抗旱性机理以及检测豌豆幼苗的抗旱性强弱具有重要意义。