白假丝酵母脂肪酶CaLIP5在毕赤酵母X33中的优化重组表达

[目的]研究新的脂肪酶及优化脂肪酶发酵培养条件。[方法]在毕赤酵母X33系统中重组表达白假丝酵母脂肪酶CaLIP5。利用响应面分析法,构建了CaLIP5的酶活回归方程。[结果]由响应面分析可知,在温度25．71oC,pH8．33,酵母提取物浓度1．28％和葡萄糖浓度4．06％时,预测最大酶活为8．33U／ml。试验验证酶活为9．24U／ml。实际试验值与模型预测值基本一致。优化后的酶活提高了22．22％。[结论]在优化的培养条件下,可以获得毕赤酵母X33重组表达CaLIP5的最大酶活。     

一种改进的基因合成方法

[目的]建立一种简便、廉价、准确的基因合成方法。[方法]对现有的重叠延伸合成方法进行了改进,提出一种IOEP（ImprovedoverlapextensionPCRmethod）法。[结果]拆分的单链寡核苷酸长度为60nt左右,重叠区碱基数13～17bp,Tm值为40-50℃。IOEP法具体步骤如下：把拆分的寡核苷酸组装成500bp左右的中间片段,再将中间片段拼接成全长基因。利用IOEP法合成了10条基因,其平均化学合成成本率为1．291,平均错误率为1．031％o,优于其他合成方法。[结论]IOEP法是一种具有高准确率、低成本、重复性好的基因合成方法。