鱼类神经坏死病毒衣壳蛋白MCP和鮰爱德华氏菌外膜蛋白ompN1融合基因的原核表达

目前在针对鱼类神经坏死病毒的疫苗研究中，主要是将神经坏死病毒某些蛋白作为抗原进行注射免疫，但是传统的注射免疫并不能有效地激发黏膜免疫。笔者将鱼类神经坏死病毒的衣壳蛋白（MCP）与鮰爱德华氏菌的跨粘膜蛋白ompN1融合表达，拟制备能够抵抗神经坏死病毒的粘膜疫苗；利用从NCBI GenBank库里获得的鱼类神经坏死病毒的外壳蛋白MCP和鮰爱德华氏菌的外膜蛋白ompN1的基因序列，将两者进行序列优化与全基因合成，分别构建原核表达载体:MCP-ompN1 pET28a和MCP pET28a和ompN1 pET28a，并在大肠杆菌内分别诱导表达融合蛋白MCP-ompN1，MCP，ompN1后，再利用包涵体纯化及透析复性获得MCP-ompN1，MCP，ompN1蛋白。SDS-PAGE结果显示，原核表达纯化得到了较纯的MCP-ompN1 融合蛋白，Western Blotting结果表明，纯化得到的MCP-ompN1 融合蛋白不仅具有MCP抗原性，还具有ompN1抗原性。本实验通过原核表达纯化得到了鱼类神经坏死病毒衣壳蛋白MCP和鮰爱德华氏菌外膜蛋白ompN1的融合蛋白MCP-ompN1，为进一步验证融合蛋白MCP-ompN1能否作为抵抗神经坏死病毒的粘膜疫苗奠定了基础。     

20%噻唑锌悬浮剂对水稻白叶枯病的防治效果研究

20%噻唑锌悬浮剂是噻二唑类有机锌杀菌剂,对大多数植物细菌性病害均有较好的防效。为验证20%噻唑锌悬浮剂对水稻白叶枯病的防治效果,衢州市衢江区植物保护检疫站和浙江新农化工股份有限公司在衢州市衢江区水稻白叶枯病发病田开展相关试验。结果表明,使用20%噻唑锌悬浮剂4.5~6.0 L/hm~2,间隔7 d,连续施药2次,对水稻白叶枯病都有较好的防治效果,其中用量为6 L/hm~2时防治效果最好。     

6种农林剩余物化学成分及沼气高温发酵效果

本试验研究了6种农林剩余物(茶树菇菌糠、银耳菌糠、杏鲍菇菌糠、甘蔗渣、笋头和菇头)的主要成分差异及高温发酵(55℃)制备沼气的效果.结果表明:除菇头外,5种农林剩余物木质纤维素含量均高于主要营养成分.6种农林剩余物的碳氮比差别较大,最低的是菇头(7.3),最高的是甘蔗渣(106.7).不同剩余物的积累产沼气量和产甲烷量差别很大.产气效果最好的是菇头,15 d积累产沼气量为485.1 m L·g~(-1),甲烷浓度为53.5%.     

重组热带螨Blo t 21变应原诱导小鼠变态反应气道炎症模型的建立

为了建立热带螨重组变应原Blo t 21(rBlo t 21)诱导小鼠变态反应气道炎症模型,笔者利用从NCBI Gen Bank库里获得的热带螨Blo t 21基因序列,进行了序列优化与全基因合成,构建了原核表达载体PQE80LrBlo t 21,在大肠杆菌内诱导表达rBlo t 21,利用镍柱亲和层析纯化rBlo t 21蛋白。12只BALB/c小鼠随机分为对照组(PBS组)与诱导组(rBlo t 21组),每组6只,通过腹腔注射致敏与气道诱导后,分别通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清总IgE水平;鼠尾静脉注射变应原诱发应激性过敏反应;HE染色观察小鼠肺部炎症严重程度。本试验成功表达与纯化了重组热带螨变应原Blo t 21。利用纯化的rBlo t 21诱导小鼠变态反应气道炎症模型,与PBS组相比,rBlo t 21组的小鼠血清总IgE水平显著升高,肺部组织细胞侵润明显增加(P0.05)。原核表达纯化的重组Blo t 21变应原能够诱导小鼠产生变态反应气道炎症。     

巨菌草高温发酵产沼气的初步研究

巨菌草是一种光合作用效率很高的能源植物,用来发酵产沼气潜力很大。该研究以巨菌草为发酵底物,从菌群富集、堆沤预处理和发酵过程对其进行了高温发酵产沼气的初步研究。共富集得到了4个高温发酵巨菌草产沼气菌群,其中从牛瘤胃内容物中富集得到的4号菌群产气效率最高,15d的积累产沼气量达到了373.1 mL/g TS。实验结果表明:利用沼液对巨菌草进行堆沤处理效果较好,15d的积累产沼气量为406.5 mL/g TS;接种量为64%时产气持续性好,15d积累产沼气量可达442.6 mL/g TS;最佳起始碳氮比为21.5;添加氯化铵的巨菌草发酵启动早于添加尿素的发酵1～2d。该文为规模化利用巨菌草高温发酵产沼气提供了参考。     

热带无爪螨主要变应原Blo t 5和Blo t 21融合表达质粒诱导小鼠产生IgG和调节性T细胞

旨在开发防治热带螨过敏症的兽用核酸疫苗,本试验通过对热带无爪螨主要变应原Blo t 5和Blo t 21的基因序列进行密码子优化,构建了热带螨主要变应原融合基因的真核表达载体pVAX1-PADRE-Blo t 5-21-CpG。为验证该真核表达载体的免疫效果,采用皮下注射,以100 μg/100 μL量的pVAX1-PADRE-Blo t 5-21-CpG核酸免疫BALB/c小鼠(n=6),通过ELISA检测小鼠血清中特异性IgG、IgG1和IgG2a的水平变化;流式细胞术检测小鼠脾淋巴细胞中调节性T细胞的变化。结果显示,真核表达质粒pVAX1-PADRE-Blo t 5-21-CpG免疫小鼠后可诱导特异性IgG和IgG2a水平升高,且IgG2a/IgG1的比值升高,这暗示免疫后小鼠机体发生偏向Th1型的免疫反应。此外,该核酸疫苗可诱导小鼠产生较高水平的CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺ T细胞,这表明该真核表达质粒免疫小鼠后可能会诱发免疫抑制。     

利用DNAStar软件预测热带无爪螨主要致敏原Blo t 5的抗原表位

利用DNAStar Protean软件对热带无爪螨主要致敏原Blo t 5的二级结构和表面特性进行分析,如理化性质、亲水性、表面可及性、可塑性等,预测Blo t 5蛋白的B抗原表位和T抗原表位。实验结果表明,Blo t 5蛋白的二级结构以α螺旋为主,存在6个潜在的B抗原表位位点,可能的B抗原表位区域有:18-31,39-48,56-77,86-101,105-112,117-133氨基酸残基或其附近。含有7个潜在的T细胞抗原表位区域:32-37,40-44,57-65,70-79,86-95,100-104,115-120氨基酸残基或其附近。笔者应用Protean软件预测了热带无爪螨主要致敏原Blo t 5的抗原表位,为进一步研究Blo t 5致敏原的结构与功能,研制针对热带螨的预防性和治疗性疫苗、开发相应的诊断试剂盒奠定了基础。     

黑木耳水提物和粗多糖溶液的流变特性及饮料开发

【目的】研究黑木耳水提物（Auricularia auricula water extract, AWE）和黑木耳粗多糖（Auricularia auricula crude polysaccharide, ACP）溶液的流变特性，优化饮料配方，为黑木耳饮料的开发提供科技支撑。【方法】观察不同质量浓度和均质压力下AWE和ACP溶液的流变特性；采用单因素和正交试验优化黑木耳饮料配方。【结果】0.3%～1.5%的AWE与ACP溶液都具有明显的剪切稀化特征，表现为假塑性流体，且为非牛顿流体；随着AWE与ACP质量浓度的降低，其流动行为指数增加，稠度系数降低（P <0.05）,0.3%～0.6%AWE溶液和0.3%ACP溶液呈现稳定的流体特性。4～12 MPa均质处理显著提高0.6%AWE和ACP溶液的流动行为指数，同时降低稠度系数，均呈现稳定的流体特性；相同均质压力下0.6%AWE比ACP溶液的黏度更低、流动性更佳。8 MPa均质压力处理的0.6%AWE溶液的平均粒径（6.51±0.02）μm和稳定系数（0.926±0.024）达到平衡。单因素和正交试验优化黑木耳饮料配方为：AWE0....