宽口裂腹鱼中肾组织细胞系建立的初步研究

鱼类细胞培养是进行种质保存、基因功能分析、细胞工程育种等研究的重要材料和模型。为了建立濒危的宽口裂腹鱼(Schizothorax eurystomus)中肾组织细胞系，本研究以其中肾组织为材料，以组织块移植法启动细胞原代培养，待细胞稳定后再进行传代培养，建立宽口裂腹鱼中肾组织细胞系，命名为EUM10。分析宽口裂腹鱼中肾细胞系冻存复苏能力和最适生长条件，且通过PCR技术检验污染状况，用线粒体基因片段分析鉴定细胞的来源。结果显示，宽口裂腹鱼中肾组织细胞的最佳培养基为DME/F-12，最适温度为25℃，最适血清浓度为20%；细胞呈悬浮生长，生长曲线为“S”型曲线，第10代中肾组织细胞系细胞的群体倍增时间为23.26 h；第6代细胞液氮冷冻保存6个月后，复苏存活率达91.91%；经污染鉴定无污染现象；EUM10第10代细胞线粒体16S rRNA序列分析结果与宽口裂腹鱼基因序列一致性为99.81%，表明细胞系来自宽口裂腹鱼。本研究成功建立了宽口裂腹鱼中肾组织细胞系，可将宽口裂腹鱼中肾细胞系作为体外体系运用于宽口裂腹鱼的研究，如细胞遗传学、基因功能分析等，可为宽口裂腹鱼的基础研究和育种工作提供基础资料。     

新疆克孜勒河厚唇裂腹鱼人工繁殖及胚胎、早期仔鱼发育研究

为实现厚唇裂腹鱼Schizothorax irregularis的人工养殖和资源增殖, 于2019年4—5月进行了新疆克孜勒河厚唇裂腹鱼人工繁殖试验, 以探究该鱼的繁殖时期、雌雄鉴别、人工催产和人工孵化等关键技术,试验设催产厚唇裂腹鱼亲鱼35组, 采用人工干法授精和孵化缸淋浴式孵化方法, 获受精卵20. 69万粒, 获水花鱼苗14. 12 万尾.结果表明: 厚唇裂腹鱼人工催产最适水温为 18. 5 ℃, 最适孵化水温为 17. 0～17. 5 ℃; 厚唇裂腹鱼的繁殖期在新疆维吾尔自治区南疆地区主要集中在4月下旬—5月中旬, 该鱼产微黏沉性卵, 成熟卵的卵径为 (2. 95±0. 15) mm, 吸水膨胀后卵径为 (3. 53±0. 12) mm; 厚唇裂腹鱼胚胎发育过程经历胚盘、卵裂、囊胚、原肠胚、神经胚、器官形成和出膜7个阶段; 在水温为 (17. 14±0. 01)℃条件下, 受精卵发育经过147 h 31 min孵化, 总积温为2 513. 01 ℃?h; 初孵仔鱼全长 (8. 72± 0. 26) mm,具心跳和血液循环, 多数时间静卧水底, 偶有窜动; 早期仔鱼发育分为眼球色素出现期、体色素出现期、鳔充气期和卵黄囊完全吸收期4个时期, 出膜后432 h卵黄囊完全吸收, 仔鱼全长为 (21. 51±0. 75) mm.本研究结果可为厚唇裂腹鱼的资源保护和人工繁殖提供基础资料和科学依据.