白芨组织培养快繁技术研究综述

组培快繁技术是白芨种苗大规模生产的一种主要途径。该文从白芨组培的外植体选择及消毒、培养基、激素的选择及炼苗移栽等研究方面进行了综述,以期为开发和保护白芨提供参考。     

非洲菊组培苗炼苗技术优化

为了指导非洲菊组培苗大规模生产,研究了不同基质、种植深度以及基质水分含量对非洲菊组培苗驯化成活率和生长情况的影响。结果表明：珍珠岩：营养土为1：1,生长点高出基质,保持基质润湿时,组培苗驯化的成活率较高、生长情况也较好。     

桫椤原叶体增殖及幼孢子体形成试验

采用正交试验,研究培养基类型、激素配比及浓度、蔗糖浓度对桫椤原叶体增殖及幼孢子体形成的影响。结果表明:不同NAA和蔗糖浓度对原叶体增殖的影响差异极显著,不同BA浓度对幼孢子体的形成影响极显著;桫椤原叶体增殖的适宜配方为MS+0.5 mg/L NAA+0.01 mg/L BA+0.1 mg/L TDZ+20 g/L蔗糖,增殖率为20.31%;合适分化培养基为N6+0.1 mg/L NAA+0.5 mg/L BA+0.1 mg/L TDZ+20 g/L蔗糖,分化率为13.60%。试验结果对桫椤孢子再生体系的建立提供技术支撑。     

珍稀濒危植物珙桐初代培养研究

以珙桐芽体为试材,采用WPM、1/2 MS、B5三种基本培养基,附加6-BA、NAA、GA34因素3水平正交实验设计,同时研究了不同外植体消毒时间、剥离方式、芽体长度对珙桐初代培养的影响。结果表明:用75%酒精30 s+0.1%HgCl220 min消毒效果较好,外植体长度大于0.5 cm,剥离芽体至剩余鳞片叶1~2个的处理方式有利于降低污染率,最佳芽诱导的培养基配方为:WPM+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.05 mg/L+AC 0.5 g/L。     

四倍体果桑嘉陵30号再生植株的研究

以四倍体果桑品种嘉陵30号(Morus atropupurea Roxb.)的春芽和冬芽为外植体,建立了嘉陵30号的高频再生体系。结果表明,冬芽比春芽更适合作外植体,低温处理后再用赤霉素处理对解除冬芽休眠效果最好;0.1%HgCl_2消毒15min且在培养基中添加300mg/L噻孢霉素钠盐(Cef,Cefotaxime Sodium Salt)能有效控制污染;培养基MS+3.0mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA适用于果桑的初代和继代培养。嘉陵30号通过直接器官发生途径再生,使用不定芽诱导丛生芽此种增殖方式效果更佳,增值系数高达7.04,且苗粗壮,生长旺盛,最适诱导培养基为1/2MS+0.6mg/L IAA,生根率可达87.5%,根系粗壮。     

珍稀濒危植物珙桐的研究现状及展望

阐述了珙桐的生态分布,以及基础理论研究及人工栽培等方面的现状,并对珙桐研究中存在的问题提出了解决的方法和建议,以期为保护和开发该树种提供参考。     

桑树谷氨酸脱氢酶基因MaGDHs的克隆及表达分析

【目的】克隆桑树的谷氨酸脱氢酶基因GDH,了解其结构、组织特异性表达以及调控特点,并获得桑树谷氨酸脱氢酶蛋白,为进一步研究谷氨酸脱氢酶（glutamate dehydrogenase,GDH）在桑树氮代谢过程中的功能奠定基础,也为多年生木本植物的GDH研究提供参考。【方法】根据川桑基因组数据库搜索GDH同源序列设计引物,以杂交桑品种桂桑优62号（M. atropurpurea Roxb.）cDNA为模板,通过RT-PCR克隆获得MaGDHs。利用NCBI上BLAST和CDD进行氨基酸序列比对和保守结构域分析;利用Expasy在线软件对MaGDH氨基酸组成、分子量、等电点进行分析;采用MEGA 5.0软件构建系统进化树;通过qRT-PCR检测试管苗在不同浓度的蔗糖、铵盐、激素（6-BA）状态下MaGDHs的表达量,用StepOne Software V2.1软件根据2^-△△Ct法进行基因相对表达量分析。以pET-28a(+)、pET-32a(+)、pCold-TF为载体构建MaGDH的融合蛋白重组质粒并转入到大肠杆菌中进行表达。【结果】成功获得2个MaGDHs,序列全长均为1 236 bp,编码411个氨基酸,含一个开放阅读框,分别命名为MaGDH1和MaGDH2。MaGDH1蛋白质的分子量为44.1 kD,理论等电点为5.84,MaGDH2蛋白质的分子量为44.2 kD,理论等电点为6.68。MaGDHs氨基酸序列含有9个外显子,8个内含子,具有线粒体转移肽、Glu/a-KG结合域和NAD(P)结合域,与川桑同源性均为99%,与双子叶植物同源性为90%左右,与单子叶植物的同源性为85%左右。重组蛋白MaGDHs以包涵体的形式在大肠杆菌BL21（DE3）中表达,经过纯化和复性后获得了具有活性的酶蛋白,酶活性以pET-28a(+)-MaGDH1重组蛋白最高,为10.07 nmol·min^-1·mL^-1。MaGDHs的表达具有组织特异性,在桑花中表达量最高,其次是嫩叶,在果实中几乎不表达。MaGDHs的表达受到蔗糖、NH₄⁺和6-BA的调控。随着蔗糖浓度的增加,MaGDHs表达量增加;过量的NH₄⁺促进MaGDH1的表达,而没有NH₄⁺的情况下,MaGDHs也有表达;细胞分裂素对MaGDHs的表达是先抑制后促进,MaGDH1在24 h后表达增强,MaGDH2在48 h后表达增强。【结论】从桂桑优62号中获得了两个MaGDHs,分别编码β和α亚基。不同载体的重组蛋白酶活性存在差异。MaGDHs的表达具有组织特异性,在桑树生长旺盛的组织中表达量较高。过量NH₄⁺促进MaGDH1表达;MaGDH1响应激素促进表达比MaGDH2早。