一种利用不同斑纹品种混精杂交筛选转基因家蚕纯合子的方法

基因型的纯合是保证生物后代性状不发生分离的根本。通常采用连续累代自交同时进行相关性状筛选,或者旁侧PCR筛选等方法纯化转基因生物外源基因。连续累代自交的方法筛选耗时长,工作量大,效率低;旁侧PCR方法技术要求高、专一性强。本研究利用不同斑纹品种混精杂交,结合雄蛾测交,筛选出双亲均为纯合子的蛾圈,作为该品种的纯合品系。该方法简单易行,周期短、效率高,是一种筛选转基因家蚕纯合品系的优良方法。     

四川省2015年果桑菌核病防控技术要点

<正>四川省果叶兼用桑发展势头良好,据统计全省果叶兼用桑种植面积已超过10万亩(6666.7hm2),做好今春桑椹菌核病的防控工作,对夺取2015年桑椹丰收具有重要意义。为此特提出以下防控技术要点:1果桑园春耕、深埋菌核去年春季桑椹收获后,果桑园内及四周掉落残留了大量白桑果及菌核,这些菌核就是2015年菌核病发病的病原,一定要高度重视这些留地菌核(病原),把它们消灭在2015年初,具体做法如下:     

果桑春季菌核病的防控技术

<正>随着蚕桑多元化的发展,全国果桑种植面积不断增加,据不完全统计,目前中国果桑种植面积已达5.33万hm~2,桑果产量已达79万t。仅四川省已有30多个区县种植果桑,2017年种植面积已达8000hm~2以上,产果7.5万t,收入4.5亿元。尤其是四川省德昌县,2017年全县果桑面积达2000hm~2,产出桑椹3.5万t,农民售果收入1.5亿元,桑椹亩均收入5000元以上。而在果桑种植过     

6个果桑品种主要性状调查与染色体倍性测定

作者对黑龙江省6个果桑品种资源进行性状调查和染色体观察。结果表明,‘龙桑1号’具有染色体数为28和42的细胞,是四倍和六倍的混合体;‘选2’为自然六倍体;‘龙椹1号’‘选3’‘选4’‘矮化1号’均为四倍体。该研究对高寒地区桑树资源的发掘与创新利用具有重要意义。     

一种新的单根茧丝纤维横截面积测量方法

纤维力学性能分析中对应力准确测量的关键技术是对纤维横截面积的精确测量。针对茧丝纤维横截面形状不规则的特点,新建立了一种单根茧丝纤维不同形状横截面面积的测量方法,该方法包括单根茧丝纤维样品的有效切割、切割样品的扫描电子显微镜观察和横截面积计算3个步骤,具体操作是:利用普通锋利刀片和坚硬平板将单根茧丝切割成长4～5 cm的小段样品后,将其夹入约1 cm见方橡皮块的切口制成横截面观察样品;在扫描电子显微镜下完成单根茧丝纤维样品横截面的形状观察;根据单根茧丝纤维横截面形状采用不同方法计算单根茧丝纤维样品横截面积。利用此方法测定了采用不同缫丝方法获取的单根茧丝纤维的横截面积,具有简单、快速、准确的特点,有助于更加准确测定和分析茧丝纤维的力学性能。     

家蚕安全转基因技术研究现状与展望

转基因技术是实现基因功能研究和生物遗传改良的重要工具。转基因生物安全问题主要包括转基因操作技术安全与转基因产品安全这两个方面。近年来业内对转基因生物的安全性研究主要集中于转基因农作物、水生动物和家禽、家畜等大型动物在医药、农业和食品工业等领域的安全评估,而对于具有重要科研与经济价值的农业昆虫安全转基因技术研究的报道则较为有限,而且农业部至今未有转基因昆虫安全性评估的先例。家蚕（Bombyx mori）是重要的鳞翅目模式昆虫和农业经济昆虫,家蚕安全转基因技术的深入研究对于促进基础遗传学发展和推动蚕丝产业发展均具有重要价值和意义。自2000年第一例转基因家蚕建立以来,转基因技术已广泛应用于家蚕基因功能鉴定的基础研究和品种改良的应用研究领域,但转基因家蚕的安全性问题却成了限制转基因家蚕实用化应用的主要瓶颈。因此,开展家蚕安全转基因技术体系研究对促进转基因家蚕安全性评估和产业化具有重要意义。本文系统地概述了基于条件基因打靶的家蚕安全转基因技术体系的建立与研究现状,讨论了家蚕安全转基因技术的发展趋势和应用前景,以期为转基因动物特别是农业转基因昆虫的安全转基因技术建立和完善提供参考。     

果桑肥大性菌核病菌多聚半乳糖醛酸酶基因(CsPG1)的克隆及功能分析

多聚半乳糖醛酸酶(Polygalactuionasem, PG)是一种细胞壁结构蛋白,可以催化果胶分子多聚α-(1,4)-聚半乳糖醛酸的裂解,使细胞壁结构解体,导致果实软化。本文采用qRT-PCR方法,分析不同生长阶段菌丝侵染的油菜叶片中多聚半乳糖醛酸酶基因的表达模式。结果表明：(1)采用RT-PCR从果桑肥大性菌核病菌(Ciboria shiraiana)菌核中扩增多聚半乳糖醛酸酶基因cDNA,其全长为1143 bp,命名为CsPG1 (GenBank登录号为KR296662),编码380个氨基酸残,根据侵染油菜叶片的表达量,确认CsPG为基因家族的主效基因;(2)将CsPG1基因连接pET28a(+)载体并转化大肠杆菌E. coli BL21 (DE3),获得包涵体形式,但对底物(聚半乳糖醛酸)没有活性的蛋白;(3)最适CsPG1包涵体溶解的尿素浓度6 mol L^–1,采用缓慢稀释低温复性的方法对重组蛋白CsPG1进行了重折叠复性试验,经高亲和力的Ni-NTA树脂纯化后为得到单一条带,获得可溶性蛋白,复性后的多聚半乳糖醛酸酶比活力为5.02 U mg^–1;(4)生物试验表明,CsPG1蛋白能够加速嘉陵40 (Morus atropurpurea Roxb.)桑椹的成熟和软化,推测该蛋白与肥大性菌核病菌对桑椹的侵染有关。这一结果揭示了不同果桑品种对菌核病敏感性的差异,为果桑生产中菌核病的防控提供了分子证据.     

过表达桑树色氨酸脱羧酶基因(MnTDC)转基因烟草提高其耐盐性

褪黑素在植物生长、发育、生物与非生物胁迫中发挥重要作用.色氨酸脱羧酶(tryptophan decarboxylase,TDC)是褪黑素生物合成中第一个重要的酶.本研究克隆川桑TDC基因,并将其转入烟草中过表达,探讨MnTDC在盐胁迫下的作用机制.结果 表明,成功构建过表达载体pLGNL-MnTDC,并经过农杆菌介导的愈伤组织转化获得3个独立转基因系.GUS染色、基因组PCR鉴定证明MnTDC成功转化到烟草株系中.qRT-PCR结果表明MnTDC在3个转基因烟草株系中的转录水平显著高于野生型(WT).UPLC-MS/MS结果表明转基因株系显著提高了褪黑素的生物合成量.盐胁迫下,Mn TDC过表达烟草与野生株系烟草相比,耐盐性显著增强.转基因烟草株系中的过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)及过氧化物酶(POD)活性均显著高于野生株系烟草,脯氨酸(Pro)等调节渗透压物质的含量和ERD10C等调节渗透压的基因表达量显著高于野生株系烟草,转基因株系中丙二醛(MDA)含量比野生株系烟草低.研究结果表明,MnTDC通过调节烟草细胞中褪黑素的含量进而影响了烟草植株整体的耐盐性.本研究初步揭示了MnTDC基因的抗逆功能,为桑树耐盐分子育种提供了重要候选基因和理论参考.