猪细小病毒S-1A株对细胞的适应性及其培养条件的优化

将猪细小病毒S-1A株在不同的细胞中培养,测定病毒含量,以确定适合猪细小病毒S-1A株增殖的细胞。结果表明：猪细小病毒S-1A株能在猪肾传代细胞系(PK-15)、猪肾原代细胞(PK)、猪睾丸细胞(ST)和仔猪肾细胞(IBRS-2)中生长增殖,不能在幼仓鼠肾细胞系(BHK-21)、绿猴肾细胞(Vero)和鸡胚成纤维细胞(CEF)中增殖;当ST细胞生长至2/3单层时,将猪细小病毒S-1A株种毒液100倍或1000倍稀释后接种ST细胞,37℃培养96～144h,获得的病毒载量最高。     

猪伪狂犬病研究进展

猪伪狂犬病(Pseudorabies,PR)是由伪狂犬病毒(Pseudorabies Virus,PRV)引起的多种家畜和野生动物感染的一种急性传染病,主要症状为发热、奇痒(猪除外)及繁殖障碍。为了对伪狂犬病有一个较深的理解,本文将从伪狂犬病概况和防控措施两个方面进行综述。     

猪Jiv基因的克隆表达与多克隆抗体制备

【目的】克隆猪Jiv蛋白核心区的2 112bp的基因片段,构建其原核表达载体后进行蛋白的表达和纯化,制备抗猪Jiv蛋白的多克隆抗体。【方法】利用RT-PCR方法,从猪脾脏组织RNA中扩增得到猪Jiv基因,将其克隆到pMD19-T载体并测序,以此为基础构建原核表达载体pET32a-Jiv,转化E.coli Rosetta(DE3)感受态细胞中,利用IPTG诱导表达,获得大量包涵体形式的猪Jiv融合蛋白。通过镍离子螯合层析柱对表达的目的蛋白进行纯化,对纯化后的包涵体蛋白进行透析复性,以每只新西兰白兔400μg蛋白的初次免疫剂量和500μg蛋白的加强免疫剂量进行免疫,共免疫5次,采集血清,采用间接ELISA法检测抗体效价达到一定水平后,收集抗体,利用Western blot检测抗体特异性。【结果】克隆得到长度为2 112bp的猪Jiv基因片段;构建的pET32a-Jiv在E.coli Rosetta(DE3)感受态细胞中经诱导后高效表达,SDS-PAGE结果显示,纯化得到分子质量约为95ku的猪Jiv融合蛋白;测得的猪Jiv蛋白多克隆抗体效价达1∶6 400;Western blot检测结果证实,所获得抗体能够有效地应用于猪Jiv蛋白抗原的检测。【结论】成功地克隆了猪Jiv基因,制备了抗猪Jiv蛋白的多克隆抗体。     

猪圆环病毒2型灭活疫苗安全性及免疫效力的评价

为了对制备的猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)灭活疫苗进行安全性及免疫效力的评价,本试验将3批次猪圆环病毒2型灭活疫苗以2倍剂量接种PCV2阴性仔猪后,进行了安全性分析抗体检测和攻毒试验。结果显示：3批次疫苗以2倍剂量接种仔猪后,仔猪均无异常临床反应,可达到1∶1600以上,而攻毒对照组及空白对照组仔猪的抗体水平均在1∶400以下;攻毒后免疫组可以达到100%保护,攻毒对照组出现100%发病。结果表明,所制备的猪圆环病毒2型灭活疫苗对仔猪不仅安全性好,而且可以为仔猪提供有效的保护,为疫苗推广奠定了重要基础。     

一株猪伪狂犬病病毒的分离鉴定及其对不同动物的致病性

为了解变异后伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)的致病性,采用细胞培养技术从病料中分离PRV,通过PCR方法对PRV相关基因进行扩增,对毒株进行特异性试验和病毒滴度的测定,并通过动物试验对PRV的致病性进行了研究.结果表明:通过PCR可扩增出大小与预期相符的PRV gG基因片段、gE基因片段以及...     

猪伪狂犬病毒gE基因缺失毒株的构建及其免疫原性的研究

通过CRISPER/Cas9编辑技术编辑实验室分离得到的PRV-SX株的gE基因,并利用蚀斑纯化等方法得到gE基因缺失的突变株。通过T7E1核酸内切酶及测序来鉴定gE基因的缺失,并对gE基因缺失毒株的免疫效果进行了研究。结果表明:应用CRISPER/Cas9编辑技术成功得到了gE基因缺失毒株,用这一毒株制备疫苗免疫仔猪,免疫后0 d、14 d、28 d、42 d、56 d PRV gE抗体均为阴性;PRV gB抗体呈阳性,在42 d时达高峰。     

如何改善贮存种蛋的孵化率

正1利用贮存期短期孵化(Short Periods Incubation During Egg Storage,SPIDES)法,来提高种蛋孵化率贮存时间超过数天的种蛋,孵出的雏鸡质量不如储存时间为3 d~4 d的种蛋所孵出的雏鸡(图1)。储存过的种蛋孵化期间的早期胚胎死亡率更高,而幸存下来的鸡胚往往生长发育和出壳更加缓慢。一旦出壳时间推迟,部分雏鸡可能在计数时无法计入,在入舍时发育太迟而使其质量可能受到影响。     

稳定表达猪干扰素调节因子7的ST细胞株的建立

干扰素调节因子(IRF)在抗病毒感染中具有重要作用,为构建稳定表达猪IRF7 (pIRF7)的猪睾丸细胞系(ST),本研究从猪淋巴细胞中扩增获得pIRF7基因,将其插入pEGFP-C3载体中构建重组表达质粒pEGFP-pIRF7.并转染于ST细胞中,通过G418加压筛选及细胞纯化获得G418抗性ST细胞株(STA1).RT-PCR和western blot检测结果表明,STA1细胞株能够稳定表达重组pIRF7;而且以聚肌胞刺激STA1细胞可以观察到表达的pIRF7在细胞内具有核转位能力,该项研究为进一步研究猪瘟病毒对pIRF7的作用奠定基础.     

猪A组轮状病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立

本试验旨在建立一种检测猪A组轮状病毒的SYBR Green I实时荧光定量PCR方法.参考GenBank上登录的猪轮状病毒OSU株的VP6基因序列保守区设计一对特异性引物,通过RT-PCR方法克隆目的基因,并将其连入pMD 19-T Vector,制备阳性标准品,优化反应条件.建立的方法在1.0×102～1.0×109拷贝/μL范围内线性关系良好,反应扩增效率大于90％,扩增相关系数大于0.98.对猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪传染性胃肠炎病毒及猪圆环病毒2型均检测不到荧光信号,表明该方法特异性强.该方法批内和批间变异系数均小于2％,重复性好.结果表明,建立的SYBR Green I实时荧光定量PCR方法可为A组猪轮状病毒早期感染的诊断及病毒定量分析提供技术支持.