| 猪Jiv基因的克隆表达与多克隆抗体制备 |
| |
| 引用本文： | 刘 伟,郭抗抗,林 鸷,等.猪Jiv基因的克隆表达与多克隆抗体制备[J].西北农林科技大学学报(社会科学版),2015,43(2):7-13,22. |
| |
| 作者姓名： | 刘 伟 郭抗抗 林 鸷 等 |
| |
| 作者单位： | 西北农林科技大学 动物医学院,西北农林科技大学 动物医学院,西北农林科技大学 动物医学院 |
| |
| 基金项目： | 西北农林科技大学基本科研业务费项目(QN2011109)； 国家自然科学基金项目(31172339) |
| |
| 摘 要： | 【目的】克隆猪Jiv蛋白核心区的2 112bp的基因片段,构建其原核表达载体后进行蛋白的表达和纯化,制备抗猪Jiv蛋白的多克隆抗体。【方法】利用RT-PCR方法,从猪脾脏组织RNA中扩增得到猪Jiv基因,将其克隆到pMD19-T载体并测序,以此为基础构建原核表达载体pET32a-Jiv,转化E.coli Rosetta(DE3)感受态细胞中,利用IPTG诱导表达,获得大量包涵体形式的猪Jiv融合蛋白。通过镍离子螯合层析柱对表达的目的蛋白进行纯化,对纯化后的包涵体蛋白进行透析复性,以每只新西兰白兔400μg蛋白的初次免疫剂量和500μg蛋白的加强免疫剂量进行免疫,共免疫5次,采集血清,采用间接ELISA法检测抗体效价达到一定水平后,收集抗体,利用Western blot检测抗体特异性。【结果】克隆得到长度为2 112bp的猪Jiv基因片段;构建的pET32a-Jiv在E.coli Rosetta(DE3)感受态细胞中经诱导后高效表达,SDS-PAGE结果显示,纯化得到分子质量约为95ku的猪Jiv融合蛋白;测得的猪Jiv蛋白多克隆抗体效价达1∶6 400;Western blot检测结果证实,所获得抗体能够有效地应用于猪Jiv蛋白抗原的检测。【结论】成功地克隆了猪Jiv基因,制备了抗猪Jiv蛋白的多克隆抗体。
|
| 关 键 词： | 猪Jiv蛋白 原核表达 多克隆抗体 猪瘟病毒 |
| 收稿时间： | 2013/10/18 0:00:00 |
Cloning and expression of swine Jiv gene and preparation of its polyclonal antibody |
| |
| IU Wei,GUO Kang-kang and LIN Zhi,et al.Cloning and expression of swine Jiv gene and preparation of its polyclonal antibody[J].Journal of Northwest Sci-Tech Univ of Agr and,2015,43(2):7-13,22. |
| |
| Authors: | IU Wei GUO Kang-kang and LIN Zhi |
| |
| Institution: | LIU Wei;GUO Kang-kang;LIN Zhi;SHENG Jie;ZHAO Di;ZHAO Zi-yin;ZHANG Yan-ming;College of Veterinary Medicine,Northwest A&F University; |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | swine Jiv protein prokaryotic expression polyclonal antibody classical swine fever virus |
| 本文献已被 CNKI 等数据库收录！ |
| 点击此处可从《西北农林科技大学学报(社会科学版)》浏览原始摘要信息 |
| 点击此处可从《西北农林科技大学学报(社会科学版)》下载免费的PDF全文 |
|
