利用脂质体法建立转Toll样受体4基因大尾寒羊胎儿成纤维细胞株的研究

利用脂质体转染法获得转Toll样受体4(Toll-like receptors 4,TLR4)基因的成纤维细胞,将其作为供体细胞,再通过体细胞核移植技术构建重构胚,最终生产出转TLR4基因且性别可控的大尾寒羊。本研究通过原代培养大尾寒羊胎儿皮肤成纤维细胞,并进行SRY基因性别鉴定,利用脂质体转染法转入TLR4基因,然后分别从形态学与分子水平检测TLR4基因的表达,将稳定表达转TLR4的成纤维细胞核移植入绵羊去核卵母细胞中构建重构胚。最终获得5个稳定表达TLR4的阳性细胞克隆,经SRY基因性别鉴定为雌性细胞株,通过实时荧光定量PCR分析,在第4代转染的细胞中TLR4表达量最高,比未转染细胞高出7.4816倍(P<0.01),卵裂的重构胚中有EGFP的表达。试验成功构建出含TLR4基因的重构胚,为今后生产出性别可控的抗病转基因绵羊地方新品种奠定基础。     

木霉拮抗黄瓜枯萎病菌菌株的筛选

通过对峙培养、拮抗作用、耐性的测定,筛选出对黄瓜枯萎菌(Fusarium oxysporumf. sp. cucum erinum)拮抗作用强的木霉菌株(Trichoderma spp.)有13株,其中T55的拮抗作用最强。该菌株对峙培养对黄瓜枯萎菌抑菌率为80.16%,拮抗作用测定其圆盘滤膜法抑菌率大于50%,其它方法的抑菌率低于30%。该菌在5、10、35℃,pH4、9、10的条件下生长良好。     

稻瘟病拮抗菌Xi-55菌株鉴定及其发酵条件

通过对采集样品中细菌的分离获得生防菌Xi-55,经纯化培养后观察形态特征和生理生化特征,经比较鉴定,确定生防菌Xi-55为枯草芽孢杆菌。通过田间试验测定,初步确定了枯草芽孢杆菌Xi-55菌株防治稻瘟病的效果为86%。对该菌株发酵条件进行了研究,确定出最佳发酵技术参数,为微生物农药的开发提供理论依据。     

木霉生防菌T25与T55原生质体形成与再生条件的研究

通过不同菌龄、酶液、缓冲液?稳定剂系统、酶解时间、再生培养基组合等条件对木霉T25、T55原生质体制备和再生的影响研究,结果表明,木霉T25、T55原生质体制备和再生的最适条件为:崩溃酶13 mg/mL,0.2 mol/L磷酸缓冲液(PBS),pH5.8和0.6 mol/L NaC l组成的缓冲液稳定系统,木霉T25菌龄为20 h,木霉T55菌龄为26 h的菌丝体在30℃下,酶解3h后,可分别获得原生质体数量9.0×106个/mL、6.33×106个/mL,两菌的再生培养基都是以加入0.5%酵母膏和0.5%泛酸钙的改良Czapek与NaC l的组合培养基,T25与T55的再生率分别为1.150%和0.785%。     

影响绵羊胞质内单精子注射结果相应因素的分析

本实验探讨了绵羊卵母细胞成熟以及胞质内单精子注射的相应影响因素,以期优化绵羊ICSI的操作技术和体外成熟体系。本研究分别设定三组卵母细胞成熟时间（19~21h,23~25h, 28~30h）,同时比较“6”, “12”点和“7”, “11”点注射位置对胞质内单精子注射后胚发育的影响。结果表明,绵羊卵母细胞在成熟23~25h之间进行单精子注射后,其囊胚率显著高于19~21h和28~30h(6.30±0.59%vs 4.05±0.63%,3.59±0.29),研究注射位置对胚胎发育影响时研究结果显示,在“6”, “12”点注射后其胚胎的卵裂率（54.17±3.24 vs 46.40±3.22%）和囊胚率（5.88±0.30 vs 2.77±0.15）均明显高于“7”, “11”点。因此,实验表明,应尽量使用成熟23~25h的绵羊卵母细胞进行胞质内单精子注射,同时注射时应选择“6”, “12”点的位置,从而利于胚胎的后期发育。     

两种生态型富集植物及超富集植物的镉积累特性差异研究

通过盆栽试验,研究了镉污染条件下两种生态型(矿山和农田)的镉富集植物水田芥和猪殃殃、镉超富集植物牛膝菊和鬼针草的镉积累差异。结果表明,农田生态型水田芥、猪殃殃、牛膝菊和鬼针草的生物量、光合色素含量均大于矿山生态型。就镉含量而言,农田生态型水田芥的植株镉含量高于矿山生态型,但农田生态型猪殃殃、牛膝菊和鬼针草的植株镉含量低于矿山生态型。从镉积累量来看,农田生态型水田芥、矿山生态型猪殃殃和矿山生态型鬼针草的地上部分镉积累量均显著高于其各自的另一种生态型,而农田生态型水田芥、农田生态型猪殃殃和矿山生态型鬼针草均显著高于其各自的另一种生态型。矿山生态型牛膝菊与农田生态型的地上部分及整株镉积累量差异均不显著。因此,在选用富集植物或超富集植物进行土壤重金属污染修复时,应注意不同生态型的重金属积累差异。