响应面法优化贝莱斯芽孢杆菌CY30发酵培养基的研究

为了对贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)CY30的发酵培养基进行优化以提高芽孢产量,应用Plackett-Burman设计法对影响贝莱斯芽孢杆菌CY30芽孢形成的关键因子进行筛选,通过最陡爬坡路径法确定主要影响因素的响应中心点,并进一步采用中心组合设计和响应面分析法确定最优培养基。结果表明,该菌株芽孢产量的关键影响因素为甘薯粉和酵母膏的浓度。通过响应面分析法的拟合和推算得到,甘薯粉和酵母膏浓度分别为37.35 g/L和15.29 g/L时,模型预测发酵最佳产量为91.2亿CFU/mL,验证值为97.5亿CFU/mL,预测值与验证值之间吻合较好,比优化前实际产量(63.8亿CFU/mL)提高了53%。     

杀线虫苏云金芽胞杆菌NBIN-863高含量悬浮剂的研制

目前我国微生物农药原药生产技术已达到甚至超过发达国家水平,但制剂技术却存在较大差距,主要体现在剂型结构不合理、制剂质量差、农药助剂种类及品种少、剂型加工工艺总体水平还比较落后等方面。苏云金芽胞杆菌（Bt）等功能微生物产品的市场容量及应用效果与剂型是密切相关的。为了明确新型生物杀线剂NBIN-863的最佳施用剂型,特开展此试验。通过对防腐剂、分散剂、悬浮剂等不同助剂的选择,研制了一种高含量Bt悬浮剂（5.2×10⁹～7.9×10⁹CFU/mL）。配方优化试验表明,在Bt发酵液中加入0.4%防腐剂山梨酸钾、1.0%分散剂硅酸镁铝、4.0%悬浮剂木质素磺酸钙,用盐酸调节pH至4.5,54℃热储前芽胞数最高为7.9×10⁹ CFU/mL,对秀丽隐杆线虫活性最高,LC₅₀为2.83 mg/L,对黄瓜根结线虫田间防效达68.64%。综合各指标,尤其是对秀丽隐杆线虫的半致死浓度,杀线虫NBIN-863悬浮剂（7.9×10⁹ CFU/mL）效果最好,不仅流动性好,而且耐贮藏,是防治作物根结线虫病的理想药剂。     

一株侧孢芽孢杆菌发酵条件和培养基的优化

为获得一株侧孢芽孢杆菌(Bacillus laterosporus)(NBF-129)发酵工艺,以发酵液活芽孢数为指标,在单因素试验基础上,采用正交试验对其培养基及培养条件进行优化。培养基优化结果为玉米淀粉2.0%、蚕蛹粉2.5%、酵母浸出粉1.0%、玉米浆1.0%。最佳培养条件为初始pH 7.5,培养温度30℃,转速220 r/min。优化后的侧孢芽孢杆菌摇瓶发酵液芽孢数达到4.12×10~9 CFU/mL,较优化前的2.30×10~9 CFU/mL提高79.1%。利用优化后的培养基和培养条件进行了30 L罐发酵小试,发酵周期为35 h,发酵液芽孢数为3.96×10~9 CFU/mL,发酵液离心浓缩后菌浆冷冻干燥,得到原粉芽孢数为6.70×10~(10) CFU/g。     

透明颤菌血红蛋白基因在多粘芽孢杆菌中的克隆和表达

本研究将启动子P43与透明颤菌血红蛋白(Vitreoscilla hemoglobin)基因(vgb)通过重叠PCR进行融合,克隆到芽孢杆菌表达载体p CM20上,将筛选得到的重组载体p CM20-vgb转化多粘芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)NR1,Western-Blot表明重组菌株表达了VHb蛋白,该蛋白的表达对重组菌体的生长和多粘菌素的产生均有促进作用。     

多粘芽孢杆菌中2,3-丁二醇脱氢酶的克隆和表达

将来自于多粘芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)中的2,3-丁二醇脱氢酶基因pla C在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21中进行了诱导表达,并对其酶学性质进行研究。结果表明,该基因的表达产物主要是生成内消旋型2,3-丁二醇,其氧化2,3-丁二醇的最适温度是50℃,最适pH为10,而还原乙偶姻的最适温度为60℃,最适pH为6。     

苏云金杆菌以色列亚种L-10菌株培养基优化研究

利用单因素筛选和正交试验,对苏云金杆菌以色列亚种Bti-L-10高毒菌株的发酵培养基进行了优化,得到其最佳培养基配方为:淀粉3%,氮源B 0.50%,氮源C 0.75%,氮源D 4.00%,氮源G 1.00%.通过200 L和40 000 L发酵罐分别发酵,发酵液效价分别为379 ITU/mg和327 ITU/mg,发...     

17600IU·mg~(-1)Bt悬浮剂防治小菜蛾田间药效试验

应用17 600IU·mg-1 Bt悬浮剂防治小菜蛾幼虫,结果显示,17600IU·mg-1 Bt悬浮刑1 125 g·hm-2的防效为94.36%,高于16 000IU·mg-1 Bt可湿性粉剂1 125 g·hm-2的防效(85.53%),是防治小菜蛾的有效生物药剂,推荐使用浓度为750～1125 g·hm-2.     

石油污染土壤的微生物修复研究进展

在污染土壤修复技术中,微生物修复成本低廉、操作简单、修复效果好,是一类环境友好的绿色技术,在当前最具应用前景.对石油污染土壤的微生物修复技术及其影响因素进行了全面评述,并针对该方法的局限性对其研究重点进行了展望.     

苏云金芽孢杆菌以色列亚种(Bti)发酵液的浓缩工艺研究

通过对苏云金芽孢杆菌以色列亚种(Bacillus thuringiensis subsp. israelensis,Bti)发酵液浓缩工艺的研究,探索了不同温度对浓缩液有效成分的影响程度,比较了不同浓缩方式、不同干燥方式处理下有效成分的回收率。结果表明,采用真空薄膜浓缩方式最终得到的产物质量是离心浓缩方式得到产物质量的176%,效价回收率提高了36%。     

贝莱斯芽孢杆菌CY30菌株的常压室温等离子体诱变育种研究

采用常压室温等离子体诱变贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)CY30菌株。菌株的致死率强度结果表明,在电源功率为100 W,处理距离2 mm,工作气流量10 L/min时,等离子体对CY30菌株诱变最优处理时间为50 s。通过显微镜检初筛诱变菌株,并利用摇瓶发酵结合芽孢数测定和杀菌活性评价进行复筛,建立完整的诱变筛选体系。通过斜面镜检初筛、摇瓶三轮复筛,获得摇瓶液芽孢数122.3亿/mL,杀菌活性75.58%,且遗传稳定的突变菌株CY30-314。突变株发酵水平较出发菌株芽孢数提高25.3%,杀菌活性提高15.6%,发酵周期缩短了2 h。