胶冻样芽孢杆菌发酵中试研究

利用单因素筛选和正交试验,对胶冻样芽孢杆菌菌株NBF-266的发酵培养基进行了优化,得到其最佳培养基配方为甘油0.8%,淀粉0.6%,花生粕1.5%,碳酸钙0.1%。通过400 L和5 000 L发酵罐分别发酵,发酵液芽孢产量分别为18×10~8 CFU/mL和15.8×10~8 CFU/mL,发酵液经不同方式浓缩干燥,得到冻干粉和喷雾干燥粉芽孢产量分别为2 910×10~8 CFU/g和933×10~8 CFU/g。     

枯草芽孢杆菌BZJN1发酵培养基和培养条件的优化

对枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BZJN1发酵培养基及培养条件进行优化。结果表明,BZJN1菌株最适发酵培养基为玉米粉25.0 g/L、鱼粉25.0 g/L、工业蛋白胨15.0 g/L、玉米浆5.0 g/L、碳酸钙1.0 g/L、硫酸镁0.3 g/L、磷酸二氢钾0.1 g/L。最适发酵培养条件为初始pH 7.0、培养温度30℃、接种量4%、转速220 r/min,在此条件下,发酵液芽孢数可达9.68×10~9 CFU/mL,相比初始基础发酵培养基及培养条件下的发酵水平提高了约2倍。     

侧孢芽孢杆菌C5发酵条件及培养基的优化

为了更加有效地利用侧孢芽孢杆菌C5,研究了该菌株的生长特性,并对其发酵条件及培养基进行了优化。结果表明,侧孢芽孢杆菌C5的生长规律为:0~4h延滞期,4~16h指数期,16h后进入稳定期;最佳发酵条件为:初始pH值7.0、培养温度30℃、接种量3%~5%、转速180r/min;最适培养基为:葡萄糖20.0g/L、酵母膏10.0g/L、MnSO_4 0.2g/L、CaCl_2 0.3g/L、KH_2PO_4 0.1g/L、MgSO_4 0.05g/L。在上述条件下,侧孢芽孢杆菌C5的发酵芽孢数可达1.08×109CFU/mL。     

嗜气芽孢杆菌ZDXC-01产芽孢培养条件的优化

为了提高嗜气芽孢杆菌的有效活菌数和芽孢数,采用单因素筛选和正交试验法对菌株的发酵条件进行了优化。结果表明,优化后的最佳发酵条件为发酵时间30～36 h、接种量5%、温度37℃、转速200 r/min、起始p H值7.5、装液量25 mL/250 mL。优化后发酵菌液含菌量为5.8×10~9cfu/mL,与初始发酵工艺的发酵菌液含菌量(2.2×10~9cfu/mL)相比,提高了163.6%;优化后发酵菌液芽孢数为5.5×10~9cfu/mL,与初始发酵工艺的发酵菌液芽孢数(1.8×10~9cfu/mL)相比,提高了205.6%。     

防治辣椒疫病的生防菌培养条件优化与菌剂复配

为研制对辣椒疫病具有明显防治效果且田间稳定性好的生防菌剂,采用正交试验设计优化了美丽短芽孢杆菌NF2、多黏类芽孢杆菌J和枯草芽孢杆菌Q14的培养条件,并进一步筛选了3种芽孢杆菌组成的复合生防菌剂配比方式。结果表明,在优化后的培养条件下,3种芽孢杆菌的活菌数均可稳定在2.0×10~8CFU/mL以上,当菌株NF2、J和Q14的活菌数分别为1.0×10~8、1.0×10~7、1.0×10~6CFU/mL,按照1:1:1体积比配比制备时,与清水对照相比,复合生防菌剂可促进辣椒增产39.2%,对辣椒疫病的防效大于70%,并可在根际土壤中稳定存活和繁殖100 d以上。     

枯草芽孢杆菌Xi-55液体发酵条件的优化及防治稻曲病试验

通过单因素试验和正交试验,对枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)Xi-55的液体发酵培养基和工艺条件进行了优化,确定了在500 mL锥形瓶中发酵培养基的最佳培养基为:蛋白胨3%,甘油1.0%,K2HPO40.05%,MgSO4.7H2O 0.15%;最适发酵条件为:时间36~48 h,温度28~30℃,初始pH为7,接种量2%,装液量100 mL/500 mL锥形瓶。20 L发酵罐扩大培养的初始pH为7.2,发酵温度28℃±0.5℃,通气量10 L/min,搅拌转速180 r/min,罐压0.05~0.06 MPa,发酵终止在44 h前,最佳放罐时间为40~44 h,此时发酵液中的细菌含量为5.06×1010cfu/mL。小区试验显示,枯草芽孢杆菌Xi-55发酵液对稻曲病的防治效果为63.22%。     

凝结芽孢杆菌的产孢条件及高密度培养工艺

为提高凝结芽孢杆菌发酵产孢率,通过单因素试验、Plackett–Burman设计、爬坡试验、中心复合试验对凝结芽孢杆菌高密度发酵工艺进行优化。结果表明：凝结芽孢杆菌最佳培养基组分为麸皮36.91 g/L、玉米浆干粉13.70 g/L、MnSO4 0.84 g/L,在此条件下凝结芽孢杆菌发酵产芽孢数达到2.848×1010 cfu/mL,相比优化前芽孢数提高了61.72%;在优化的培养基基础上进行500 L发酵试验,培养条件为发酵温度40 ℃、转速150 r/min、通气量2.5 m3/h、接种量5%、pH 7.0、培养时间36 h,发酵液芽孢数达到2.98×1010 cfu/mL,与优化试验结果相近,为进一步优化生产工艺提供了必要的数据支撑。     

解磷芽孢杆菌YC４液体培养基及发酵条件的优化

对从养殖池塘中筛选出的一株具有解磷特性的芽孢杆菌YC4进行液体培养基和发酵条件的优化实验.在摇床培养条件下,研究了各营养源和主要影响因子对菌株YC4生长和芽孢形成的影响,并建立了菌株的生长曲线.结果显示:解磷芽孢杆菌YC4最佳发酵培养基配方为糖蜜10‰、大豆蛋白粉5‰、酵母膏5‰、磷酸二氢钾5‰、硫酸镁1.5‰、氯化钠15‰、玉米浆5‰;最适发酵条件为温度30℃,初始pH值为7.0～7.5,接种量1％,摇床转速200r/min;最适收获时间为24 h.优化后总菌量达1.23×109 CFU/mL,芽孢产量达1.01×109 CFU/mL,明显高于基础培养基发酵结果.     

饲用地衣芽孢杆菌TS-Ⅱ菌株发酵培养基及发酵条件优化

[目的]地衣芽孢杆菌规模化发展.[方法]采用碳、氮源及微量元素的筛选实验和正交实验.[结果]确定地衣芽孢杆菌TS-Ⅱ菌株发酵培养基的最佳组分为(g/L):蔗糖60、蛋白胨30、NaCl 30 、K2HPO4 2、MgSO4 1、FeSO4 0.02、MnSO4 0.01.对发酵条件进行了研究,发酵的最适初始pH值为5.5,最适培养温度为35℃,最适装液量为10 mL(250 mL三角瓶).[结论]通过优化培养基组分和培养条件后,菌株TS-Ⅱ活菌数达到了6.58×10~(10) CFU/mL,为以后的工业化生产奠定基础.     

复合益生菌芽孢杆菌发酵培养基及条件的优化

为了获取活菌数高、抗性强、经济效益好的益生菌制剂,对复合益生菌芽孢杆菌制剂的培养基配方及各项发酵工艺参数进行了优化。选取枯草芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌进行联合培养,并采用单因子试验和正交试验对其发酵培养基成分进行了优化,在此基础上对其发酵条件做了进一步优化。优化后最佳培养基成分为:废糖蜜初始pH值7.5,转速160 r/min,接种量8%,装液量40%。经优化后活菌数得到显著提高,达到6.62×1010CFU/mL。     

海洋细菌GM-1-1产芽孢发酵培养基和摇瓶发酵条件优化

[目的]优化海洋解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)GM-1-1的产芽孢发酵培养基和摇瓶发酵条件,为该菌株的开发和应用提供理论依据.[方法]以GM-1-1菌株发酵液中的细菌总数和芽孢产率为检测指标,采用单因素和正交试验对该菌株产芽孢发酵培养基和摇瓶发酵条件进行优化;GM-1-1菌株发酵完成后喷雾干燥制成菌粉,加入不同助剂制成有效含量为1010 CFU/g的可湿性粉剂用于水稻纹枯病田间防治试验.[结果]GM-1-1菌株产芽孢最佳发酵培养基配方为麦麸0.75%、花生饼粉2.5%、CaCO30.05%;最佳发酵条件为pH 7,温度30℃,250 mL三角瓶装液量60 mL,接种量8%,转速200 r/min,培养时间54 h.优化后GM-1-1菌株发酵培养基的细菌总数和芽孢产率分别达7.40×109个/mL和89.42%.田间防治试验结果表明,GM-1-1可湿性粉剂对水稻纹枯病的防治效果最高可达82.06%.[结论]优化后的培养基和发酵条件可有效提高GM-1-1菌株的细菌总数和芽孢产率,且培养基成本低、来源广泛.GM-1-1可湿性粉剂对水稻纹枯病有较好的防治效果,可用于生产菌剂并推广应用.     

1株耐盐枯草芽孢杆菌TGBio-1433发酵工艺优化

对1株耐盐枯草芽孢杆菌TGBio-1433培养基、培养条件进行了优化;为了获得更高的菌体浓度,还探索了枯草芽孢杆菌TGBio-1433补料分批发酵工艺。试验结果表明,最优培养基为:玉米粉10 g/L、豆粕粉20 g/L、葡萄糖15g/L、蛋白胨15 g/L、牛肉膏5 g/L、MgSO_41 g/L、CaCO_37 g/L。最优培养条件为:起始pH 7.0~7.5,发酵温度35℃,培养时间18~20 h,接种量5%补料分批发酵工艺为:发酵16 h后,一次性补加碳、氮源(葡萄糖∶蛋白胨∶牛肉膏=3∶3∶1)总量的15%。枯草芽孢杆菌TGBio-1433发酵液活菌数由最初的24.2×10~8cfu/m L提高到136.1×10~8cfu/m L。     

一株胶冻样芽孢杆菌培养条件的优化及其解钾活性

[目的]优化该胶冻样芽孢杆菌培养条件及测定其解钾活性。[方法]用火焰光度计法测定胶冻样芽孢杆菌的解钾量;通过大白菜的田间试验验证解钾功能;通过培养基成分及培养条件的优化,获得最佳培养基和培养条件。[结果]用火焰光度计法测定胶冻样芽孢杆菌的解钾量为121.3 mg/L,其解钾率为12.06%;将其应用到喜钾作物大白菜上,通过大白菜的田间试验,与K₀（空白对照）组相比大白菜产量增加了15.5%,与只加硫酸钾的K₁相比,产量差异不大;通过培养基成分及培养条件的优化,获得最佳培养基配比为蔗糖1.0%、酵母浸粉0.1%、硫酸镁0.02%、磷酸氢二钾0.05%,最适培养条件为温度30℃、pH 7.0、转速200 r/min,发酵结果有效活菌数达到17.5×10⁸ CFU/mL,芽孢率≥95%,解钾率提高到23.02%。[结论]该胶冻样芽孢杆菌可以将土壤中不可直接被作物吸收利用的钾素分解为作物可以直接利用的速效钾形态。     

复合益生菌液态发酵黄芪的制备方法

为研究复合益生菌液态发酵黄芪的制备方法,提高发酵液在临床应用中的作用效果,利用排列组合的方法,将枯草芽孢杆菌、酵母菌、乳酸菌按顺序接种至同一培养基,培养一定时间后观察各菌种的生长情况,确定菌种接种顺序;然后再用单因子试验法,以发酵液中菌体数量为指标,确定枯草芽孢杆菌的发酵时间,乳酸菌和酵母菌的接种时间、接种量以及发酵时间;最后,按优化的培养条件进行中试扩大试验,分别测定发酵液中各种菌体的数量。结果显示,利用多菌种对黄芪提取液进行混合发酵的制备方法能够实现,接种顺序为枯草芽孢杆菌、酵母菌、乳酸菌;最优发酵条件为:枯草芽孢杆菌以3. 0%的接种量,于37℃培养24 h后,以2. 0%的接种量接入酵母菌,于28℃培养48 h后,再以0. 5%的接种量接入乳酸菌,于37℃静置培养24 h;中试扩大试验所得发酵液中,枯草芽孢杆菌、酵母菌、乳酸菌含量分别为28. 52×10~8、5. 71×10~8、9. 34×10~8cfu/mL,终末pH值为4. 55。因此,利用复合益生菌液态发酵黄芪的制备方法具有较好的可行性。     

解淀粉芽孢杆菌T1增殖培养基配方及培养条件优化

以解淀粉芽孢杆菌T1为研究菌种,从5种培养基中选出最有利于其生长的基础发酵培养基,并通过单因子试验和正交试验,对基础发酵培养基的配方及发酵条件进行了优化。结果表明,解淀粉芽孢杆菌T1的最优培养基配方为复合氨基酸营养液1%、蛋白胨1.5%、糖蜜5%、可溶性淀粉2.5%。最优培养条件为pH 7.0,装瓶量80 mL/250 mL、接种量5%、温度37℃、摇床转速180 r/min、发酵时间36 h。优化后的培养液中解淀粉芽孢杆菌T1活菌数由1.4×109cfu/mL增加至3.5×109cfu/mL。     

一株泡叶藻降解菌的筛选及其发酵条件优化

为了利用微生物降解泡叶藻,本研究以泡叶藻为唯一营养物质从土壤中筛选到一株对泡叶藻有明显降解效果的菌株,编号2-2。根据其形态学特征、生理生化特性和16S rDNA序列分析鉴定该菌株为巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)。对菌株的发酵条件进行了优化,最优发酵培养基为:泡叶藻30 g/L、酵母粉6 g/L和葡萄糖4 g/L。摇瓶最佳培养条件为:250mL三角瓶装液量50 mL,起始pH7.5,发酵温度32℃,发酵48 h有效活菌数为2.4×10~9CFU/mL。并对发酵液酶活进行了测定,其中纤维素酶活为47.7 U/mL,蛋白酶活为3.4 U/mL,海藻胶裂解酶活为0.721U/mL。研究结果表明巨大芽孢杆菌2-2同时具有海藻胶裂解酶、蛋白酶和纤维素酶活性,具有良好的应用前景。     

温度和pH值对生防双向伯克霍尔德氏菌XNNH08发酵特性的影响

为了提高5 L发酵罐上生防双向伯克霍尔德氏菌XNNH08发酵过程中的活菌数量,本研究在细菌基础培养基及培养条件下,开展了培养温度和初始pH值对该菌发酵特性的影响。结果表明:在基础培养基条件下,双向伯克霍尔德氏菌XNNH08的最适生长温度为32℃,最适初始pH值为6.0;通过2个关键发酵条件的优化,发酵活菌数由原来的1.6×10~9CFU/mL提高到1.7×10~(10) CFU/mL,活菌数显著提高。本研究可为该生防菌后续培养基的优化提供参考。     

液化淀粉芽孢杆菌YM3发酵配方研究

为筛选液化淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)YM3的发酵配方,初期以摇瓶进行培养,确定最适配方并以此配方进行培养条件筛选。结果表明最适配方为糖蜜0.5%、乳糖1%、大豆分离蛋白2%,以此配方进行培养条件研究,接种24 h内菌量显著提升1000倍,24~8 h菌量显着提升10倍,此后培养菌量无显着差异。其他培养条件如不同温度、p H之间菌量则无显着性差异。用10 L发酵槽测试,显示以糖蜜0.5%、乳糖1%、大豆分离蛋白2%作为培养基,转速200至300 r/min、温度30℃、p H无调整,培养5 d,可得到菌量4×109CFU/m L以上之发酵液。利用1 t大型发酵槽以相同的培养基培养,发酵条件为30℃、转速160~200 r/min、通气量0.5 vvm,培养5 d,其菌量可达6×108CFU/m L以上。该发酵配方可以用来大量生产液化淀粉芽孢杆菌。     

新疆苏云金杆菌35高效菌株小试生产发酵影响因子的研究

通过以棉铃虫4龄幼虫为供试昆虫的生物测定,对从新疆兵团145团棉田自然死亡棉铃虫体内分离筛选到的一株高效苏云金杆菌(Bacillusthuringiensis,Bt)菌株35,进行了发酵工艺的初步研究.对Bt菌株35进行了摇瓶发酵和小试发酵,利用2L全自动发酵罐优化了发酵培养基和操作条件.优选培养基的组分为:棉籽饼3.25%、玉米粉1.4%、麸皮1.2%、KH2PO4 0.11%、FeSO4 0.0049%,该培养基与对照培养基相比,发酵液含菌数高达40.8×108cfu/mL,比对照培养基提高了63.7%,发酵液毒力高达66.1%,比对照培养基提高了81.5%.利用CaCO3调节pH值,可使活菌数提高37%,发酵周期缩短9 h;28℃发酵活菌数比30℃增加12.1%,发酵时间延长3h,最适发酵产孢温度为30℃;以芽孢接种,其发酵时间比营养体接种延长3 h,最优接种方式为营养体接种;溶氧对发酵有较大的影响,当发酵全程采用1:0.8 vvm的通气量时,最终发酵菌数为38.1×108cfu/mL;当发酵前期、中期、后期的溶氧分别为1:1.0 vvm、1:1.4 vvm及1:1.2 vvm时,活菌数可达72.5×108cfu/mL,发酵水平提高约1倍.对Bt发酵液进行生物测定,发酵原液(Bt离心沉淀物 上清液)的LC50比去掉上清液的沉淀物提高了37.1%,说明上清液能提高发酵液的毒力.     

响应面法优化贝莱斯芽孢杆菌CY30发酵培养基的研究

为了对贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)CY30的发酵培养基进行优化以提高芽孢产量,应用Plackett-Burman设计法对影响贝莱斯芽孢杆菌CY30芽孢形成的关键因子进行筛选,通过最陡爬坡路径法确定主要影响因素的响应中心点,并进一步采用中心组合设计和响应面分析法确定最优培养基。结果表明,该菌株芽孢产量的关键影响因素为甘薯粉和酵母膏的浓度。通过响应面分析法的拟合和推算得到,甘薯粉和酵母膏浓度分别为37.35 g/L和15.29 g/L时,模型预测发酵最佳产量为91.2亿CFU/mL,验证值为97.5亿CFU/mL,预测值与验证值之间吻合较好,比优化前实际产量(63.8亿CFU/mL)提高了53%。