应用EST-ILPs分子标记技术快速鉴定菟丝子属种子

为探索应用EST-ILPs分子标记技术快速鉴定菟丝子种子的方法,从网站(http:∥ibi.zju.edu.cn/pgl/pip/index.html)上公布的ILPs标记中选取旋花科番薯属(Ipomoea)已经设计好的引物10对,对菟丝子样品进行PCR扩增,寻找种间特异性条带.对菟丝子的5个近似种进行ILPs-PCR反应结果表明:应用引物IP9进行扩增反应,恩氏菟丝子在250 bp左右具有一条特异性条带;应用引物IP4进行扩增反应,日本菟丝子在240 bp左右显示一条特征条带;通过菟丝子内含子基因型的多态性特征可以区分供试的5种菟丝子.EST-ILPs分子标记检测菟丝子近似种作为菟丝子种间鉴定的一种新的研究途径,为口岸杂草检疫鉴定提供了一种快速、准确的检测方法和科学依据.     

菟丝子RAPD反应体系的建立和优化

以南方菟丝子基因组DNA为试材,采用单因素递进筛选方法对菟丝子的RAPD反应体系进行了优化。结果表明,在25μL总反应体积中,最佳浓度配比为：模板DNA 20 ng,MgC l23.0 mmoL/L,引物10μmoL/L,dNTP 400μmoL/L,TaqDNA聚合酶1个单位（U）,10×反应缓冲液2.5μL。扩增程序为：94℃变性3 m in,再进入循环;94℃变性1 m in,40℃退火1m in,72℃延伸1 m in,共40个循环;72℃最终延伸10 m in,于4℃保存。     

菟丝子属5个种的种子DNA微量提取方法比较

本研究以Cuscuta属中5个种的种子为实验材料,分别采用CTAB、SDS、Moller与TaKaRaDNA提取试剂盒这4种方法提取DNA;并对不同方法所提取DNA的纯度、DNA质量浓度、DNA提取率进行比较分析。结果表明：用SDS的方法对Cuscuta属5个种的种子DNA的提取为最佳方法。