口蹄疫O型重组病毒的构建及其生物学特性分析

传统灭活疫苗的免疫接种是预防和控制口蹄疫的重要手段,但口蹄疫病毒极易发生变异而常导致新突变株的产生,从而使现有疫苗不能有效防控当前流行的口蹄疫,经常需要筛选与当前流行毒株抗原匹配性好、免疫原性和复制特性优良的疫苗候选毒株。在比对分析Cathay和Pan-Asia谱系不同时间经典疫苗毒株和我国当前主要流行毒株(SEA-Mya98谱系)VP1结构蛋白的基础上,借助反向遗传操作技术,在已构建含当前流行毒株VP1基因全长感染性克隆的骨架上,引入2个氨基酸的替换(VP1 H28Q+S47Q),构建重组全长质粒,并通过转染表达T7RNA聚合酶的BSR/T7细胞成功拯救到活的重组病毒。重组病毒具有和亲本病毒相似的噬斑表型和一步生长曲线,却降低热稳定性,增强了对乳鼠的致病力。研究结果为进一步开发与当前流行毒株抗原匹配性好、免疫原性和复制特性优良的FMD疫苗候选毒株奠定了基础。     

口蹄疫病毒Asial/JS/China/2005株基因组全长感染性克隆的构建

利用长距离RT-PCR技术扩增病毒基因组3'端覆盖口蹄疫病毒Asial/JS/China/2005株近全长的3个片段(共约7.5 kb),并利用单一酶切位点将其分别克隆到pBlueseriptSK+载体上.利用融合PCR扩增到基因组5'端含有15个C碱基的基因片段(约700 bp),并将其连接至pGEM-T载体.最后将这4个片段的阳性克隆装配至剔除T7启动子的低拷贝载体pcDNA3.1/Zeo(+)中构建该病毒株的全长cDNA克隆.以构建的FMDV Asial/JS/China/2005株全长cDNA为模板,使用TTRNA聚合酶在体外转录得到病毒RNA,通过脂质体将其导入BHK细胞获得拯救病毒.对收获的病毒分别用RT-PCR、间接免疫荧光、电子显微镜观察和乳鼠致病性分析结果证实,通过体外转录获得了具有感染性的口蹄疫病毒.该株感染性克隆的构建为深入研究口蹄疫病毒的致病机制及研制新型疫苗等奠定了基础.     

不同含水量花生粕与豆粕霉菌生长规律的比较研究

试验通过采用保鲜盒封闭保藏,模拟密闭缺氧的储藏环境,研究了不同含水量的花生粕和豆粕的霉菌生长规律,以及霉菌生长对花生粕和豆粕含水量的影响。试验设12%、14%和17%3个水分梯度,储藏周期为49 d,每5 d取样1次。取样后立即采用国标的方法测定花生粕和豆粕的含水量,采用平板菌落计数的方法测定试样中的带菌量。结果表明:在密闭缺氧的环境中,不同含水量花生粕和豆粕的霉菌生长规律存在显著差异。与豆粕相比,低含水量花生粕更易滋生青霉、局限曲霉和灰绿曲霉,高含水量花生粕更易滋生黄曲霉。高含水量条件下,花生粕比豆粕霉变速度快。含水量与禾谷镰刀菌的生长极显著相关(P<0.01),与青霉、局限曲霉的生长显著相关(P<0.05)。含水量和原料及其交互作用与黄曲霉的生长极显著相关(P<0.01)。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP2抗原表位区的原核表达及免疫原性分析

试验旨在表达纯化猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP2重组蛋白。利用PCR技术扩增获得大小为750 bp的NSP2 226－475位氨基酸编码序列,然后将该序列亚克隆到pET-28a（+）表达载体上,通过pET-28a（+）表达载体在大肠杆菌Rosetta-gami 2（DE3）pLys中得以表达,获得大小为29 ku的重组蛋白,对重组蛋白诱导时间进行优化,SDS-PAGE显示重组蛋白在37 ℃经1 mmol/L IPTG诱导8 h时表达量最大,免疫印迹结果证实表达的蛋白能被PRRSV阳性血清识别,具有良好的免疫原性。本研究成功表达纯化了NSP2重组蛋白,为目标蛋白作为包被抗原建立检测PRRSV血清抗体的ELISA方法奠定了基础。     

宁夏地区沟眶象、臭椿沟眶象生物学特性初步研究

沟眶象Eucryptorrhynchus chinensis(Oliyier)和臭椿沟眶象Eucryptorrhynchus brandti(Harold)均属鞘翅目,象虫科,属蛀干害虫,二者常混合发生,其食性专一,主要危害臭椿及其变种千头椿,在我国西北、华北、东北等10余个省(自治区、直辖市)均有发生。近年来,随着宁夏城镇造林绿化步伐的加快,苗木外调品种、数量急剧增加,来源渠道广泛。1998年沟眶象和臭椿沟眶象(以下简称沟眶象)随苗木的外调内引传入宁夏,截止2008年沟眶象的危害面积已达0.5万hm2。为了解该虫在宁夏的消长趋势,并适时采取措施控制其为害,特进行本次研究。     

苹果小吉丁虫的发生规律及防治对策

苹果小吉丁虫 ( Agrilus mali Matsumura)为我区检疫对象 ,1993年传入我县 ,1994～ 1996年大面积危害苹果树 ,轻则生长受阻 ,重则枝条枯死。笔者在宁夏回族自治区检疫总站孙普同志的指导下对其发生规律进行了调查研究 ,并提出防治对策。1　形态特征及为害状苹果小吉丁虫主要为害苹果、槟沙果、海棠、楸子、花红等苹果属果树。雌、雄成虫体长分别为 7～9mm和 6～ 8mm ,全体紫铜色 ,有金属光泽 ,各部密布小点刻。头部扁额垂直 ,头顶有明显的中脊。触角11节 ,第 4～ 11节呈锯齿状。前胸背板横长方形 ,周围镶边。翅鞘窄 ,基部明显凹陷 ,翅端尖…     

宁夏固原市甘肃鼢鼠的危害规律和防控研究

甘肃鼢鼠Myospalax cansusLyon在固原市1a有2个危害高峰期。在其适生的区域内,对林木的危害阳坡重于阴坡,旱年重于丰雨年。减少整地面积、人工加快林地郁闭、提前栽植饵木树可以减轻鼠害,把鼢鼠的尸体、动物皮毛埋在林木根部,或者在林木根部施用土炕肥、灌入烟油水,也可以减轻鼠害。     

宁夏引黄灌区沟眶象及臭椿沟眶象生物学习性研究

对宁夏引黄灌区沟眶象及臭椿沟眶象生物学习性进行了研究,结果表明沟眶象成虫有嗜好生物系资源气味和黄油蒿、东北青蒿气味的习性,有趋向上述气味选择寄主产卵和集中交配、产卵的习性等一系列习性。揭示了沟眶象在宁夏引黄灌区发生、发展、分布、危害的基本规律。     

共表达O型口蹄疫病毒P12A+3C基因的重组杆状病毒的构建

构建共表达O型口蹄疫病毒(Foot and mouth disease virus,FMDV)衣壳蛋白前体P12A和蛋白酶3C的重组杆状病毒,为进一步研究FMDV空衣壳抗原和基因工程亚单位疫苗奠定基础。从质粒T-OP1中扩增出编码O型FM-DV衣壳蛋白前体的P12A基因,并将其插入到杆状病毒转移载体pFastDual-3C的PH启动子之下,构建重组杆状病毒转移载体pD-P12A3C。通过在大肠杆菌内转座重组,获得重组杆粒B-P12A3C,转染Sf9细胞,获得表达O型FMDV衣壳蛋白的重组杆状病毒。重组杆状病毒经增殖并感染Sf9细胞后,通过双抗体夹心ELISA方法及间接免疫荧光来检测目的蛋白的表达。结果表明,表达产物能被O型FMDV阳性血清识别,具有一定的反应原性,表明重组杆状病毒构建成功,该研究为O型FMDV空衣壳的体外组装及基因工程亚单位疫苗的研究提供了前期材料。     

饵木诱杀十斑吉丁虫初报

十斑吉丁虫(Melanophila decastigmaFabricius)是引黄灌区小叶杨、合作杨、箭杆杨、旱柳的重要钻蛀性害虫之一。其幼虫在树干韧皮部与木质部之间蛀食,破坏输导组