木薯MeNRT2.5基因的克隆及表达分析

木薯具有高产、耐旱、耐贫瘠等特点,为了解其耐贫瘠的作用机理,提高木薯在贫瘠土壤中对氮素的利用率,以30 d龄的"华南8号"组培苗为实验材料,采用同源克隆技术获得1个高亲和性硝酸根转运蛋白基因NRT2。生物信息学分析结果表明,该基因开放阅读框全长1 479 bp,编码492个氨基酸,命名为MeNRT2.5。MeNRT2.5蛋白有10个跨膜区域,与橡胶树、油桐树、可可树等物种的NRT2.5蛋白具有较高的同源性,其氨基酸序列相似性分别为94%,89.84%,87.40%。半质量RT-PCR结果表明,MeNRT2.5基因在根、茎、叶、花等各个器官均有表达,在成熟木薯植株的根中和组培苗的叶中表达量较高。实时荧光定量RT-PCR分析表明,MeNRT2.5在低浓度NO_3~-(0.3 mmol·L~(-1))处理后,其在根中的表达量在6 h时达到峰值;高浓度NO_3~-(3 mmol·L~(-1))处理后,其表达量在根茎叶中均没有明显变化,即该基因的表达被高浓度NO_3~-所抑制。该研究结果为进一步分析MeNRT2.5在木薯中的功能验证奠定理论基础。     

TAIL-PCR的技术改良及对香蕉NBS-RGC5基因侧翼序列的克隆

香蕉枯萎病是一种毁灭性真菌病害,对香蕉的种植和产业发展危害严重,研究香蕉枯萎病相关的抗性基因,具有重要的理论意义。对TAIL-PCR进行技术改良,以简并引物组合的方式与特异性引物进行扩增,代替最初的单一简并引物方式,在TAILPCR 第一轮扩增的大循环中设置不同的退火温度;采用改良后的TAIL-PCR成功克隆了巴西蕉NBS型抗性蛋白（NBS-RGC5）基因的侧翼序列。     

4种葱科植物粗提液对香蕉枯萎病菌的抑制效果

分别采取高温灭菌和滤菌器过滤2种方式,对韭菜、大蒜、大葱、洋葱等4种葱科植物的组织粗提液进行除菌,并用其进行香蕉枯萎病病原菌(Fusarium oxysporum f.sp.cubense)的拮抗实验。结果表明:滤菌器过滤处理组比高温灭菌处理组对香蕉枯萎病菌的抑制效果更显著;在滤菌器除菌组中,韭菜的抑菌效果最佳,其次为大蒜和大葱,与对照相比都达到了差异极显著水平,但洋葱粗提液的抑菌效果不明显。     

香蕉愈伤组织诱导培养中褐化抑制剂的筛选

为解决香蕉愈伤组织诱导培养过程中的外植体的褐化现象,分别用AgNO3(10,20 mg·L-1),AC(1,2,3 g·L-1),PVP(1,2 g·L-1),VitC(100,200 mg·L-1)等防褐化剂,对香蕉的愈伤组织诱导进行防褐化研究。结果表明:外植体培养10 d后,所有防褐化处理实验组的褐化率均低于对照组,说明在愈伤组织诱导的早期,不同的防褐化剂均有一定的防褐化效果;随着培养时间延长,不同的防褐化处理逐渐出现差异,在愈伤组织诱导培养40 d后,活性炭的防褐化效果最好,其中1 g·L-1活性炭的褐化率仅为20%,效果最佳。     

云南高原山区农业景观空间格局分析

运用景观生态学原理,以3S技术为支撑,选取不同格局指数,在划分研究单元的基础上分析了云南高原山区-易门县不同景观类型的空间分布与空间格局特征,探讨了该地区人类活动与景观结构之间的关系,以及土地资源的合理利用,为易门县国家级生态示范区建设提供参考。     

Ca~(2+)对NaCl胁迫下黄瓜幼苗耐盐性的影响

研究了NaCl和CaCl2共同胁迫对3个黄瓜(Cucumis sativus L.)品种幼苗期的生长指标、游离脯氨酸及可溶性蛋白质含量的影响。结果表明,新津春的耐盐性强于津优1号及蔬春。在相同浓度的Na+胁迫下,Ca2+加剧了Na+对黄瓜幼苗生长的抑制作用,且随着Ca2+浓度的升高,抑制作用越来越大;而Ca2+的加入对干物质的积累、游离脯氨酸含量的影响不大,叶片可溶性蛋白质含量反而显著升高。这表明Ca2+的加入通过抑制生长、减少消耗、增加可溶性固形物含量等途径降低了盐胁迫对植株的危害,增强了黄瓜对逆境的适应性。     

外源乙烯对盐胁迫下番茄种子萌发与幼苗生长的影响

研究了外源乙烯对不同浓度盐(NaCl)胁迫下番茄种子萌发及幼苗生长的影响。结果表明:施加外源乙烯(>5 mmol/L)抑制番茄幼苗的生长,加重了幼苗受盐胁迫伤害的程度,幼苗体内游离脯氨酸的含量显著增加,可溶性蛋白质含量呈下降趋势。总体而言,外源乙烯不利于番茄在盐胁迫下生长。     

水稻OsNHX5基因的亚细胞定位及表达分析

采用PCR方法从水稻中克隆出1个Na~+/H~+逆转运蛋白基因OsNHX5,构建了该基因的亚细胞定位表达载体,利用注射烟草法对OsNHX5进行亚细胞定位,利用荧光定量PCR技术研究OsNHX5基因在盐胁迫下的表达模式。结果表明,OsNHX5与拟南芥AtNHX5和AtNHX6的亲缘关系较近,该蛋白定位于细胞内膜系统上;荧光定量PCR结果表明,叶中OsNHX5基因的表达受KCl胁迫诱导上调表达,而根中OsNHX5基因的表达变化不明显。OsNHX5是一个细胞内膜系统上的K~+/H~+逆转运蛋白,可为耐盐水稻的分子育种提供理论依据。     

盐胁迫下耐盐番茄根的蛋白质组分析

以导入红海榄总DNA的耐盐番茄及其野生型番茄为材料,于3~4片真叶期分别用调和海水(1.07%盐度)和自来水进行灌溉,处理14d后,采用BPP法提取番茄根部的全蛋白质,通过等电聚焦和SDS–PAGE电泳得到番茄根部全蛋白质双向电泳图谱。利用Image Master 2D Platinum 6.0对双向电泳图谱进行分析发现,供试番茄根部全蛋白质双向电泳图谱大约有550个蛋白质点,其中耐盐番茄与野生型番茄蛋白质表达量比值大于1.5或小于0.66的有139个;海水处理下,耐盐番茄与野生型番茄根部蛋白质表达量比值大于2.0或小于0.5的有69个,其中37个蛋白点的表达量为上调,28个蛋白点的表达量为下调,此外还有4个特异蛋白点。