降解布洛芬克隆菌株转座子插入突变体的构建

【目的】敲除布洛芬福斯质粒文库克隆菌株4F6中的邻苯二酚-2,3-双加氧酶基因(C23O),构建其Tn5插入突变体,为布洛芬降解调节因子的深入研究奠定基础。【方法】以构建好的3G7Tn5突变体菌株为基础,借助pKD46质粒的λ-red同源重组酶,将转座子Tn5从菌株3G7中电击转化至4F6,消除pKD46质粒,敲除4F6菌株中的C23O基因,测定出发菌株3G7、4F6及Tn5插入突变体菌株3G7-G9、3G7-H5、4F6-G9和4F6-H5间位苯环的裂解活性。【结果】42℃条件下消除了Tn5插入突变体受体菌4F6中的pKD46质粒,构建了4F6-G9和4F6-H5突变体。Tn5转座子插入突变株3G7-G9、3G7-H5、4F6-G9和4F6-H5的间位苯环裂解活性无显著差异;菌株4F6的间位苯环裂解活性虽明显高于菌株3G7,但也仅有1个C23O基因,其活性差异可能与布洛芬降解调控因子有关。【结论】提供了一种简便有效定位并敲除C23O基因的方法。     

磷细菌A_9最佳生长条件研究

磷细菌广泛分布在土壤、根际等生态环境中,研究解磷细菌最佳生长条件,对于开发利用磷细菌,提高磷素利用效率具有重要作用。从陕西杨凌葡萄根际土壤分离筛选获得一株无机磷菌A9,对A9采用摇瓶发酵培养、平板计数法,分别对碳源、氮源、装液量、培养时间4个单因素进行初步研究。结果表明,氮碳源是磷细菌生长不可缺的主要因素之一,麸皮为最佳碳源,蚕蛹粉为最佳氮源。氧是磷细菌生长不可缺少的因素之一,装液量不同反映对菌株供氧能力不同,确定A9最佳装液量为每250 mL三角瓶中装入75 mL。培养时间的长短决定磷细菌利用营养的多少,确定A9最佳培养时间为42 h。