蛹虫草CmKexin基因克隆和菌丝体中表达检测

为了探讨蛹虫草类枯草杆菌蛋白酶(Subtilisin-like protease)的表达特性,以真菌蛹虫草菌丝体为研究对象,通过RT-PCR获得蛹虫草CmKexin基因的ORF序列,并进行序列分析。应用Northern杂交和Real-time PCR方法,检测蓝光照射后蛹虫草菌丝体中CmKexin基因的转录情况。结果获得蛹虫草CmKexin基因的ORF序列。对翻译蛋白质产物CmKexin进行生物信息学分析,表明该蛋白质含1个属蛋白转化酶的肽酶S8家族功能域(143~429)和1个前体蛋白转化酶P功能域(514~600),符合真菌类枯草杆菌蛋白酶的特征。蛹虫草菌丝体在黑暗预培养4 d后再蓝光照射,Northern Blotting和Real-time PCR检测均可得到相同的结果,即在持续的蓝光照射48~50 h时,出现CmKexin基因的瞬时大量转录。而其他时间内均未检测到该基因的大量转录。试验结果将为蛹虫草类枯草杆菌蛋白酶的利用提供理论依据。     

烟草花叶病毒株系鉴定研究进展

烟草花叶病毒具有许多株系，因内外近十几年来主要在生物学，血清学上的生物化学和分子生物学等方面进行株系的研究。文章就上述研究进展作一简要综核实工针对某些研究方面阐述了一些见解和评论。     

蓝光诱导蛹虫草虫草素含量和分生孢子数的变化

[目的]研究蓝光对蛹虫草菌丝体中虫草素含量和分生孢子量的影响。[方法]以蛹虫草为材料,在不同的蓝光照射时间取样,以检测菌丝体中虫草素的含量,并计数蛹虫草分生孢子的产生量。[结果]蛹虫草受蓝光照射后,其虫草素的产生受到了一定的抑制,同时虫草素含量的变化也有一定的波动性;在相同的时间点,受蓝光照射的蛹虫草分生孢子数量比黑暗时的分生孢子数量要多,同时在一定时间范围内分生孢子数均呈上升趋势。[结论]该研究为系统性的研究蓝光对蛹虫草的影响奠定了基础。     

蓝光受体基因Cmwc-1和Cmwc-2的原核表达和蛹虫草中表达蛋白的检测

生物体中接受蓝光信号的因子为蓝光受体蛋白。为了揭示蓝光受体蛋白在蛹虫草中的存在形式,将蛹虫草蓝光受体基因Cmwc-1和Cmwc-2的部分序列构建在原核表达载体p ET-41a(+)中,在大肠杆菌中进行表达。以所表达的融合蛋白作抗原制备抗体,并由Western Blotting对蛹虫草菌丝体和子实体分别进行分析检测。结果表明,获得了高效价的蛹虫草蓝光受体蛋白Cm WC-1和Cm WC-2的抗体。经过Western Blotting分析,在蛹虫草菌丝体和子实体中检测到Cm WC-1有42 ku (Cm WC1-42)和48 ku (Cm WC1-48) 2种蛋白质存在形式,其中在菌丝体中主要以Cm WC1-48为主,Cm WC1-42的相对量较少;而在子实体中主要以Cm WC1-42为主,没有检测到Cm WC1-48。在菌丝体和子实体中检测到Cm WC-2有相同的50 ku(Cm WC2-50)蛋白质存在形式。结果表明,在Cm WC-1和Cm WC-2复合物行使生物功能过程中,Cm WC-1在菌丝体和子实体中分别产生了差异性降解,而Cm WC-2维持稳定。     

一株产纤维素酶真菌Mucor amphibiorum RSC1的分离鉴定及其产酶培养基的初步优化

[目的]对一株产纤维素酶真菌进行分离鉴定,以期为产纤维素酶菌株种类的丰富提供试验依据。[方法]通过刚果红平板染色法初筛和摇瓶发酵产酶复筛从农田稻草堆的土壤中筛选出可产纤维素酶的真菌菌株,并对其发酵产酶培养基进行了单因素试验优化,同时对该菌进行了形态学和18S rRNA分子生物学鉴定。[结果]分离得到的菌株为1株产纤维素酶丝状真菌RSC1,发酵产酶培养基优化结果显示,培养基中含1.3%CMC-Na,0.1%酵母膏和0.1%MgSO4时其产酶活性最高。对该菌进行的形态学和分子生物学鉴定结果表明,丝状真菌RSC1与毛霉属真菌Mucor amphibiorum相似度为97%,故将该丝状真菌命名为Mucor amphibiorum RSC1。[结论]该研究鉴定了所分离纯化的菌株为Mucor amphibiorum RSC1,该结果为产纤维素酶菌株种类的丰富奠定了基础。     

火棘果实浸提液的抑菌活性研究

[目的]为了获得更为安全有效的抗菌剂,并为开发利用火棘资源提供理论依据。[方法]分别以70%乙醇和1%盐酸＋70%乙醇浸提获得火棘果实浸提液,并研究其抗菌性。[结果]1%盐酸＋70%乙醇浸提获得的火棘果实浸提液对大肠杆菌（Escherichia coli）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）和一种未知的革兰氏阳性细菌有较强的抑制作用,但对枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）无抑制作用;对青霉（Penicicilliumspp.）有较好的抑制作用,但对根霉（Rhizopus stolonifer）、毛霉（Mucorspp.）、胶胞炭疽菌（Colletotrichum gloeospo-rioides）和拟盘多毛孢菌（Pestalotiopsisspp.）无抑制作用。70%乙醇浸提获得的火棘果实浸提液对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和一种未知细菌及根霉、毛霉、青霉、胶胞炭疽菌和拟盘多毛孢菌均无抑制作用。[结论]火棘果实提取液中含有较多的花青素类物质。     

茶花与红花橙木花中黄酮类物质抑菌作用研究

[目的]为植物次生代谢产物的抑菌活性研究提试验参考.[方法]采用70%乙醇浸提,获得荼花(Camellia japonica)和红花櫙木(Loropetalum chinese)花朵中的黄酮类物质,对细菌和真菌进行抑菌作用研究.[结果]茶花花瓣黄酮类物质对大肠杆菌(Escherichiacoli)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)和1种未知细菌(G 细菌)均没有抑菌作用,而茶花花朵其余部分和红花檵木花朵中的黄酮类物质对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌与这种未知细菌有较好的抑菌效果,对大肠杆菌无抑菌效果.[结论]茶花和红花檵木的70%乙醇提取物有较好的抑制细菌作用.     

茶花与红花檵木花中黄酮类物质抑菌作用研究

[目的]为植物次生代谢产物的抑菌活性研究提供试验参考。[方法]采用70%乙醇浸提,获得茶花(Camellia japonica)和红花檵木(Loropetalum chinese)花朵中的黄酮类物质,对细菌和真菌进行抑菌作用研究。[结果]茶花花瓣黄酮类物质对大肠杆菌(Escherichiacoli)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)和1种未知细菌(G+细菌)均没有抑菌作用,而茶花花朵其余部分和红花檵木花朵中的黄酮类物质对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌与这种未知细菌有较好的抑菌效果,对大肠杆菌无抑菌效果。[结论]茶花和红花檵木的70%乙醇提取物有较好的抑制细菌作用。     

金针菇中一种抗病毒蛋白的纯化及其抗烟草花叶病毒特性

通过DEAE-SepharoseFF离子交换层析、Superdex75凝胶层析和高效液相色谱,从金针菇中获得抗烟草花叶病毒蛋白Zb,经SDS-PAGE确定该蛋白相对分子质量为30ku.采用半叶法在心叶烟上检测抗烟草花叶病毒活性,发现该蛋白抑制中质量浓度为4.4μg·mL-1.     

枯草芽孢杆菌SX3411羊毛硫细菌素Subtilomycin结构基因subA的原核中串联表达和抗体制备

为了提高枯草芽孢杆菌SX3411菌株羊毛硫细菌素Subtilomycin前体基因subA表达产物的抗原性,采用化学合成的方法合成了SubA的3次重复串联体3×subA基因,构建了该基因的原核表达载体并转入大肠杆菌中.结果表明,3×subA基因在大肠杆菌中获得了融合表达.利用SDS-PAGE纯化大肠杆菌中融合表达的3×SubA,免疫家兔后制备抗体anti-3×SubA,该抗体经检测有较高的滴度.通过Western Blotting杂交,检测了Subtilomycin前体多肽SubA的胞内表达特性.结果表明,枯草芽孢杆菌SX3411在30℃培养的条件下进行不同时间取样检测,枯草芽孢杆菌3411约在培养的第10,12小时胞内有较多的SubA表达.综上所述,通过串联表达Subtilomycin前体基因subA所获得的融合表达产物3×SubA具有较好的抗原性,以此获得的抗体anti-3×SubA完全可以用于枯草芽孢杆菌SX3411中Subtilomycin前体检测和分析.