抗四环素单链抗体基因表达及免疫学活性检测

为原核表达抗四环素的单链抗体(Sc Fv),并进行免疫学活性的初步测定,将前期克隆的四环素Sc Fv全长基因克隆到p ET-24a载体后转化入大肠杆菌BL21工程菌;IPTG诱导后进行SDS-PAGE检测目的蛋白的表达,间接ELISA分析纯化的表达产物的免疫活性。通过酶切鉴定法、DNA序列测定,证明目的基因构建正确,SDS-PAGE和间接ELISA分析显示表达蛋白为27.8 ku,纯化后的蛋白免疫学活性良好。表明成功表达了具有免疫学活性的四环素Sc Fv,为四环素的药物残留检测方法建立奠定了基础。     

鸽常规石蜡切片制作技术的体会及改良

为了使传统的石蜡切片技术满足病理研究与诊断的需要,针对鸽的石蜡切片制作过程中易出错的环节,探讨制作优良鸽石蜡切片的具体方法,对制作过程中取材、固定、修整、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、染色及封固等步骤进行改良,镜检结果表明获得了高质量的石蜡切片。     

面筋蛋白的胃蛋白酶酶解物对大鼠免疫功能的影响

选用 5 0只SD大鼠 ,分为试验组和对照组 ,每组 2 5只 ,试验组用经氯化钠缓冲液洗涤法制备的面筋蛋白的胃蛋白酶酶解物灌喂 ,对照组灌喂未经酶解的面筋蛋白 ,连续灌喂 2 1d。实验结果显示 :与对照组相比较 ,大鼠胸腺和脾脏相对重量分别上升了 2 0 % (P <0 0 1)和 2 9% (P <0 0 1) ;腹腔巨噬细胞吞噬活性上升了 12 % (P >0 0 5 ) ;淋巴细胞转化实验中刺激指数 (SI)提高了 33 0 % (P <0 0 5 ) ;血清NDV (新城疫病毒 )抗体血凝抑制效价 (HI)上升了 38 5 % (P<0 0 1) ;肠腔sIgA水平提高了 2 8 6 % (P <0 0 5 ) ;血清IL 2水平上升了 38 4 % (P <0 0 1) ;血清瘦素、胰岛素、T3 和T4水平均无显著变化。实验结果提示 :灌喂面筋蛋白胃蛋白酶酶解物能够增强机体免疫功能 ,并且这种免疫增强作用与细胞因子的调理有较为密切的联系。     

伴大豆球蛋白胃蛋白酶水解肽对小鼠免疫功能及肠道内环境的影响

90只清洁级昆明系小鼠，随机分为5组，预饲基础日粮一周后，各组分别灌胃：生理盐水（对照组，CK）、伴大豆球蛋白液（Ⅰ）、伴大豆球蛋白胃蛋白酶水解液（Ⅱ）、伴大豆球蛋白胃蛋白酶水解液提纯B组分（Ⅲ）、伴大豆球蛋白盐酸水解液（Ⅳ），除对照组外，各处理组灌胃液体总含氮量相等，实验期21d。结果显示：与对照组相比，第3周Ⅱ组和Ⅲ组每只小鼠日均采食量较对照组显著下降，分别降低8．75％（P〈0．05）和9．28％（P〈0．05）；Ⅲ组小鼠胸腺相对质量极显著下降，降低了10．40％（P〈0．01），肠黏膜sIgA水平提高45．49％（P〈0．01），大肠食糜中6-磷酸果糖酮糖酶（F6PPK）活性极显著提高（P〈0．01），pH值下降了1．80％（P〈0．05），肠球菌数显著下降（P〈0．05）。实验结果表明水解肽作为腔内信号分子可能与肠道内相关因素有着多层次调控关系，共同促进宿主的健康。     

番鸭细小病毒VP3基因的原核表达及多克隆抗体的制备

为获得针对番鸭细小病毒VP3蛋白的多克隆抗体,根据已发表的该病毒基因序列设计一对引物,利用PCR扩增出VP3基因,将其克隆到原核表达载体p ET-32a,转化感受态细胞BL21(DE3)。经IPTG诱导后,SDS-PAGE检测重组蛋白。将重组蛋白切胶免疫BALB/c小鼠,制备抗番鸭细小病毒部分结构蛋白的多克隆抗体。结果显示成功获得VP3基因,构建的原核表达重组质粒成功表达预期的重组蛋白,免疫小鼠获得的多克隆抗体能与番鸭细小病毒及VP3蛋白反应。表明制备的多克隆抗体可用于MDPV的检测,并为进一步研究MDPV奠定了基础。     

长白猪肝脏、肾脏和淋巴结的显微形态及糖原PAS反应研究

[目的]对商品长白猪的组织形态学进行研究,了解商品长白猪宰前的生理状态。[方法]采集长白猪的肝脏、肾脏和淋巴结3种组织器官并制成石蜡切片,采用H.E染色方法对其组织结构进行研究。[结果]肾脏和肝脏的组织结构形态正常,肾脏和肝脏的细胞核染色明显,淋巴结的皮质和髓质分界不清晰,周围组织没有明显的淋巴索,淋巴窦较小。糖原PAS染色结果表明肝脏中的糖原颗粒较少,分布不均匀,而肾脏中糖原或糖蛋白多集中于血管球和肾小囊壁上。[结论]该研究可为今后进一步的商品长白猪理论研究奠定基础。     

iTRAQ技术分析无乳链球菌牛源株与人源株差异表达蛋白

为了分析无乳链球菌牛源株ATCC13813与人源株A909差异蛋白质组,提取ATCC13813与A909全菌蛋白,iTRAQ技术标记后,进行液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)鉴定和定量,质谱数据通过Mascot 2.2和Proteome discoverer 1.4软件分析,并对差异蛋白进行GO功能注释和KEGG pathway通路分析。结果显示,共鉴定出差异表达蛋白350个(P0.05),与ATCC13813相比,在A909中上调表达蛋白174个(比值1.5),下调表达蛋白176个(比值0.667)。生物信息学分析预测这些蛋白主要涵盖28个生物学功能,14个通路。本研究为阐明不同宿主来源株无乳链球菌致病性差异奠定基础。     

丙谷胺对产蛋鸡摄食行为及内分泌的影响

选用35周龄伊莎蛋鸡8只,分别安装慢性颈静脉血管插管.实验采用自身对照法,对照期饲喂基础日粮,丙谷胺期在喂料前填喂丙谷胺.应用摄食行为计算机监测系统(FIDAS系统)记录各个实验期产蛋鸡喂料后4h内的采食行为数据,并测定有关血液生化指标.结果显示,实验期(填喂丙谷胺后)与对照期相比较,产蛋鸡午前(8:00～12:00)与午后(13:00～17:00)4 h内摄食量分别增加27.69%与30.41%(P＜0.05),摄食时间分别降低15.67%与3.75%,摄食餐数分别增加12.32%与27.2%(P＜0.05);血糖水平分别降低5.44%与18.03%(P＜0.01),瘦素水平分别升高2.59%与7.19%,胰岛素水平分别升高33.09%(P＜0.05)与24.5%(P＜0.05).提示丙谷胺能够促进蛋鸡摄食,并影响有关内分泌激素的水平.     

鸭源H9N2亚型禽流感病毒RT-PCR检测方法的建立

为建立鸭H9N2亚型禽流感病毒的监测及临床诊断方法,根据鸭源H9N2亚型禽流感病毒HA蛋白的基因序列设计1对特异性PCR引物,并以鸭源H9N2亚型禽流感病毒基因组为模板,建立鸭源H9N2亚型禽流感病毒的特异性RT-PCR检测方法,并用该方法对江苏省多地采集的疑似病料进行检测,扩增产物经测序鉴定后判断建立的方法对临床样品的检出率。结果显示,该方法可以特异性扩增鸭源H9N2亚型禽流感病毒HA蛋白基因保守区的837 bp的序列,与对照的病毒无交叉反应,敏感性较好,最低可检测1fg基因组,临床样品的检测率为100%,表明本试验建立的鸭源H9N2亚型禽流感病毒RT-PCR特异性强、敏感性高,可用于临床快速诊断鸭源H9N2亚型禽流感病毒感染。