线粒体DNA分析青藏高原东方蜜蜂(Apis cerana)种群遗传结构

[目的]调查青藏高原地区东方蜜蜂种群遗传结构。[方法]利用线粒体DNA分子标记对青藏高原地区东方蜜蜂样本进行群体检测;对单倍型数量、频率分布、单倍型多样度、核苷酸多样度等指标进行统计分析;对地理种群内/间的遗传变异进行分子方差分析;对地理种群间的遗传距离矩阵与地理距离矩阵进行蒙特尔(Mantel)检验;利用邻接法、最大简约法和贝叶斯法分析单倍型间系统发育关系。[结果]青藏高原地区东方蜜蜂种群蕴藏着较丰富的遗传多样性,全部样本的单倍型多样度和核苷酸多样度分别为0.939和0.003 92;分子方差分析结果显示:尽管种群内变异对总变异的贡献率始终最大(45.5%,P≤0.01),但不同地理种群间的变异也达到显著水平(38%,P≤0.05)。[结论]人为基因交流是影响青藏高原地区东方蜜蜂种群遗传结构的因素之一;山脉、高原阻隔是塑造青藏高原地区东方蜜蜂种群遗传结构的主要作用因素。     

基于16srDNA序列分析冬樱花花期蜜囊细菌多样性

对昆明冬樱花花期东、西方蜜蜂蜜囊细菌进行分离、纯培养;并对分离菌株的16srDNA基因片段进行扩增和测序,序列比对后进行系统发育分析。结果表明:东方蜜蜂蜜囊细菌包括3个纲中的10个种,西方蜜蜂蜜囊细菌包括3个纲中的13个种,花蜜细菌包括4个纲中的6个种,所采集样品除Bacillus subtili相似以外,其余菌种差异较大。     

利用线粒体Cyt b为遗传标记分析重庆地区东方蜜蜂的遗传多样性

采用PCR产物直接测序技术对重庆地区117群东方蜜蜂样品的线粒体DNA细胞色素b基因(Cyt b)420 bp长度序列进行了分析。结果显示:在所得到的序列中共检测到11个核苷酸多态位点,其中单一变异位点2个,简约信息位点9个,序列突变率为2.62%,序列T,C,A,G平均含量分别为44%,14.2%,32.9%,8.9%,共定义8种单倍型,单倍型多样度为0.773±0.021,核苷酸多样度为0.003 82±0.000 32,单倍型网络关系图揭示重庆地区东方蜜蜂群体没有明显的遗传分化。     

蜜蜂黑色王台病毒SYBR GreenⅠRT-qPCR检测方法的建立

为建立蜜蜂黑色王台病毒RT-qPCR检测方法,以蜜蜂黑色王台病毒(BQCV)衣壳蛋白基因部分序列作为目的基因,构建标准质粒并作为模板,建立标准曲线,且对所建立方法的灵敏度和特异性进行分析。结果表明:所建立的RT-qPCR检测方法,扩增效率E=1 08%,可信度R2=0.997。该方法灵敏度高,最低检出量为101个拷贝;该方法特异性强,仅能检出BQCV,而不能检测出蜜蜂囊状幼虫病毒、畸翅病毒。以上结果表明已成功建立了针对BQCV灵敏、特异的RT-qPCR检测方法。     

东西方蜜蜂生境重叠导致的新病原扩散

蜜蜂病害的流行与频发是近年来全球蜜蜂饲养蜂群非正常丢失的主要原因。全球化的蜜蜂贸易和迁徙性的养蜂生产使得地区性蜜蜂病害得以快速扩散与传播。分布范围不断扩大的西方蜜蜂(Apismellifera)在对本土蜜蜂资源造成破坏的同时,因生境重叠导致的新病原交叉感染也作用于西方蜜蜂种群。人为地干扰蜂种间历史形成的区域性分布,将间接导致原有生态系统的崩溃。同时将放大地区性病害的威胁,不可避免地会加深对现代脆弱的蜜蜂养殖业的伤害。     

陕甘宁青晋东方蜜蜂线粒体DNA COⅠ序列遗传多样性分析

以线粒体DNA COⅠ区间基因片段为指标,利用生物信息学软件分析了陕甘宁青晋地区5个省15个采样点共443群东方蜜蜂的遗传分化状况.所得序列全长625 bp,共定义了21个线粒体单倍型,总单倍型多样度为0.536±0.029,总核苷酸多样度为:0.001 16±0.000 08.单倍型网络关系图、系统发育树以及分子方差分析数据显示,这些种群总体遗传分化不显著,所采集样本的变异主要存在于组内群体间和群体内,组间变异不显著.     

云南不同地域野坝子蜂蜜及三种商品蜂蜜中维生素k含量比较研究

测定比较了云南省武定县、永胜县、祥云县、姚安县、大姚县的野坝子蜂蜜以及其他三种商品蜂蜜中维生素K(以下简称VK)的含量,结果表明:采自不同地域的野坝子蜂蜜中VK含量不同。其中采自祥云县的野坝子蜂蜜VK含量普遍较高,其次是大姚县、姚安县和永胜县,武定县的野坝子蜂蜜VK含量普遍偏低;不同品种的蜂蜜中VK含量差异较大。与其他3种市售商品蜜种(苕子蜜、枣花蜜和野藿香蜜)相比,野坝子蜂蜜的VK含量最高,其次是苕子蜜、野藿香蜜,VK含量最低的是枣花蜜。     

不同保存方法对RT-PCR检测蜜蜂病毒的影响

本研究从已知感染蜜蜂黑王台病毒(Blackqueen cell virus;BQCV)和蜜蜂畸翅病毒(Deformed WingVirus,DWV)的东方蜜蜂蜂群中采集工蜂个体,将其纵向剖成3份,一份存于-79℃,一份加入1.2 mL无水乙醇保存,第三份加入1.2 mL TRIzol保存。对3组样本每隔3 d同时进行RNA提取,并使用RT-PCR方法检测蜜蜂黑王台病毒和蜜蜂畸翅病毒。结果表明在TRIzol中保存的样品和-79℃冰冻保存的样本所提取RNA相对完整,病毒检测结果一致;在无水乙醇中保存的样品RNA质量相对较差,病毒检测阳性率低于前两者。该研究为蜜蜂病毒检测的采样保存方法提供一定的理论依据。     

患白垩病蜂群的温湿度研究

以蜜蜂白垩病致病菌蜜蜂球囊菌(Ascosphaera apis)感染西方蜜蜂(Apis mellifera).通过记录染病蜂群的温湿度和发病幼虫数,研究了养蜂生产中,温湿度变化对感染该病的西方蜜蜂蜂群(中等群势)的影响.结果显示:当蜂群内的温度降低到某个阈值范围时,不论是试验组还是对照组都会出现不同程度地增加发病幼虫数.     

四川省东方蜜蜂病毒病感染状况调查

为了解四川省东方蜜蜂主要病毒病:蜜蜂黑王台病毒(BQCV)、畸翅病毒(DWV)、囊状幼虫病毒(SBV)、克什米尔蜜蜂病毒(KBV)、急性蜜蜂麻痹病毒(ABPV)和慢性蜜蜂麻痹病毒(CBPV)的感染状况。采用RT-PCR方法对来自四川省9个地区共270份东方蜜蜂样品进行快速病原学检测。调查结果显示:四川省东方蜜蜂群中有5种病毒的感染;其中,BQCV总阳性率为17.8%,KBV总阳性率为3.0%,SBV总阳性率为1.1%,ABPV总阳性率为1.9%,CBPV总阳性率为2.2%。在被调查的9个地区中,有7个地区蜂群存在至少1种以上病毒病感染的现状,表明四川省东方蜜蜂群疾病感染状况较为严重,其对养蜂业可持续发展的潜在危险需要给予充分关注。