犬继发性腹膜炎剖检与病理分析1例

正腹膜炎是腹腔壁层腹膜和脏层腹膜的炎症,是由细菌感染、化学刺激或损伤所引起的一种严重疾病,按照发病机制不同可分为原发性腹膜炎和继发性腹膜炎。犬腹膜炎病例多为继发性腹膜炎,常源于腹腔脏器坏死、穿孔、破裂,或外伤、腹腔手术消毒不严格等原因而导致感染。腹膜炎临床上以腹部疼痛、腹腔积有炎性渗出物为特征,伴随体温升高、精神沉郁,食欲废绝,胸式呼吸等症状,后期腹围增大,触诊有波动感,叩诊出现拍水音,严重时可致血压下降和全身中毒性反应,如未能及时治疗可死于中毒性休克。     

鸭MHC I 轻链 cDNA克隆及其蛋白的二级结构

为了阐明鸭主要组织相容性复合体 I 结构并推进其功能研究，本文采用Full RACE PCR法从其淋巴细胞cDNA文库中克隆了鸭MHC I 轻链 (b2m) cDNA. 随后，在pMAL-p2Ｘ/E.coli TB1原核表达系中可溶性表达了其成熟肽蛋白基因，并进行了纯化、蛋白酶切和Western Blot鉴定. 最后，测定了融合蛋白和MBP单体的圆二色谱(CD)值. 鸭b2m cDNA长792 bp，包含18 bp 5’端和414bp 3’端非翻译区. 其ORF为119个氨基酸 (aa)，包含20个aa信号肽和99 aa成熟肽。成熟肽序列的第25位和80位为半胱氨酸(C)，第80位半胱氨酸附近序列为“YTCRVDH”，与免疫球蛋白超基因家族的特征基序 “F/YCXV/AXH”相符.氨基酸序列与鸡、鱼、蛙、人和鼠β2m比较，同源性在30.3%-65.9%之间. CD测定结果表明鸭b2m α螺旋、β折叠、转角、随机卷曲分别为0 aa、50 aa、23 aa 和26 aa，呈典型的β折叠。同源模建也显示鸭b2m 三级结构(3D)由7个β片层折叠而成，不含α螺旋，这与CD测定结果相符合，并与人和小鼠b2m 3D结构相似.     

4株鸭坦布苏病毒包膜蛋白基因的分子进化分析及表达

从规模化养鸭场分离到4株鸭坦布苏病毒,成功克隆了包膜蛋白(E蛋白)基因片段,并对其进行了序列测定、分析和表达.结果表明,E基因全长1 503 bp,编码501个氨基酸,序列高度保守.进化分析显示,鸭坦布苏病毒属蚊媒黄病毒类恩塔亚病毒群,与其他坦布苏病毒及近期发现的BYD病毒关系最近.采用原核表达系统对E基因进行了表达,蛋白大小54 300,主要以包涵体形式存在.随后,对E蛋白外功能区序列和3D结构进行了分析,在已解析结构的黄病毒中与WNV E结构最为相似.研究结果为该病的防控和基因工程疫苗的研制奠定了基础.     

三黄鸡CD8α/βcDNA克隆与表达及其多克隆抗体的制备

为了获得鸡CD8α/β蛋白及其多克隆抗体,进一步研究其结构与功能,本实验从三黄鸡cDNA文库中克隆了其CD8α/β胞外区片段,构建了pQE30/ChCD8α/β原核表达系统,并经诱导表达、亲和层析纯化,获得了纯化的重组蛋白(rChCD8α/β),然后用rChCD8α/β分别免疫Balb/c小鼠制备了其多克隆抗体。结果表明:本实验克隆的ChCD8α长483 bp、编码161个氨基酸、可在E.coliJM109中高效表达,蛋白质分子质量为24.0 ku,表达量占菌体蛋白量的25.0%,由该蛋白质所制备的多克隆抗体抗rChCD8α的ELISA效价为1∶1 024 000;另外,克隆的ChCD8β长447 bp,编码149个氨基酸,蛋白质的分子质量为18.5 ku,表达量占菌体蛋白量的20.0%,抗rChCD8β多克隆抗体ELISA效价为1∶64 000。本实验所得鸡CD8α/β的多克隆抗体将用于四聚体研究。     

探析日本特约警察犬制度

正当出现第一头吉娃娃警犬时,社会上曾掀起过一股小型警犬热潮。随后,吉娃娃、贵宾犬、腊肠犬等众多小型宠物犬成为警犬的新闻时有报道。不难发现,几乎所有的"异类"警犬都来源于日本,这是由于日本独特的警犬管理制度促使了警犬品种的多元化发展。一、日本警犬分类日本的警犬分为警察犬和警备犬两大类。警察犬隶属于刑事部的鉴定课,具备了追踪犬、气味鉴别犬、物证搜索犬等刑侦用犬能力,负责在案发后对犯罪嫌     

犬中央渐进性视网膜萎缩的病例分析

犬中央渐进性视网膜萎缩(CPRA)又称为犬视网膜色素上皮营养不良症(RPED)或网膜色素上皮症,是一种较为罕见的犬遗传性视网膜退化病变.该病主要是视网膜色素细胞营养不良,最常发病的品种有伯瑞犬、拉布拉多犬、喜乐蒂犬、古代牧羊犬、可卡犬、边境牧羊犬等.品种的易感性显示该病与遗传因素具有相关性,但近年来研究表明环境因素、饮食因素等外界条件也可单独或共同与遗传因素相结合促使疾病发生.其临床症状主要表现为患犬的中央视力会缓慢减弱,难以辨别静止的物体,但通常患犬直到2～6岁时才会表现出明显的症状,且大多不会出现完全失明.在患病动物视觉出现障碍之前,通常不易被发现,具有一定的隐蔽性,常被忽视.     

新型冠状病毒疫情期警犬基地生物安全策略探讨

正2019年12月以来,世界范围内出现以发热、乏力、干咳为主要临床表现的病毒性肺炎病例,其病原是一种以前未在人类中发现的新型冠状病毒,被联合国世界卫生组织命名为"COVID-19"。该病毒传染性极强,由其引起的肺炎迅速蔓延。虽然目前没有证据显示犬猫会感染新型冠状病毒,但也没有证据显示犬猫不会感染新型冠状病毒,因此为确保人、犬的健康和安全,警犬基地在疫情期的犬病防治工作应充分考虑的COVID-19流行特点,本着"预防为主、防重于治、养防并重"的原则,建立一套切实可行的生物安全防范策略和正确有效的防范措施,从而阻断COVID-19从外界进入警犬基地内部的途径。     

鸭MHCⅠ轻链cDNA克隆及其蛋白的二级结构分析

为了阐明鸭主要组织相容性复合体Ⅰ(MHCⅠ)的结构并推进其功能研究,采用Full RACE PCR法从鸭淋巴细胞cDNA文库中克隆了鸭MHCⅠ轻链(Anpl-β2m)cDNA,GenBank登陆号为AB246408。随后,采用pMAL-p2X/E.coliTB1原核表达系对Anpl-β2m成熟肽基因进行了可溶性表达,表达的融合蛋白命名为MBP-β2m。融合蛋白经过Amylose树脂亲和层析纯化、Western blot分析和蛋白酶切割后,用圆二色谱测定了其二级结构,并同源模建了Anpl-β2m蛋白的三级结构(3D)。cDNA克隆结果显示Anpl-β2m cDNA长792bp,包含18bp 5'端和414bp 3'端非翻译区。其ORF为119个氨基酸(aa),包含20aa信号肽和99aa成熟肽。成熟肽序列的第25位和80位为半胱氨酸(C),第80位半胱氨酸附近的“YTCRVDH”序列与免疫球蛋白超基因家族的特征基序“YxCxVxH”相符。氨基酸序列与鸡、鱼、蛙、人和鼠等的β2m基因比较,同源性30.3%~65.9%之间。圆二色谱测定结果显示Anpl-β2m蛋白呈典型的β折叠结构,α螺旋、β折叠、转角和随机卷曲含量分别为0、50、23和26。同源模建显示Anpl-β2m蛋白三级结构(3D)与人和小鼠β2m3D结构类似,由7个β片层组成,不含α螺旋。     

北京鸭CD8α分子克隆与表达及其多克隆抗体制备

为了探讨鸭CTL免疫与病毒关系,本文用PCR技术从鸭cDNA文库中克隆了其CD8α基因（DuCD8α）。将DuCD8α成熟肽cDNA插入表达载体pQE30、构建了E．coli JM109（pQE30／DuCD8α）原核表达系。经诱导表达、蛋白纯化,制备了鼠抗DuCD8α多克隆抗体。结果表明DuCD8α成熟肽长645bp,编码214个氨基酸。与已报道的DuCD8α在氨基酸水平上的同源性高达99．0％。SDS-PAGE证实重组DuCD8α（rDuCD8α）在JM109工程菌中的表达量可达15％。纯化的rDuCD8α分子量为26kDa。ELISA结果显示鼠抗rDuCD8α多克隆抗体效价为1：1280000。