鹅颗粒细胞转录因子GATA结合蛋白4(GATA4)真核表达质粒的构建

【目的】本研究旨在构建鹅颗粒细胞转录因子GATA结合蛋白4(GATA4)绿色荧光蛋白表达载体p EGFP-N1/GATA4,为研究GATA4在鹅颗粒细胞中功能作用奠定实验基础。【方法】原代培养鹅颗粒细胞,取细胞总RNA,RT-PCR扩增出GATA4 c DNA基因片段,克隆连接至载体PMD19-T,用限制性内切酶Eco RI及Ban HI酶切,鉴定克隆产物为所需的目的基因片段后,胶回收目的基因,并进行序列测定,然后将上述胶回收产物与载体p EGFP-N1连接,导入感受态DH5α,菌液涂于含卡那霉素琼脂糖平板上,挑取抗性单菌落,进行质粒DNA扩增,酶切及测序鉴定,证实均为阳性克隆,即GATA4与p EGFP-N1体外重组成功。【结论】采用体外重组技术,成功将鹅GATA4 c DNA插入荧光蛋白表达载体p EGFP-N1中。     

家禽重要性状的基因组学研究与应用现状

近一个世纪的传统选育使家禽的各项生产性能接近表型选育极限,基因组学领域的发展成为突破这一瓶颈的新途径。自2004年第一个鸡的基因组草图发布以来,鸡、鸭、鹅等家禽的基因组参考序列在近年相继发布,且质量逐步提升。基于家禽高质量的基因组参考序列,研究学者进一步对家禽的重要性状展开了系列研究,这些研究加速了我们对家禽重要性状的认识和理解,并为在家禽基因组选择育种中应用筛选出有效的分子标记。本文就家禽的基因组参考序列研究、重要性状的基因组学研究及其应用进行综述。     

水稻根际微生物肠杆菌E-25和肺炎克雷伯氏菌K-12固氮作用的一些生理特性

我们研究了从京郊地区水稻根际分离出的一株肠杆菌(Enterob acter sp)E-25和一株肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)K-12的固氮特性.两种菌均具有较强的固氮活力.用乙炔还原法测定,E-25的比活为552毫微克分子C_2H_4/小时.毫克菌体蛋白,K-12的比活为676毫微克分子C_2H_4/小时.毫克菌体蛋白.在对数生长期菌体蛋白迅速增长,固氮活性也随之增高.对数生长期后,菌体蛋白停止增长,固氮活性开始下降.E-25和K-12均为兼性好氧细菌,在无氧和微氧条件下固氮活力显著高于常氧条件下.E-25比K-12对氧更加敏感.这两种菌可能是在北方碱性土壤中占据优势的根际固氮细菌.由于长期适应生存条件的结果,这两种菌固氮的最适pH值均偏碱性.E-25对碳源的利用也不同于南方水稻根际分离出的肠杆菌.E-25只能利用果糖、葡萄糖和蔗糖,而不能利用琥珀酸、柠檬酸等有机酸做固氮的能源.我们推测E-25在固氮过程中所需能量主要来自糖酵解途经.     

造林模范——郑宝贵

郑宝贵,过去是一个受尽地主剥削和压迫极端贫苦的农民,现在是阿鲁科尔沁旗白音布统人民公社兴联生产队的党支部书记兼林业委员。因为他在绿化祖国、绿化家乡、改变自然面貌的事业上贡献很大,并且不骄不躁一直前进,几年来连续被评为造林模范。同时,他有一条坚定不移的信念,那就是他自己经常     

简单实用的彩色电视机消磁法

在彩色电视机中,为了防止地磁和机外杂散磁场对电子束的偏转产生负面影响而造成色纯下降(色彩失真),通常在显像管的锥体部分加上一个冷轧钢片制成的磁屏蔽罩(俗称阴罩).     

我国鹅的良种选育与推广

我国是世界上鹅品种资源最丰富的国家,列入《中国畜禽品种资源名录》中的鹅地方良种就有26个,其中10个品种列为国家重点保护的遗传资源。     

鹅MTTP基因多态性与脂质指标和屠体性状的相关研究

利用PCR-SSCP技术检测四川白鹅(n=24)和朗德鹅(n=33)MTTP基因的第8、18和21外显子的多态性,计算基因频率和基因型频率,并将发现的多态性与鹅肝脂质指标和屠体性状进行关联分析,研究MTTP基因多态性与鹅肝脂质指标和屠体性状的相关关系。结果发现,鹅MTTP基因第21外显子130 bp处存在G→A突变,该突变位点在朗德鹅群体中表现出AA和BB 2种基因型,AA基因型鹅的肝脂质指标和屠体性状与BB基因型个体差异不显著(P0.05);在四川白鹅群体中仅存在BB基因型,鹅MTTP基因的该突变位点对鹅肝脂质指标和屠体性状的影响不显著。     

油酸对鹅原代肝细胞三酰甘油含量及TNFα和PPA Rα表达的影响

以四川白鹅(Anser cygnoides)原代培养肝细胞为模型,测定了油酸对鹅肝细胞活性、三酰甘油(TG)含量、脂滴形成的影响,同时研究了油酸对肿瘤坏死因子α(TNFα)和过氧化酶体增殖物激活受体α基因(PPARα)表达的作用.结果表明,0.5 mmol/L的油酸能增强肝细胞活性,而1.5 mmol/L油酸对肝细胞活性有抑制作用.添加不同浓度油酸都能诱导鹅肝细胞TG含量和脂滴增多,其中1.0 mmol/L的油酸作用最明显.0.5 mmol/L、1.0 mmol/L和1.5 mmol/L油酸都能提高PPARα mRNA水平;而0.5 mmol/L和1.0 mmol/L油酸均能提高TNFα基因表达,但1.5 mmol/L油酸对TNFα mRNA水平没有明显影响,表明PPARα和TNFα基因表达水平变化对维持鹅肝细胞内脂质代谢的平衡具有重要作用.     

固醇类物质对鹅颗粒细胞胆固醇转运相关基因表达的影响

【目的】揭示胆固醇转运相关基因在鹅不同发育阶段卵泡中的表达模式及固醇类物质对颗粒细胞上述基因表达的影响。【方法】首先应用RT-qPCR技术检测SREBP-2、STADR4、STAR和CYP11A1在产蛋高峰期鹅卵巢内不同发育阶段卵泡中的mRNA表达水平;然后分离鹅F1卵泡颗粒细胞体外培养,24 h后分别添加不同浓度胆固醇、25-羟胆固醇和洛伐他汀(胆固醇合成限速酶抑制剂)处理,最后使用MTT法检测细胞活性和RT-qPCR技术检测上述基因表达量。【结果】四个基因在不同发育阶段卵泡中的表达模式相似;高浓度胆固醇显著增加细胞活性(P0.05),25-羟胆固醇和洛伐他汀则降低细胞活性。随着胆固醇浓度升高,四个基因表达量均先升高后下降;25-羟胆固醇显著抑制SREBP-2和STAR的表达(P0.05);升高洛伐他汀浓度使SREBP-2表达量先降低后升高,与其余三个基因相反。【结论】胆固醇转运和类固醇激素合成相关基因表达量受固醇种类和浓度调节,并且与卵泡类固醇激素合成密切相关,这为揭示鹅卵泡发育机制和提高产蛋量提供了理论参考。     

鸭MyoG基因启动子的生物信息学分析及其甲基化频率对基因表达的影响

采用RT–PCR技术扩增和克隆鸭Myo G基因启动子,并对其启动子序列进行生物信息学分析,采用Sequenom Mass Array技术检测Cp G岛在鸭肌肉组织中的甲基化水平,用q RT–PCR检测Myo G基因的表达量。结果表明,扩增得到鸭Myo G基因启动子序列2 730 bp,对启动子序列预测后,发现存在2个Cp G岛,其中Cp G岛(–2 536~–1 997 bp)存在5个转录因子结合位点和多个真核生物结构元件。甲基化检测结果表明:在鸭的个体和组织水平上,启动子甲基化率均未聚类在一起;Cp G位点甲基化频率存在个体差异,22%Cp G位点的甲基化频率与Myo G的m RNA表达量呈负相关(P0.05),78%Cp G位点的甲基化频率呈正相关(P0.05),其中,腿肌甲基化位点Cp G_1、Cp G_26.27.28.29的甲基化频率与Myo G基因表达水平均呈显著相关(P0.05)。Myo G基因在鸭与在哺乳动物中的转录调控机制存在差异。试验中发现多个影响鸭Myo G基因转录的潜在甲基化位点,其中Cp G_1与Cp G_26.27.28.29能通过DNA甲基化修饰影响Myo G基因在鸭腿肌中的转录。本研究结果可为鸭Myo G基因转录调控提供参考依据。