猪场废水处理系统出水及周边河流中噬菌体携带抗性基因的污染特征

噬菌体是抗生素抗性基因水平转移的重要载体，其携带的抗性基因受到广泛关注。本研究选择5座典型猪场废水处理系统为研究对象，采集其出水样、排入河流的上游和下游水样，提取其噬菌体DNA，利用实时荧光定量PCR技术检测四环素类抗性基因tetG、tetX和tetW、磺胺类抗性基因sul1和sul2、大环内酯类抗性基因ermA和ermB、β-内酰胺类抗性基因bla_TEM、氯霉素类抗性基因cmlA，以及整合子基因intl1和intl2的含量。结果表明，猪场废水处理系统出水中噬菌体携带抗性基因的检出率低于河流样品的检出率，其中只有在1/5的系统出水样品中检测到cmlA，2/5的系统出水样品中检测到sul1，而所有河流样品都检测到cmlA和sul1；sul2的平均绝对丰度（4.09±0.16）显著高于其他抗性基因的丰度（P<0.05），其他抗性基因丰度由高到低依次为tetX、tetG、sul1、tetW、bla_TEM、ermB、cmlA、ermA，并且cmlA的丰度分别与bla_TEM和sul1之间存在显著强正相关（P<0.05），intl1分别与bla_TEM、cmlA和sul1之间呈显著强正相关（P<0.05）；只有cmlA和sul1的丰度在各猪场之间没有显著差异，其他噬菌体携带抗性基因的丰度在不同猪场间存在较大的差异；系统出水（2.01±0.21）中总抗性基因的丰度显著低于河流上游（3.03±0.13）和下游（2.88±0.16）中的丰度（P<0.05）。本研究表明，典型猪场废水处理系统出水中含有高丰度的噬菌体携带抗性基因，但未对周边河流造成显著影响。     

紫杉醇提取工艺的放大与优化

紫杉醇的提取工艺包括粉碎、乙醇浸取、氯仿分配、硅胶柱层析、活性碳脱色和结晶等步骤。该文成功地对该工艺进行了放大试验，并对各步骤的操作条件进行了优化。加工了5 t云南红豆杉树皮，得纯度62.5%的紫杉醇680 g，收率超过70%。     

广东省规模化猪场猪粪中典型耐药基因污染分析

选择广东省6家规模化猪场,采集后备期、空怀期、妊娠期、保育期和育成育肥期猪粪,利用实时荧光定量PCR技术检测四环素类耐药基因tetA、tetG、tetM、tetX,喹诺酮类耐药基因qnrS,磺胺类耐药基因sulI,链霉素耐药基因strA,β-内酰胺类耐药基因blaTEM和大环内酯类耐药基因ermB的含量,并利用单克隆测序技术比对分析了不同猪场猪粪中tetG基因的多样性。结果表明:(1)117份猪粪样品中,除strA的检出率为97.44%外,其余耐药基因的检出率均为100.00%;(2)猪粪中tetM的绝对含量最高,其拷贝数的对数值达到(10.27±0.68),显著高于其他耐药基因(P0.05),其他耐药基因绝对含量由高到低依次为ermB、tetG、blaTEM、tetX、strA、sulI、qnrS和tetA,并且tetA、tetG、qnrS和blaTEM的绝对含量之间呈极显著正相关(P0.01),tetM、sulI、strA和tetX的绝对含量之间呈极显著正相关(P0.01);(3)妊娠前期母猪粪中耐药基因tetA、qnrS和blaTEM的相对含量显著高于其他阶段猪粪(P0.05),其余各阶段猪粪耐药基因的相对含量无显著性差异,而且不同猪场猪粪中耐药基因相对含量也无显著性差异;(4)不同猪场猪粪中tetG耐药基因具有较高的多样性。由此表明,广东省规模化猪场猪粪中广泛存在耐药基因残留,应采取有效措施降低猪粪中耐药基因残留,减少其对环境的污染。     

高含量大豆皂苷的制备工艺研究

为了得到高含量大豆皂苷，该文对6种大孔吸附树脂即AB-8，XAD-2，HPD-100，ADS-7，HPD-300，HPD-600进行优选，以上样量、洗脱率和产品纯度为指标，用柱层析法对低含量的大豆皂苷提取液进行初步分离，得到大豆皂苷粗品。然后通过结晶进一步提高其纯度。考察并优化了结晶时的溶剂、大豆皂苷的初始浓度、降温速率等工艺条件。结果表明：ADS-7树脂为合适的吸附剂；优化的柱层析条件为：上样和洗脱温度60℃，上样原料浓度6 mg/mL，上样和洗脱流量均为1.0 BV/h；优化的结晶工艺条件为：结晶溶剂30%～40%乙醇，大豆皂苷初始浓度165 mg/mL，降温速率3.2℃/h。在上述条件下，用柱层析法可使大豆皂苷的含量从原料中的3.0%提高至45%以上，大豆皂苷收率大于90%。再通过结晶可得含量大于96.0%的大豆皂苷，大豆皂苷收率大于50％。说明该文研究的制备工艺明显优于现有的萃取工艺，具有重要的工业应用价值。