诱导猪肺泡巨噬细胞CD163受体表达的细胞因子筛选

猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophages,PAM)中的CD163受体作为明星分子不仅参与正常的生理活动,而且作为重要的病毒受体介导猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)入侵宿主靶细胞,因...     

不同培养条件对牛精原干细胞增殖的影响与特性鉴定

探索血清浓度以及干细胞因子（SCF）、白血病抑制因子（LIF）、胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）对牛精原干细胞体外增殖的影响,并对其进行鉴定。试验1：以高糖DMEM为基础培养液,添加浓度为0%、2.5%、5%和10%的胎牛血清（Fetal bovine serum,FBS）,分为4个试验组。结果表明,血清浓度影响牛精原干细胞的体外增殖,添加2.5%的FBS比较合适。试验2：培养液中加入不同浓度的SCF、LIF及GDNF,可增加精原干细胞的数量,其中加入20μg/L SCF、80μg/L GDNF、10μg/L LIF后,与对照组比较能显著提高精原干细胞数（P〈0.05）。采用碱性磷酸酶染色、细胞免疫组织化学染色和RT-PCR对牛精原干细胞进行鉴定,结果碱性磷酸酶染色呈弱阳性;细胞免疫组织化学染色Integrinβ1阳性、c-kit阳性;经RT-PCR扩增,获得了120 bp的Gfrα1序列和280 bp的c-kit序列,与预期的产物大小一致。因此,培养液中添加2.5?S、20μg/L SCF、80 ng/mL GDNF、10μg/L LIF对精原干细胞的增殖有利。     

石硖龙眼密植矮化稳产栽培技术

1999年，笔者在梅县白渡镇瓜州芳华种养场果园建立密植矮化稳产栽培示范园，面积4．9hm^2，2002年开始挂果，2003年全园挂果，2004年总产7．6万kg，收入60．8万元，取得了显著的经济效益。现将石硖龙眼密植矮化稳产栽培技术总结如下。     

间充质干细胞疗法应用于宠物临床的现状及问题

间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)是存在于机体间质组织中的成体干细胞.在体内或体外适宜条件下MSCs具有向多种细胞类型分化的能力,包括成骨细胞、软骨细胞、肌肉细胞、脂肪细胞甚至胰岛细胞和神经细胞.MSCs疗法已经成为一种新兴的治疗手段,能有效地提高宠物的生活质量,帮助动物摆脱病痛的困扰.本研究综述了MSCs疗法在宠物临床中应用的现状并讨论了应用中存在的问题.     

牛精原干细胞的分离和纯化及体外培养的一般特性

采用两步酶消化法制备5月龄的牛生殖细胞悬液,用Percoll不连续密度梯度法分离精原细胞,接种于含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基中,37℃,5%CO2饱和湿度培养,观察培养细胞的生长和形态变化。结果5月龄牛的曲细精管主要包含细胞为精原细胞、Sertoli细胞,每克睾丸实质收获生精上皮细胞总数平均为3.18×106个细胞,精原细胞纯化后纯度达69.27%,精原细胞主要分布于27%~35%的Percoll梯度中。牛精原干细胞体外培养6~7 d后开始分裂,20 d后精原干细胞形成小集落。结果表明用两步酶消化、Percoll不连续密度梯度法分离的精原细胞能满足体外培养的需要,可以存活并发生增殖。     

多重PCR方法鉴定5类牛源致泻性大肠埃希菌

为建立鉴定5类牛源致泻性大肠埃希菌(DEC)多重PCR检测方法,对陕西关中奶牛场犊牛粪便中分离的大肠埃希菌进行检测。以EAEC(astA、aggR、pic)、EHEC(stx1、stx2)、EPEC(escV、bfpB)、EIEC(invE)和ETEC(lt、stp、sth)5类DEC中11种毒力基因为目标,uidA基因为阳性对照,建立两体系(体系Ⅰ和Ⅱ)多重PCR检测方法,通过改变引物浓度、退火温度等检测条件进行优化,并对其特异性和灵敏度进行检测。结果显示,体系Ⅰ检测EAEC、EHEC,体系Ⅱ检测EPEC、EIEC、ETEC,除astA引物浓度为0.5μmol/L,其余均为0.3～0.4μmol/L;退火温度以59℃最佳;ETEC的检测下限最低(1.09×10³ CFU/mL),其余依次为EHEC(1.27×10³ CFU/mL)、EIEC(2.43×10³ CFU/mL)、EPEC(5.71×10³ CFU/mL)、EAEC(7.98×10³ CFU/mL);经验证该方法只...     

pEGFP-hTERT载体的构建及其在牛A型精原细胞中的表达

为了构建端粒酶逆转录酶表达载体,用带有绿色荧光蛋白报告基因的载体pEGFP-C1和带有hTERT cDNA的载体pCL-Neo-hTERT,通过基因重组构建新的载体pEGFP-hTERT,转化后筛选阳性克隆进行酶切鉴定;pEGFP-hTERT载体通过脂质体介导法转染纯化后的牛A型精原细胞,观察绿色荧光表达,G418筛选阳性克隆。结果表明,pEGFP-hTERT载体与预设计的一致;pEGFP-hTERT载体转染牛A型精原细胞后,经筛选获得了1个表达绿色荧光蛋白的阳性细胞克隆。由此可见,hTERT表达载体得到了成功构建,并在牛A型精原细胞中实现了表达。