根癌农杆菌介导ipt基因对切花菊的遗传转化

以根癌农杆菌(Agrobactcium tumefaciens)LBA4404菌株介导异戊烯基转移酶基因(ipt)转化切花菊(Dendrathema grandiflorum)，对转化材料进行连续的Kan抗性筛选，获得69株抗性株。部分植株经PCR和Southern blot检测呈阳性，对照均为阴性；ELISA检测抗性株衰老同期叶片内源iPAs含量是对照株的4．7倍。田间观察株型、叶色、花芽分化等性状和对照相比出现差异。叶绿素含量测定显示，抗性株叶片在花芽分化期、盛花期和衰老期总叶绿素含量分别是对照株的1．47、2．26和2．60倍。     

重组球孢白僵菌表达目标产物类枯草杆菌蛋白酶的发酵特性研究

采用单因子筛选和正交试验,研究了碳源、氮源、微量元素及无机盐等营养成分对重组球孢白僵菌(Beauveria bassiana)菌株Bb0062-15-4-CDEP-1产生目标产物类枯草杆菌蛋白酶CDEP-1的影响,并通过摇瓶发酵和30 L发酵罐发酵对其发酵特性进行了研究.结果表明,其优化发酵培养基为2.0%玉米粉,1.0%麦麸,0.25%豆粕粉,0.4%NaNO3,0.1%MgSO4·7H2O.摇瓶发酵结果表明,在对数生长期,随着菌体生物量的增加,CDEP-1产量上升,二者呈一定的平行关系;当菌体生长到稳定期,CDEP-1产量继续上升,并达到产酶高峰;此后,随着菌体生长的衰退,CDEP-1产量出现快速下降趋势.扩大培养时,30 L发酵罐中60 h产酶量最高,比摇瓶培养(168 h)缩短了108 h,单位体积的产酶量比摇瓶培养提高80%.结果对研究和利用该球孢白僵菌重组菌株的代谢产物,提高真菌杀虫剂的杀虫效果奠定了基础.     

棉花铃重AFLP标记的初步研究

本文以陆地棉铃重近等基因系为材料(大铃≥5.4g,小铃≤1.7g),构建大小铃两个近等基因池.利用AFLP标记技术对两基因池进行分析,64对引物组合共产生3840条稳定、清晰扩增带.五条扩增带在两基因池间呈现多态性,其中四条差异带出现在大铃基因池,编号分别为LB-1、LB-2、LB-3和LB-4;一条出现在小铃基因池,编号为SB-1.模板浓度梯度分析表明,在一定范围内,酶切模板浓度对AFLP结果影响较小.利用稍作修改的CTAB法提取的棉花DNA可用于AFLP分析.     

芽孢杆菌纤溶酶的纯化及其生物活性研究

芽孢杆菌2^#（Bs-2）的发酵液经过硫酸铵分级沉淀、Sephadex G-75凝胶过滤层析、Q-Sepharose阴离子交换层析、电泳制备和电源洗脱。获得一种具有纤溶性的蛋白酶;该蛋白酶由3个亚基组成,分子量分别为23KD,SSKD,19KD,全酶分子量约为64KD;经纤维蛋白平板测定表明,该酶既具有纤溶酶作用,又具有激活纤溶酶原的作用。     

汕优63杂合性的RAPD和AFLP分析

 利用57个RAPD引物和15个AFLP引物分析了明恢63与珍汕97A之间1209个位点的杂合性。结果表明,57个RAPD引物能扩增出394条带,平均每个引物扩增6.9条,多态性带129条,汕优63的杂合性为32.74%;15个AFLP引物共扩增出815个位点,平均每个引物扩增54.33条,多态性带289条,汕优63的杂合性为35.46%。1209个位点显示汕优63的杂合性为34.57%。     

农杆菌介导法将FPFJ基因导入油菜的研究初报

将拟南芥早花基因FPF1（flowering promoting factor 1)插入双元高效表达载体pBI 121中,构建了植物表达载体pBIUbi-FPF1。以“双低”甘蓝型晚熟油菜品种2000 F4102,2000 F4153的下胚轴为转化受体,通过农杆菌介导的遗传转化获得抗卡那霉素的再生转基因植株,并探讨了影响油菜再生频率以及遗传转化效率的几个因素。对部分经卡那霉素筛选得到的再生植株进行了PCR检测,其中70％以上的卡那霉素抗性植株表现阳性,初步证明FPF1基因已整合到油菜细胞核基因组中。     

利用标记基因测定假单胞菌与棉苗的亲和性

 植物与微生物之间的亲和性是研究植物与微生物相互关系的重要内容。本文采用标记基因法,将外源抗性基因引入分离自棉花植株中的一个假单胞菌(Pseudomonas spp.)菌株B₄中,获得Kmr和Rifr的双重抗性株。利用抗性基因标记法,研究了B₄与棉花幼苗的亲和性,取得比较满意的结果。     

转基因球孢白僵菌发酵产物对野生菌株的增效作用

研究发现,超量表达类枯草杆菌蛋白酶基因CDEP-1的球孢白僵菌菌株Bb0062-15-4-CDEP-1的发酵产物对野生菌株具有明显的杀桃蚜增效作用。进一步分析增效作用与目的基因表达产物关系的结果显示,加入CDEP-1酶活为44.3±0.6U/μL的发酵产物,可使野生菌株对桃蚜的致死中浓度降低4倍以上,共毒系数(CTC)达404.6。但发酵产物经121℃处理20min,增效作用完全丧失。用饱和硫酸铵沉淀蛋白质分别将透析后的重溶蛋白质和上清液用于增效作用测定,结果证明增效成分主要是蛋白类物质。将梯度稀释的发酵产物与浓度为1×107孢子/mL的野生菌株孢子悬浮液混合进行生物测定,发现各处理的致死中时与CDEP-1的活性呈负相关,相关系数为-0.8946。由此推断,发酵产物中的增效物质主要是目的基因表达产物CDEP-1。     

四川省主要杂交稻组合DNA杂合性的比较

利用9个随机引物分析了近年来四川省选育的籼型杂交水稻新组合的DNA杂合性。结果表明,不同的引物揭示多态性的能力存在差异;同一引物在不同的水稻组合间扩增的多态性也不一样。14个组合DNA杂合性变异较小,分布于0.2283～0.3451之间。14个组合可以分为3类,但经t检验表明,13个组合与汕优63无显著差异。     

利用极大似然法分析野败型杂交籼稻恢复基因的遗传

利用极大似然法和ＥＭ算法以野败型杂交籼稻恢复性的主基因进行了探测。结果表明,恢复性由两对主基因控制,两对恢复基因间表现显性上位性互作,两对基因的作用存在强弱之分,强恢复基因的加性效应是弱基因的２倍。