正交设计优化青蒿SRAP-PCR反应体系及引物筛选

为了建立青蒿的SRAP最佳扩增体系,并筛选出SRAP多态性引物,本研究以青蒿叶片DNA为模板,采用正交试验设计,以Mg^2+、dNTP Mix、Taq DNA聚合酶、引物和DNA模板5种因素5个水平,对青蒿SRAP反应体系进行研究。结果表明,青蒿SRAP-PCR最佳反应体系为:引物0.6μmol/L、Mg^2+2.0 mmol/L、模板DNA 5.1 ng、Taq DNA聚合酶2.0 U、dNTPs 0.25 mmol/L,总体积为25μL。各因素对扩增反应均有不同影响,其中引物浓度的影响最大,dNTPs的影响最小。运用该体系对不同种质资源的青蒿进行验证,证明该体系稳定可靠,并在30个引物组合中筛选出了25对扩增条带清晰,多态性丰富的引物组合。这一结论为今后利用SRAP标记技术进行青蒿分子遗传学研究提供了科学依据。     

树莓叶黄酮提取的正交试验和响应曲面法工艺优化对比

旨在为树莓叶黄酮的开发应用提供数据参考,通过正交试验与响应曲面法设计改良乙醇提取工艺,并通过HPLC建立树莓叶黄酮的色谱分离条件为:Agilent ZorBax SB色谱柱,流动相为1mg/mL乙酸-乙腈=72.5∶27.5,等度分离,柱温30℃,检测波长:257nm,完成树莓叶黄酮的初步分离,以及黄酮中芦丁含量的准确测定和验证。最佳提取工艺为:646mL/mL乙醇,料液比1∶12.5,41.9℃加热回流173.3min,最佳工艺所得提取率1.127%,响应曲面法最佳工艺提取率略高于正交试验法,且其工艺条件均较优于正交试验所得工艺,可为后期研发树莓叶芦丁兽用中药制剂提供理论参考。     

青蒿素的提取及蒿甲醚的合成

提取、分离青蒿素并合成其衍生物蒿甲醚。以溶剂法从青蒿中提取青蒿素,采用柱层析法进行纯化。通过还原、醚化反应制得其衍生物蒿甲醚。结果青蒿素收率好,纯度高;蒿甲醚合成收率达76．2％。该方法获得的产品质量稳定,产率高,成本低。     

大孔树脂对大青叶有机酸的纯化工艺研究

通过静态和动态相结合的方法,以邻氨基苯甲酸的吸附率、解吸率为指标,优化大孔树脂纯化大青叶提取液中有机酸的工艺参数.结果表明,大孔树脂X-5对邻氨基苯甲酸的吸附为快速平衡型,适宜的吸附条件为大青叶提取液上样浓度0.18 mg/mL,静态吸附时间3h,pH 4;体积分数65％的乙醇作洗脱剂洗脱效果较好.     

微波法提取茎直黄芪中苦马豆素工艺的优化

以茎直黄芪(A stragalus strictus)为原料,采用微波法提取其中的苦马豆素,设计正交试验优化提取工艺,并用气相色谱法测定提取物中苦马豆素的含量.结果表明,优化的提取条件为茎直黄芪与甲醇料液比1∶10(m∶V,g/mL)、微波功率280 W、提取时间20 s.在优化的提取条件下茎直黄芪中苦马豆素的提取率可达到0.009 264％.     

大青叶中靛玉红HPLC测定方法的建立

为建立大青叶中靛玉红含量测定方法。用Waters Alliance 2695高效液相色谱仪测定,色谱柱:C18(4.6 m×150 mm)柱,流速:1 mL/min,柱温:25℃,进样量:10μL。结果表明,在1.5～24.0μg/mL内靛玉红含量与峰面积呈良好的线性关系(r=0.999 9);靛玉红溶剂选用氯仿,流动相选用甲醇∶水为75∶25,吸收波长选用289 mm,萃取溶液pH值调至1.0,萃取溶剂选用氯仿,此条件下HPLC法测定大青叶中靛玉红,精密度高(RSD=0.64%,)加样回收率为97.33%,重现性好(RSD=0.54%)。     

HPLC法测定大青叶中靛玉红的含量

以HPLC法作为大青叶中靛玉红含量的检测方法,探讨了不同pH值和不同萃取溶剂对靛玉红提取的影响,确立了大青叶中靛玉红含量的测定方法。结果表明:在试验条件下,靛玉红在1.5～24μg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.999 9),精密度RSD=0.64%,加样回收率为97.33%,重现性RSD=0.54%。HPLC法简单可行,准确性好,重现性高,是大青叶中靛玉红含量测定的有效方法。     

12C6+离子束辐照对茶树精油质量及其杀灭口蹄疫病毒效果的影响

本研究旨在探索¹²C⁶⁺离子辐照茶树精油后，茶树精油活性成份的变化及其对口蹄疫病毒（foot-and-mouth disease virus，FMDV）的杀灭效果。采用50、100、150、200 Gy的¹²C⁶⁺离子束辐照茶树精油后，利用气相色谱-质谱联用仪（gas chromatography-mass spectrometer，GC-MS）法和红外色谱法分析辐照前后茶树精油主要成分变化及其质量沉积效应；检测茶树精油中松油烯-4-醇、1，8-桉叶素含量变化；将辐照前后茶树精油原液以及1：2、1：4辐照后稀释的精油注射50日龄成年鼠检测其临床用药的安全性；将稀释成1：2、1：4、1：6、1：8的辐照后茶树精油分别与等量的1：500的O-FMDV强毒充分混匀，皮下注射4~5日龄乳鼠，连续观察7 d，观察小鼠有无FMDV感染症状。试验结果表明，以100 Gy的¹²C⁶⁺离子束辐照茶树精油后，松油烯-4-醇含量由37.90%升高到39.03%，1，8-桉叶素含量无明显变化，羟基化合物含量明显增高；辐照前后茶树精油原液以及稀释后精油注射未见不良反应，辐照后茶树精油临床用药安全；乳鼠感染混有不同浓度的O-FMDV后，1：2、1：4稀释倍数的茶树精油组感染O-FMDV的乳鼠未出现死亡，注射部位未见炎症、坏死等，阳性对照组全部死亡。结果表明，¹²C⁶⁺离子束辐照茶树精油最佳剂量为100 Gy，在乳鼠体内抗O-FMDV效果的最大稀释度为1：4，¹²C⁶⁺离子束辐照可以提高茶树精油对FMDV的杀灭效果。     

桔梗过氧化物酶Ⅲ基因家族的鉴定及辐射后表达分析

为探究过氧化物酶Ⅲ（peroxidase classⅢ，PERs）基因家族在药用植物响应电离辐射中的作用，本试验研究了中药材桔梗的PERs(PgPERs)家族成员特性，及桔梗幼苗经高能重离子束和X射线辐射处理后PgPERs基因的表达量变化。通过序列比对、结构域鉴定和蛋白保守基序分析，共获得53个PgPERs，其蛋白的序列长度多数为258～621个氨基酸，碱性蛋白占多数。启动子区调控元件分析结果说明PgPERs存在多个与生长发育、植物激素和逆境胁迫相关的顺式作用元件。进化分析结果显示，PgPERs基因家族主要分为5个簇，与拟南芥过氧化物酶Ⅲ（AtPERs）有29对共线性关系。高能重离子束辐射桔梗幼苗后检测到3个PgPERs基因表达量上调，X射线辐射处理后有8个PgPERs基因差异表达。这些差异基因编码的蛋白质二级结构以α-螺旋和无规则卷曲为主，三级结构的相似度高，并含有跨膜螺旋。以上结果表明，不同类型的电离辐射处理桔梗幼苗后，其PgPERs响应机制并不相同。本研究结果为探究电离辐射影响桔梗生长发育和辐射响应过程提供了新的视角。