正交设计优化青蒿SRAP-PCR反应体系及引物筛选

为了建立青蒿的SRAP最佳扩增体系,并筛选出SRAP多态性引物,本研究以青蒿叶片DNA为模板,采用正交试验设计,以Mg^2+、dNTP Mix、Taq DNA聚合酶、引物和DNA模板5种因素5个水平,对青蒿SRAP反应体系进行研究。结果表明,青蒿SRAP-PCR最佳反应体系为:引物0.6μmol/L、Mg^2+2.0 mmol/L、模板DNA 5.1 ng、Taq DNA聚合酶2.0 U、dNTPs 0.25 mmol/L,总体积为25μL。各因素对扩增反应均有不同影响,其中引物浓度的影响最大,dNTPs的影响最小。运用该体系对不同种质资源的青蒿进行验证,证明该体系稳定可靠,并在30个引物组合中筛选出了25对扩增条带清晰,多态性丰富的引物组合。这一结论为今后利用SRAP标记技术进行青蒿分子遗传学研究提供了科学依据。     

树莓叶黄酮提取的正交试验和响应曲面法工艺优化对比

旨在为树莓叶黄酮的开发应用提供数据参考,通过正交试验与响应曲面法设计改良乙醇提取工艺,并通过HPLC建立树莓叶黄酮的色谱分离条件为:Agilent ZorBax SB色谱柱,流动相为1mg/mL乙酸-乙腈=72.5∶27.5,等度分离,柱温30℃,检测波长:257nm,完成树莓叶黄酮的初步分离,以及黄酮中芦丁含量的准确测定和验证。最佳提取工艺为:646mL/mL乙醇,料液比1∶12.5,41.9℃加热回流173.3min,最佳工艺所得提取率1.127%,响应曲面法最佳工艺提取率略高于正交试验法,且其工艺条件均较优于正交试验所得工艺,可为后期研发树莓叶芦丁兽用中药制剂提供理论参考。     

青蒿素的提取及蒿甲醚的合成

提取、分离青蒿素并合成其衍生物蒿甲醚。以溶剂法从青蒿中提取青蒿素,采用柱层析法进行纯化。通过还原、醚化反应制得其衍生物蒿甲醚。结果青蒿素收率好,纯度高;蒿甲醚合成收率达76．2％。该方法获得的产品质量稳定,产率高,成本低。     

12C6+重离子诱变海迪茨氏菌及其修复柴油污染土壤的研究

应用重离子束辐射改良海迪茨氏菌(Dietzia maris)菌株在降解方面的能力,将离子辐射学与环境修复学相结合,论证该菌在以柴油为代表的污染土壤中的修复能力.利用12C6+重离子能量为80MeV、LET为35.5keV·μm-1、吸收剂量率1Gy· min-1、辐射剂量为5～120Gy辐射具有降解石油烃的代表菌株Dietzia maris,经初选、复选筛选得到了突变菌株DMYR9,并对其在构建污染土壤样品中分解柴油率及修复前后土壤系统中酶活性相关参数与化学改良修复前后污染土壤样品相关数据进行对比分析.结果表明,土壤受柴油污染不久后过氧化氢酶、脱氢酶和脂酶的活性呈现上升趋势,由突变菌体DMYR9修复后的污染土壤系统中脂酶活性呈现最低下降趋势,随着土壤中柴油被DMYR9降解,脂酶活性又不断降低,突变菌体数量及柴油降解率都具有很好的正相关性.突变菌株DMYR9进行生物修复的效果优于化学法修复,这对今后在土壤污染治理中开发利用此突变菌体具有指导意义,并具有较高的后续应用利用价值.     

微波法提取茎直黄芪中苦马豆素工艺的优化

以茎直黄芪(A stragalus strictus)为原料,采用微波法提取其中的苦马豆素,设计正交试验优化提取工艺,并用气相色谱法测定提取物中苦马豆素的含量.结果表明,优化的提取条件为茎直黄芪与甲醇料液比1∶10(m∶V,g/mL)、微波功率280 W、提取时间20 s.在优化的提取条件下茎直黄芪中苦马豆素的提取率可达到0.009 264％.     

12C6+离子束辐照对茶树精油质量及其杀灭口蹄疫病毒效果的影响

本研究旨在探索¹²C⁶⁺离子辐照茶树精油后，茶树精油活性成份的变化及其对口蹄疫病毒（foot-and-mouth disease virus，FMDV）的杀灭效果。采用50、100、150、200 Gy的¹²C⁶⁺离子束辐照茶树精油后，利用气相色谱-质谱联用仪（gas chromatography-mass spectrometer，GC-MS）法和红外色谱法分析辐照前后茶树精油主要成分变化及其质量沉积效应；检测茶树精油中松油烯-4-醇、1，8-桉叶素含量变化；将辐照前后茶树精油原液以及1：2、1：4辐照后稀释的精油注射50日龄成年鼠检测其临床用药的安全性；将稀释成1：2、1：4、1：6、1：8的辐照后茶树精油分别与等量的1：500的O-FMDV强毒充分混匀，皮下注射4~5日龄乳鼠，连续观察7 d，观察小鼠有无FMDV感染症状。试验结果表明，以100 Gy的¹²C⁶⁺离子束辐照茶树精油后，松油烯-4-醇含量由37.90%升高到39.03%，1，8-桉叶素含量无明显变化，羟基化合物含量明显增高；辐照前后茶树精油原液以及稀释后精油注射未见不良反应，辐照后茶树精油临床用药安全；乳鼠感染混有不同浓度的O-FMDV后，1：2、1：4稀释倍数的茶树精油组感染O-FMDV的乳鼠未出现死亡，注射部位未见炎症、坏死等，阳性对照组全部死亡。结果表明，¹²C⁶⁺离子束辐照茶树精油最佳剂量为100 Gy，在乳鼠体内抗O-FMDV效果的最大稀释度为1：4，¹²C⁶⁺离子束辐照可以提高茶树精油对FMDV的杀灭效果。