VEGF在绵羊生殖管道中的表达规律

以不同发情周期雌性绵羊子宫、输卵管为研究对象,采用免疫组织化学技术,针对血管内皮生长因子（VEGF）在绵羊子宫、输卵管的表达、定位和变化规律进行了检测,同时应用相关图像分析软件对抗原染色强度进行了定量分析。结果表明：输卵管在发情0～15d,VEGF表达量在第9天达到峰值后经历波动逐渐下降过程,输卵管内膜上皮细胞是VEGF抗原的主要靶细胞;而子宫角在发情0～15d,VEGF表达量在第5天达到峰值后经历波动逐渐下降过程,子宫内膜固有层及腺体周围细胞为VEGF抗原的主要靶细胞。该研究结果为绵羊生产中进一步提高受胎率和妊娠率及频密产羔等技术的应用提供了科学依据。     

RNA干扰技术在动物繁殖中的应用

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是一种由双链RNA诱发的转录后水平的基因沉默现象,是近几年发展起来的基因表达调节新机制,广泛地存在于真菌、植物和动物中。到目前为止,已有很多试验证明,RNAi作为一种基因功能研究的新手段,在动物繁殖研究中发挥了极其高效的作用。作者主要介绍了RNAi的研究历史、分子机制、作用特点、生物学意义及在动物繁殖中的应用。     

雌性哺乳动物子宫血管新生及其调控机制

雌性哺乳动物在进入初情期（青春期）之后,其子宫内膜随着发情周期（月经周期）及妊娠建立等机体生理机能的转换,发生一系列周期性组织结构上的变化,而这种周期性变化主要与其本身血管周期性新生密切相关,血管新生则主要受血管内皮生长因子（VEGF）的调控。本文对雌性哺乳动物子宫内膜在发情周期、胚胎植入过程及胚胎发育过程及胎盘形成等的血管新生特点及VEGF的表达规律进行综述,以便系统地了解雌性动物子宫内膜的血管新生过程及调控机制,为提高雌性动物繁殖效率提供参考依据。     

舍饲条件下辽宁绒山羊生理指标研究

辽宁绒山羊是在辽宁省东部山区及辽东半岛经过当地人们长期选育,通过选留毛色全自、产绒量高、体驱大、生长发育快的绒山羊留做种用逐渐繁衍,而形成的一个地方良种.自20世纪60年代开始进行有计划的本品种选育,于1981年被正式命名为辽宁绒山羊,核心产区主要集中在辽宁省辽东半岛,属长白山脉千山山系向东南延伸的步云山区周围丘陵地区,分布在盖州、岫岩、复县、庄河、凤城、宽甸及辽阳等县市.目前主产区约有60万只纯种辽宁绒山羊.     

Bad基因在黄体期绵羊生殖器官中表达的比较研究

以黄体期小尾寒羊和萨福克羊为研究对象,采用免疫组织化学技术,针对Bad基因在母羊生殖器官卵巢,输卵管和子宫中的表达与定位进行初步研究,在卵巢中Bad基因均在多数黄体细胞中表达;在输卵管宫管结合部、峡部和壶腹部的分泌细胞Bad基因均有不同程度的表达,未发现纤毛细胞Bad阳性细胞;子宫内膜腺体小泡表达Bad阳性,子宫内膜子叶、基质的阳性细胞数极少,阳性细胞呈轻度着色,显弱阳性.利用计算机图像分析技术测量小尾寒羊和萨福克羊Bad基因表达的阳性细胞率和平均光密度,Bad基因在这两种绵羊组织中的表达规律大体相似,也存在一些明显的差异:萨福克羊的黄体细胞较小尾寒羊中的细胞凋亡更明显,萨福克羊输卵管伞部和壶腹部上皮Bad阳性细胞率均高于小尾寒羊,小尾寒羊子宫内膜子叶和基质Bad阳性细胞率和平均先密度均显著高于萨福克(P＜0.01).结果表明,小尾寒羊和萨福克羊生殖器官中细胞凋亡的差异与Bad基因表达的差异,可能是造成两者繁殖力高低差异的基础.     

绵羊妊娠期生殖组织VEGF基因的克隆及其组织表达量的检测

从雌性绵羊妊娠期不同阶段的输卵管、子宫内膜、黄体组织中提取总RNA,根据已经发表的绵羊的Flt-Ⅰ基因的cDNA序列设计合成引物,采用RT-PCR扩增出绵羊VEGF基因;将扩增产物克隆于裁体后进行序列分析,以基因为内参,对扩增的VEGF基因进行琼脂糖凝胶电泳后,应用,推断出不同组织中Flt-Ⅰ基因的表达量.结果表明:从雌性绵羊妊娠期不同阶段生殖道各组织上皮均获得82 bp的VEGF基因的扩增片段,且VEGF基因在雌性绵羊生殖道各组织内的表达量不同.说明VEGF基因对绵羊的妊娠维持起着重要的作用.     

绵羊妊娠期生殖组织Flt-1基因的克隆及其组织表达量的检测

试验从雌性绵羊妊娠期不同阶段的输卵管、子宫内膜、卵泡组织中提取总RNA,根据已发表的绵羊Flt-1基因的cDNA序列设计引物,以β-Actin基因为内参,采用RT-PCR扩增绵羊Flt-1基因,将扩增产物克隆于载体后进行序列分析,并应用Kodak Science 1 D、Bandscan图像分析软件,推断出不同组织中Flt-1基因的表达量。结果表明,从雌性绵羊妊娠期不同阶段生殖道各组织上皮均获得82 bp的Flt-1基因的扩增片段,且Flt-1基因在雌性绵羊生殖道各组织内的表达量不同。说明Flt-1基因对绵羊的妊娠维持起着重要的作用。     

促凋亡基因(Bad)在卵泡期绵羊生殖器官中的表达

以卵泡期小尾寒羊和萨福克羊为研究对象,采用免疫组织化学技术,对促凋亡基因(Bad)在生殖器官卵巢、输卵管和子宫中的表达与定位进行初步研究。结果表明,在卵巢组织中Bad基因在原始卵泡、初级卵泡和次级卵泡中呈中度着染,在三级卵泡中呈轻度着染,阳性细胞在卵泡上皮细胞和颗粒细胞中分散分布,呈轻度着染;输卵管上皮分泌细胞和部分纤毛细胞胞质中见Bad基因中等强度表达,输卵管壶腹部上皮中,Bad基因多表达于分泌细胞,纤毛细胞中有部分呈阳性且强度弱,宫管结合部、峡部和壶腹部Bad基因阳性细胞染色强度弱,均呈中度着染;子宫内膜子叶和基质中的阳性细胞数量极少,阳性细胞呈轻度着色。利用计算机图像分析技术测量小尾寒羊和萨福克羊生殖器官各组织细胞中Bad基因表达的阳性细胞率和平均光密度,结果Bad基因在这2品种绵羊组织中的表达规律大体相似,但也存在一些明显的差异:萨福克羊三级卵泡颗粒细胞Bad基因阳性细胞率显著高于小尾寒羊(P0.01);萨福克羊三级卵泡和成熟卵泡膜细胞Bad基因阳性细胞率和平均光密度均显著高于小尾寒羊(P0.01);萨福克羊子宫内膜腺体卵泡期Bad基因阳性细胞平均光密度显著高于小尾寒羊(P0.01);由此表明,小尾寒羊和萨福克羊卵泡期生殖器官中细胞凋亡的差异与Bad基因表达的差异,可能是造成两者繁殖力高低差异的基础。     

辽宁绒山羊皮肤毛囊mir-1298-5p靶基因预测及表达载体构建

探讨辽宁绒山羊皮肤毛囊不同发育时期mir-1298-5p的调控作用及其与靶基因的潜在关系,为mir-1298-5p与其靶基因对皮肤毛囊发育作用提供理论依据。以辽宁绒山羊皮肤毛囊组织为材料,通过miRNA的分离、表达、靶基因预测筛选及靶位点3'UTR表达载体构建,采用RT-PCR进行表达检测,在线靶基因预测软件预测mir-1298-5p的靶基因,并对其靶基因TGF-βR1的靶位点进行克隆测序、缺失突变。结果表明：靶基因预测发现TGF-β R1的3'UTR存在mir-1298-5p种子区结合位点,且mir-1298-5p及其靶基因TGF-β R1均在皮肤毛囊不同发育时期呈现差异性表达。mir-1298-5p对皮肤毛囊周期性发育可能起到一定的调控作用,并成功构建了TGF-βR1 3'UTR表达载体,为后期过表达转染体系的建立和功能基因的验证奠定了基础。     

妊娠期绵羊子宫内膜VEGF基因表达的RT-PCR检测

[目的]探讨VEGF基因在不同繁殖力绵羊母羊妊娠期不同阶段的子宫内膜表达规律及差异。[方法]以已妊娠的2.5岁的东北细毛羊和小尾寒羊为试验动物,利用手术法采集样品组织。通过提取检测样品组织总RNA,并对其进行PCR扩增、检测分析扩增产物研究了VEGF基因在妊娠期绵羊子宫内膜的表达规律及差异。[结果]VEGFmRNA在绵羊各妊娠期的子宫内膜均有强烈表达,随着妊娠的持续,表达量逐渐升高,妊娠后期与妊娠前期相比子宫内膜VEGF基因的mRNA表达有明显差异（P〈0.05）。小尾寒羊在妊娠各期子宫内膜上VEGF基因的表达水平均高于东北细毛羊,但差异不显著（P〉0.05）。[结论]该研究为阐明VEGF基因在绵羊妊娠发育过程中的作用机制提供了参考。