Bad基因在黄体期绵羊生殖器官中表达的比较研究

以黄体期小尾寒羊和萨福克羊为研究对象,采用免疫组织化学技术,针对Bad基因在母羊生殖器官卵巢,输卵管和子宫中的表达与定位进行初步研究,在卵巢中Bad基因均在多数黄体细胞中表达;在输卵管宫管结合部、峡部和壶腹部的分泌细胞Bad基因均有不同程度的表达,未发现纤毛细胞Bad阳性细胞;子宫内膜腺体小泡表达Bad阳性,子宫内膜子叶、基质的阳性细胞数极少,阳性细胞呈轻度着色,显弱阳性.利用计算机图像分析技术测量小尾寒羊和萨福克羊Bad基因表达的阳性细胞率和平均光密度,Bad基因在这两种绵羊组织中的表达规律大体相似,也存在一些明显的差异:萨福克羊的黄体细胞较小尾寒羊中的细胞凋亡更明显,萨福克羊输卵管伞部和壶腹部上皮Bad阳性细胞率均高于小尾寒羊,小尾寒羊子宫内膜子叶和基质Bad阳性细胞率和平均先密度均显著高于萨福克(P＜0.01).结果表明,小尾寒羊和萨福克羊生殖器官中细胞凋亡的差异与Bad基因表达的差异,可能是造成两者繁殖力高低差异的基础.     

Bad基因在小尾寒羊输卵管上皮组织的表达

采用免疫组织化学方法检测小尾寒羊输卵管上皮组织中Bad基因的表达水平,利用计算机图像分析技术测量小尾寒羊生殖周期的不同阶段输卵管上皮组织Bad基因表达的平均光密度和平均阳性面积。结果显示,小尾寒羊输卵管伞部、壶腹部和峡部上皮组织中的部分纤毛细胞在卵泡期和黄体期呈阳性,黄体期纤毛细胞较卵泡期表达强。同时期各部位表达强度的差异不明显。黄体期和卵泡期的分泌细胞均呈阳性,同时期不同部位差异不大,但同部位的分泌细胞黄体期比卵泡期表达强。壶腹部和峡部上皮组织阳性细胞的平均光密度值与阳性面积率差异不显著(P>0.05)。输卵管伞部在黄体期和卵泡期与同时期壶腹部和峡部比较,平均光密度和阳性面积率差异显著(P<0.05)。同一部位不同时期平均光密度值和阳性面积率差异显著(P<0.05)。表明Bad基因参与了输卵管上皮组织周期性变化的调控。     

促性腺激素受体在雌性水牛生殖器官的表达定位研究

为研究促性腺激素受体(FSHR、LHR)在广西雌性水牛生殖器官中的分布情况,运用免疫组化SABC法对处于不同发情周期(卵泡期、黄体期)成年水牛的卵巢、子宫、输卵管中FSHR、LHR分别进行染色定位。结果表明,FSHR/LHR阳性细胞在卵巢主要见于卵巢内膜细胞及卵泡颗粒细胞;子宫主要见于子宫内膜上皮细胞和腺体细胞;输卵管主要见于柱状上皮纤毛细胞。其中,随着发情周期不同,FSHR、LHR的表达量也有所差异,卵巢中卵泡期FSHR、LHR的表达量均高于黄体期;子宫中FSHR的表达量卵泡期高于黄体期,LHR的表达量黄体期高于卵泡期;而输卵管并没有显著差异。     

DAPI检测黄体期绵羊生殖器官中细胞凋亡的比较研究

以黄体期小尾寒羊和萨福克羊为研究对象,采用DAPI原位荧光标记技术,对高繁殖力品种小尾寒羊和低繁殖力品种萨福克羊成年母羊主要生殖器官(卵巢、输卵管、子宫)进行细胞凋亡的确认与定位。结果表明:小尾寒羊和萨福克羊卵巢中黄体细胞有凋亡现象,黄体后期萨福克羊的细胞凋亡较小尾寒羊明显;在萨福克羊黄体期输卵管各部位上皮中发现有极少数分泌细胞具有凋亡特征,而在小尾寒羊未检测到凋亡细胞,两品种羊输卵管上皮下结缔组织有少数凋亡细胞,小尾寒羊和萨福克羊子宫内膜的基质与腺体内皮中均检测到大量凋亡细胞。细胞凋亡是母羊生殖器官变化的重要调节机制,可能与造成两者繁殖力高低差异有关。     

Caspase-9在肉用绵羊主要生殖器官中的分布研究

通过试验研究凋亡因子Caspase-9在肉用绵羊主要生殖器官中的表达,并探讨其生理意义.利用免疫组织化学的方法对Caspase-9在肉用绵羊主要生殖器官中的表达进行研究.研究结果显示,Caspase-9只在细胞质中表达,其在卵巢中主要分布于原始卵泡、初级卵泡及颗粒性黄体细胞,而卵泡膜性黄体细胞中未见表达;黄体期,主要表达于子宫的浅层腺体腺上皮细胞、子宫内膜上皮细胞、子宫颈黏膜固有层的淋巴小结、输卵管黏膜上皮分泌细胞和纤毛细胞、峡部的浆液性腺的腺上皮细胞;卵泡期,子宫和输卵管各个部位阳性反应不明显.在正常生理情况下,Caspase-9参与了肉用绵羊主要生殖器官周期性变化的调控和子宫黏膜免疫,对生殖器官功能的稳定发挥起着重要作用.     

FMR1基因在小尾寒羊卵泡期和黄体期组织中的差异表达分析

为了探索绵羊脆性X智力障碍1(Fragile X Mental Retardation 1,FMR1)基因组织表达及其与母羊发情调控之间的关系,选择卵泡期和黄体期小尾寒羊各3只,采用半定量RT-PCR和荧光定量PCR技术对该基因在各组织表达及在繁殖相关组织表达量进行分析。结果表明:FMR1基因在卵泡期小尾寒羊18个组织中均有表达,其中在大脑、小脑、卵巢(左、右)、输卵管、子宫体、子宫角中高表达,在其他各组织呈中等或低丰度表达;FMR1基因在输卵管和子宫体两个组织中卵泡期的表达量显著高于黄体期(P0.05),在垂体的表达量最高。综上可知,FMR1基因在小尾寒羊卵泡期和黄体期表达差异大,可能调控卵泡期到黄体期的发情状态转换,与小尾寒羊的发情调控相关。     

牦牛p38MAPK在雌性主要生殖器官中的表达

旨在研究p38MAPK在母牦牛主要生殖器官中的表达情况,了解其表达差异性,为牦牛的繁殖性能研究提供相关基础资料。本研究采集卵泡期、黄体期、妊娠期成年健康母牦牛(各2头)主要生殖器官样品,免疫组化技术检测p38MAPK蛋白的表达部位;qRT-PCR和Western-blot技术对其基因和蛋白进行相对表达量测定。结果:1)免疫组化结果显示,p38MAPK蛋白在牦牛的卵巢、输卵管和子宫均呈阳性表达;2)qRT-PCR结果表明,p38MAPK基因在卵巢中的表达量卵泡期显著高于妊娠期(P0.05);在输卵管中的表达量黄体期显著高于卵泡期和妊娠期(P0.05);在子宫中的表达量妊娠期极显著高于卵泡期和黄体期(P0.01);3)Western-blot结果显示,p38MAPK蛋白在卵巢中的表达量卵泡期极显著高于黄体期和妊娠期(P0.01);在输卵管中的表达量黄体期极显著高于卵泡期和妊娠期(P0.01);在子宫中的表达量妊娠期极显著高于卵泡期和黄体期(P0.01)。结果表明,p38MAPK在母牦牛同一生殖器官的不同繁殖阶段其表达存在差异性,其可能参与了牦牛卵泡发育、黄体功能发挥以及胚胎着床和发育等一系列生殖过程,为牦牛的繁殖性能研究提供相关基础资料。     

雌性牦牛主要生殖器官中DBI的表达与定位分析

为加深对DBI基因功能的探究,揭示其在牦牛生殖生理过程中的作用。本试验采集健康母牦牛（3～6岁）繁殖周期不同阶段（卵泡期、黄体期和妊娠期）的卵巢、输卵管和子宫组织,共分为9组,每组设置3个生物学重复。采用实时荧光定量PCR （qRT-PCR）和蛋白免疫印迹技术（Western blotting,WB）检测牦牛DBI在繁殖周期不同阶段雌性牦牛生殖器官中的相对表达量;通过免疫组织化学方法（immunohistochemistry,IHC）定位DBI蛋白在雌性牦牛卵巢、输卵管和子宫中的分布情况。结果表明：1） qRT-PCR结果显示,在卵巢中,DBI在黄体期和妊娠期的表达量显著高于卵泡期（P<0.05）;在输卵管中,DBI在黄体期表达量显著高于卵泡期和妊娠期（P<0.05）;在子宫中,DBI在妊娠期表达量最高,黄体期次之,卵泡期最低。2） Western blotting结果表明,在卵巢中,DBI在妊娠期的水平显著高于卵泡期和黄体期（P<0.05）;在输卵管中,DBI在黄体期水平显著高于卵泡期和妊娠期（P<0.05）;在子宫中,DBI在妊娠期水平明显高于黄体期和卵泡期（P<0.05）。3） IHC结果显示,DBI主要位于生殖上皮细胞、颗粒细胞、卵泡膜细胞、黄体细胞、输卵管上皮细胞、子宫基质细胞和子宫腺中。DBI在牦牛繁殖周期不同阶段的卵巢、输卵管和子宫组织中的表达量存在显著差异,说明其参与牦牛生殖生理调控,为进一步挖掘DBI基因在高原哺乳动物生殖方面的研究奠定相应的理论基础。     

小尾寒羊黄体期和卵泡期生殖轴凋亡基因的表达研究及其与发情的关系

旨在分析Bad、Bax、Bcl-2和Bcl-xL基因在小尾寒羊黄体期和卵泡期下丘脑-垂体-性腺轴各组织中的表达差异,并探究这些基因与绵羊常年发情性状的关系。以常年发情小尾寒羊为研究对象,采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)技术,对比分析了Bad、Bax、Bcl-2和Bcl-xL4个基因在不同繁殖状态下(黄体期和卵泡期)小尾寒羊下丘脑-垂体-性腺轴各组织中的表达特征,采用放射免疫法(RIA)检测相应时期血清雌二醇和孕酮含量。结果表明,Bad、Bax、Bcl-2和Bcl-xL4个基因在下丘脑、垂体、卵巢均有表达,Bad和Bcl-2在黄体期的垂体和卵巢中的表达量均显著高于卵泡期(P0.05),在下丘脑中2个时期表达量都没有显著差异(P0.05);Bax和Bcl-xL在黄体期下丘脑、垂体和卵巢中的表达量与卵泡期均无显著差异(P0.05)。黄体期血清中孕酮含量显著高于卵泡期(P0.05),而2个时期血清中雌二醇含量没有显著差异(P0.05)。Bad和Bcl-2基因在小尾寒羊黄体期和卵泡期的垂体和卵巢中差异表达,可能参与调控黄体期到卵泡期的发情状态转换,从而启动小尾寒羊发情。     

GDF-8蛋白在牦牛发情周期输卵管的表达

生长分化因子8(Growth differentiation factor 8,GDF-8)在肌肉的分化和生长中有负调控作用,但其是否参与调节动物生殖活动证据仍然不足。为研究GDF-8蛋白在牦牛发情周期输卵管不同部位中的表达差异,从屠宰场采集卵泡期和黄体期牦牛输卵管峡部、伞部和壶腹部组织样品,进行了免疫组织化学染色和Western Blotting检测。结果表明:在牦牛卵泡期和黄体期输卵管的肌层细胞和黏膜上皮细胞中均有GDF-8阳性细胞分布,特别是壶腹部和伞部黏膜上皮细胞表达GDF-8蛋白较丰富;Western Blotting结果表明,GDF-8蛋白在牦牛卵泡期和黄体期输卵管的峡部、壶腹部和伞部也均有表达,但存在表达差异,卵泡期壶腹部和黄体期输卵管伞部表达量明显高于其他部位。综上所述,GDF-8蛋白在输卵管黏膜上皮细胞表达较为丰富,提示GDF-8在哺乳动物生殖过程中发挥重要作用。     

半胱胺对藏绵羊断奶羔羊血清GH、SS、IGF-1水平的影响

试验研究了半胱胺(CS)对藏绵羊断奶羔羊血清中生长激素(GH)、生长抑素(SS)、血清中胰岛素样生长因子(IGF-1)的影响。将40只80日龄左右且始重平均为16 kg的(公母各半)藏绵羊断奶羔羊随机分为2组,在日粮精料中添加300 mg/(kg·BW)的CS,隔日添加1次,试验期42 d。分别于开始用药后的第0、7、14、21、28、35天早晨空腹颈静脉采血样,以放射免疫法测定血浆中GH、SS、IGF-1。结果表明,试验组精料中添加CS使藏绵羊断奶羔羊血清GH、IGF-1都有不同程度的提高,且试验组与对照组相比都有显著差异(P0.05);SS均有不同程度的下降,试验组与对照组相比第3周开始有显著差异(P0.05)。     

陶赛特、萨福克与小尾寒羊杂交产肉性能的改良效果

以萨福克羊、陶赛特羊为父本与小尾寒羊进行杂交,在同等饲养管理条件下,其萨寒F1、陶寒F1与小尾寒羊间在90 d育肥期内日增重差异极显著(P0.01);6月龄胴体重差异显著(P0.05),6月龄屠宰率差异显著(P0.05),萨寒F1与陶寒F1间差异都不显著(P0.05)。实验表明:萨寒F1、陶寒F1生长速度快、产肉性能高的优点已在其杂交后代身上体现出来,杂种优势显著。     

欧拉羊与山谷型藏羊杂交后代各年龄段生长速度分析

对欧拉羊与山谷型藏羊杂交试验组和山谷型藏羊本交对照组所产的后代进行了初生、3月龄、6月龄、12月龄、18月龄的体重跟踪测定和差异显著性检验。结果表明,欧山杂交F1代公、母羊初生～3月龄,3～6月龄,6～12月龄、12～18月龄日增重分别比同期对照组后代日增重均快,差异极显著(P﹤0.01),并且随着月龄的增加,日增重降低。说明欧山杂交后代的生长速度在初生至12月龄增长速度快,而12～18月龄的增长速度减慢,适宜羔羊肉生产。     

欧拉羊与山谷型藏羊杂交F_1代羔羊补饲兼放牧育肥试验效果观察

用欧拉羊杂交改良山谷型藏羊,对杂交F1代羔羊补饲兼放牧育肥试验,补饲阶段试验结果表明：经过90 d补饲,试验组增重10.88kg,比对照组高4.32 kg（P〈0.01）,平均日增重0.121 kg,比对照组高0.048 kg;放牧育肥阶段试验结果表明：经过3个月放牧育肥,试验组增重9.09 kg,比对照组高2.67 kg（P〈0.05）,平均日增重0.101 kg,比对照组高0.03 kg。     

贾甘F1代与甘加羊生长发育对比研究

通过引进贾洛羊种公羊杂交改良甘加羊,对贾甘F1代与甘加羊生长发育进行对比研究。结果显示:从初生至18月龄贾甘F1代羊生长发育较快,与甘加羊比较体重差异极显著(P<0.01);体高、体长、胸围、管围分别比甘加羊均有显著或极显著地提高。贾甘F1代羊和甘加羊绝对生长在6月龄为最大,达到绝对生长高峰,贾甘F1代羊日增重为162.22g,甘加羊日增重为150.11g。相对生长系数随日龄的增加而下降,体重的生长强度随月龄的增加逐渐减小。     

青海省三角城种羊场羊传染性胸膜肺炎的血清学检测

应用绵羊正向间接血凝试验对来自青海省三角城种羊场的59份试情公羊的血清样品,进行羊传染性胸膜肺炎的血清学调查。结果检出阳性血清5份,阳性率为8.48%,表明青海省三角城种羊场的羊群中存在传染性胸膜肺炎的感染。     

Detection of the hyaluronan receptor CD44 in the bovine oviductal epithelium

Hyaluronan is involved in fundamental reproductive events such as sperm storage in the female reproductive tract, fertilization, and early embryo development, these functions are presumably mediated by its major cell surface receptor, CD44. The present study was conducted to investigate the presence and localization of CD44 in the bovine oviductal epithelium, using immunohistochemical and Western blot methods on tissue sections and epithelial cell extracts collected from the uterotubal junction (UTJ), isthmus, and ampulla of animals in the oestrus or luteal phase of the oestrous cycle. While positive immunolabelling for CD44 was found on the ad-luminal surface and supra-nuclear region of epithelial cells in all tubal segments investigated, in the UTJ, there were epithelial cells in which the entire cytoplasm positively stained. We found no differences in terms of CD44-positive staining between the different stages of the oestrous cycle. Presence of CD44 was detected by Western blotting in the tubal epithelium as a single band at 200 kDa. Although it appeared in all tubal segments, the expression of CD44 protein was more accentuated in the sperm reservoir (UTJ) than in the other segments. This is the first time CD44 has been detected in the epithelium of the tubal sperm reservoir in cattle, suggesting a pathway for the action of hyaluronan in this segment.     

东北梅花鹿卵泡发育的显微结构

为揭示雌性东北梅花鹿的生殖机理提供组织依据,利用光学显微镜观察7只成年东北梅花鹿卵巢的组织结构和卵泡的发育过程,同时利用目镜测微尺和显微照相技术分别对60个原始卵泡、60个初级卵泡、25个次级卵泡、34个三级卵泡和3个成熟卵泡及透明带厚度进行测量和拍照。结果表明,东北梅花鹿卵巢组织也是由生殖上皮、白膜、皮质和髓质构成;皮质部在卵巢的外周,但间质腺不发达;髓质位于皮质深层,分布有较多的血管。卵泡在发育过程中,各级卵母细胞和卵泡的直径差异较大,卵泡和卵母细胞的生长呈双向生长;透明带物质出现于3~4层卵泡细胞包围卵母细胞时;卵泡闭锁发生于卵泡生长的各个时期,主要表现为卵母细胞和卵泡细胞的形态变化,有两种形式;三级卵泡的闭锁过程分为早期、中期和后期3个阶段。     

半胱胺对藏绵羊断奶羔羊增重及饲料转化效率的影响

试验研究了半胱胺(Cs)对藏绵羊断奶羔羊增重、饲料转化效率的影响。将40只(公母各半)80日龄左右且体重平均为(16.00±0.31)kg的藏绵羊断奶羔羊随机分为2组(试验组和对照组),在日粮精料中添加300 mg/(kg·BW)的Cs,隔日添加1次,试验期42 d。分别于开始用药后的第0、7、14、21、28、35天称重,并记录各组所采食的精料量。试验结果表明,试验组精料中添加Cs使藏绵羊断奶羔羊35 d增重提高43.25%(P0.01),开始用药后的前7 d差异不显著,但8~35 d最为明显,以后随时间延长促生长效果逐渐减弱;精料/增重比下降43.33%。