水稻OsRFP1基因的原核表达与蛋白纯化

以推导的氨基酸序列分析,水稻OsRFP1基因编码一分子量为34.24kDa锌指蛋白。将OsRFP1基因编码区cDNA序列插入到pGEX4T-3载体中构建OsRFP1-gst融合基因的表达载体,并将质粒转化宿主菌大肠杆菌BL21DE3。经IPTG诱导,融合蛋白在BL21DE3细胞中获得表达。利用亲和层析的方法对融合蛋白进行了纯化,SDS-PAGE蛋白电泳显示获得一60kDa的唯一蛋白条带,即OsRFP1-GST融合蛋白。     

三个烟草品种瞬时表达OsWAK1::GFP的差异

在研究水稻基因OsWAK1功能的过程中,利用荧光分子标记的方法,将OsWAK1与绿色荧光蛋白GFP构建为融合蛋白,利用注射法使表达OsWAK1::GFP融合蛋白的农杆菌浸入烟草叶片。通过荧光显微观察,根据烟草叶片表皮细胞中是否产生绿色荧光来判断融合蛋白是否表达。研究中同时利用了3个不同的烟草品种,利用同样的方法和操作程序,但是最后根据烟草叶片中绿色荧光的检测结果发现,不同的烟草品种对OsWAK1::GFP融合蛋白的表达差异很大。OsWAK1::GFP融合蛋白能够在心叶烟叶片中表达,却未能检测到其在本生烟和三生烟两个品种的叶片中表达。     

山东省玉米生产品种和部分自交系对纹枯病抗性鉴定

连续两年对山东省72份玉米生产品种和30份自交系材料在田间进行纹枯病抗性鉴定,采用被病原菌侵染的高粱粒作为接种物,在玉米拔节中后期接种,按照国家玉米区域试验抗性鉴定标准进行病害分级评定和抗性评价。在102份材料中抗性级别为高抗、抗、中抗、感、高感的比例分别为1.96%、20.59%、24.51%、33.33%、19.61%,生产品种‘登海3号’和‘聊玉22号’对纹枯病表现高抗。     

三个烟草品种瞬时表达OsWAK1::GFP的差异

在研究水稻基因OsWAK1功能的过程中,利用荧光分子标记的方法,将OsWAK1与绿色荧光蛋白GFP构建为融合蛋白,利用注射法使表达OsWAK1::GFP融合蛋白的农杆菌浸入烟草叶片.通过荧光显微观察.根据烟草叶片表皮细胞中是否产生绿色荧光来判断融合蛋白是否表达.研究中同时利用了3个不同的烟草品种,利用同样的方法和操作程序,但是最后根据烟草叶片中绿色荧光的检测结果发现,不同的烟草品种对OswAK1::GFP融合蛋白的表达差异很大.OsWAK1::GFP融合蛋白能够在心叶烟叶片中表达,却未能检测到其在本生烟和三生烟两个品种的叶片中表达.     

山东省番茄灰霉病菌种类与遗传多样性研究

利用单孢分离的方法从山东省11个地区的番茄病害标本上分离获得66个灰霉病菌菌株,通过形态学观察和5.8S rDNA-ITS序列分析,该66个菌株均为灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)。通过序列比对,该66个菌株的ITS序列属于两种类型,并且两种ITS序列只有单碱基差异。利用ISSR（inter-simple sequence repeats）标记技术对66个菌株进行遗传多样性分析,结果获得24个ISSR分子标记,其中58.33%的片段具有多态性,该结果表明菌株种群间遗传多样性不丰富。UPGMA聚类分析将66个菌株划分成4个遗传聚类群,遗传聚类群的菌株组成表明遗传群组的划分与菌株的种类和地理来源存在一定的相关性。     

玉米纹枯病菌细胞核纯化与原生质体转化的探讨

 引起玉米纹枯病的立枯丝核菌(Rhizoctonia solani Kühn)多为多核杂核真菌,也难以通过有性态使其细胞核进行单一化。利用原生质体再生的方法对单核玉米纹枯病菌JN的细胞核进行同核纯化,比较从单个原生质体再生菌获得的rDNA\|ITS序列,发现序列间存在差异,说明其细胞核没有达到预期纯化的效果。继而扩增了双核和多核玉米纹枯病菌的rDNA\|ITS序列,发现它们自身的rDNA\|ITS序列也存在差异,因此认为立枯丝核菌的这种rDNA\|ITS序列的差异可能是长期未经过有性阶段的结果且与其细胞核数目无关。使用转化丝状真菌的载体转化纹枯菌未获得稳定的转化子,进而对载体进行了改造,用纹枯菌(AG\|3)actin基因的启动子和终止子控制潮霉素基因构建了载体pRsA。利用PEG介导的原生质体转化方法,实现了对单核纹枯菌的转化,PCR验证得到3个转化子。但在PDA培养基连续继代5代后,转化子的潮霉素抗性消失。结果对改进纹枯菌的转化方法有借鉴意义。     

黄绿木霉T1010对不同土壤层微生物群落的影响

通过在土壤中施用土壤生态改良剂黄绿木霉T1010,在樱桃番茄生长过程中定期定点取土样测定微生物数量,结果表明,黄绿木霉T1010能促进土壤中其他有益微生物的生长。在20～30cm土壤层,樱桃番茄生长盛果期,黄绿木霉T1010制剂处理组土壤细菌、放线菌、固氮菌群落数量分别比初始值提高2.00,1.61,7.14倍,比对照处理组提高0.80,0.88,1.63倍。黄绿木霉T1010是真菌,施入土壤后其他真菌不再增加。樱桃番茄后期,20～30cm土壤层真菌数量比初始值下降4.78%,比对照下降66.85%。应用黄绿木霉T1010制剂后,樱桃番茄花期、果期提前,果实整齐均匀,感病指数降低36.36%,侧根数比常规化肥处理组增加144%,产量明显提高。     

利用GFP标记对OsWAK1蛋白胞外区的鉴定

水稻OsWAK1编码一细胞壁相联的受体类似蛋白激酶,对其推断的氨基酸进行预测,其结构组成包括胞外区、跨膜区和胞内激酶区。推断OsWAK1蛋白胞外区与配体识别并结合,是胞外信号传递到胞内的信号转导途径中的重要环节,因此OsWAK1蛋白的胞外区是OsWAK1发挥其生物学功能所必需的。将预测的OsWAK1蛋白胞外区与GFP构建为融合蛋白,通过融合蛋白在烟草细胞中的定位确定OsWAK1蛋白结构上含有预测的胞外区。     

潍春白2号大白菜的选育

潍春白2号系以韩国材料经过多代选择育成的优良自交不亲和系早黄92-A为母本，以福77-105×牡丹江1号分离出的二环系新福77-105(代号91-439)为父本配制而成的春大白菜杂种一代。抗病毒病、霜霉病和软腐病，生长期60～65d(天)，耐抽薹，叶球合抱，呈炮弹形，顶部呈石榴嘴状，平均单球质量2.6kg，总产量每667m2可达5800kg左右。