猪带绦虫45W-4BX和TSOL18的高效表达及免疫效果研究

RT-PCR扩增45W-4B和TSOL18基因,PCR截去45W-4B基因的N端信号肽和C端疏水氨基酸序列形成45W-4BX。将45W-4BX和TSOL18 PCR产物分别亚克隆人pGEX-4T-1,用IPTG诱导表达,取产物进行SDS-PAGE和Western blot分析。纯化表达产物制成油佐剂疫苗分别免疫家猪,用25000枚猪带绦虫成熟虫卵进行攻击感染,ELISA检测各组的抗体水平,90d后剖检计算各组的减虫率。结果表明,45W-4BX和TSOL18基因在大肠杆菌中分别以可溶性和包涵体形式获得高效表达,并能被囊虫病人血清所识别。重组蛋白免疫猪15d血清抗体即为阳性,30d左右达到峰值。2种重组抗原的减虫率均在88％以上,与囊虫粗抗原免疫效果相当。这为进一步研制基于45W-4BX和TSOL18的猪囊虫重组基因工程疫苗奠定了基础。     

绵羊痘病毒甘肃流行株膜蛋白ORF23基因的克隆及序列分析

从甘肃景泰县疑似患羊痘的绵羊皮肤组织中提取基因组DNA,PCR扩增膜蛋白ORF23基因.序列分析表明,该基因由1113个核苷酸组成,编码370个氨基酸,A+T含量占69.90%,G+C含量仅占30.10%.绵羊痘病毒甘肃株ORF23基因与A株、NISKHI株之间的核苷酸同源性分别为99.6%和99.5%,氨基酸同源性分别为98.7%和98.4%;与皮肤疙瘩病病毒NW-LW株和山羊痘病毒Pellor株之间的核苷酸同源性均为98.2%.结构预测显示,ORF23膜蛋白为非分泌蛋白,具有一个O连结糖基化位点.可见,ORF23膜蛋白在不同的绵羊痘病毒流行株之间非常保守,具有潜在的疫苗和诊断研究价值.     

DNA疫苗免疫佐剂的研究进展

简要阐述了细胞因子、共刺激分子、CpG DNA和脂质体等DNA疫苗佐剂的来源、性质、免疫增强作用、作用机理和方式。认为以前的研究工作必然会使上述佐剂应用到DNA疫苗的生产中。     

绵羊痘病毒甘肃流行株糖蛋白基因orf118的克隆及序列分析

从甘肃景泰疑似羊痘患病绵羊的皮肤组织中提取基因组DNA,利用PCR技术,克隆糖蛋白orf118基因.比较分析表明,该基因由516个核苷酸组成,编码171个氨基酸,相对分子质量为19 500,其碱基组成极不平衡,其中A T含量占72.48%,G C含量仅占27.52%.甘肃景泰株orf118基因同绵羊痘病毒TU-V02127 株之间的核苷酸同源性最高达99.8%,氨基酸的同源性为100%;与疙瘩皮肤病病毒肯尼亚株和山羊痘病毒G20-LKV 株之间的同源性分别为96.5%和94.8%.结构预测结果显示,orf118蛋白为分泌蛋白,具有2个N键连结糖基化位点和1个跨膜区.以上结果表明,orf118蛋白在不同的绵羊痘病毒流行株之间非常保守,具有潜在的疫苗和诊断价值.     

O型FMDV P1-2A基因与猪IFN-γ基因共表达质粒的构建及其在BHK-21细胞中的表达

为了构建O型FMDV P1-2A基因与猪IFN-γ基因共表达质粒并在BHK-21细胞中进行表达,本研究利用聚合酶链式反应(PCR)从阳性质粒pGEM-P12A克隆到P1-2A基因,将扩增产物纯化、双酶切后连接到pBudCE-IFN载体,构建重组质粒pBudCE-IFN-P1-2A.重组表达质粒鉴定后,在脂质体介导下转染BHK-21细胞,用RT-PCR和直接免疫荧光试验分别检测P1-2A 和IFN-γ在BHK-21细胞中的表达.RT-PCR检测显示,重组表达质粒转染细胞后P1-2A 和IFN-γ基因成功转录出mRNA;免疫荧光试验表明目的基因在BHK-21细胞中获得了表达.结果证明,本研究成功构建了重组质粒pBudCE-IFN-P1-2A并在体外进行了表达,这为研制抗FMDV DNA疫苗和IFN-γ的佐剂作用奠定了坚实基础.     

移栽密度对知母生长性状及药用活性成分含量的影响

为了指导知母合理移栽,采用不同移栽密度(行距为30 cm和宽窄行40/20 cm;株距为10 cm、20 cm、30 cm)进行知母栽培,旨在探索适合西陵知母移栽的密度,为知母的规范化栽培提供依据。结果表明,在行距为宽窄行40/20 cm,株距为30 cm时,知母分蘖最少,株高值最小,单株鲜重、根茎鲜重、根茎最大直径和根茎长度均达到最大值,根茎药用活性成分芒果苷和知母皂苷BⅡ的含量也符合2015版药典标准。综合不同移栽密度对知母生长性状和根茎中药用活性成分含量的影响说明,西陵知母最佳种植行距40/20 cm,株距30cm,移栽密度为10.5万株/hm~2。     

西陵知母种苗质量分级标准研究

目的:制定西陵知母种苗质量分级标准.方法:从易县和安国药材市场收集西陵知母种苗10份,测定种苗的株高、鲜重、须根数、地径和种球直径等指标,采用SPSS 19.0统计分析软件进行统计分析,确定西陵知母种苗分级的主要指标,并制定西陵知母种苗分级标准.结果:西陵知母种苗分为3个等级:一级种苗须根数≥20条,单株重≥40 g,种球直径≥1.6 cm;二级种苗须根数16～20条(不合20),单株重20～40 g(不合40),种球直径1.4～1.6 cm(不含1.6);三级种苗须根数7～16条(不合16),单株重5～20 g(不合20),种球直径0.8～1.4 cm(不含1.4).结论:考虑到种苗是形成药材的源头,建议生产中采用一、二级种苗,以形成高产量高品质的药材.     

中药材施肥研究进展

本文就目前中药材的施肥情况进行了综述,主要针对肥料对中药材的产量和品质的影响,从有机肥料、无机肥料、微生物肥料等方面进行探讨,并提出了今后中药材施肥发展的一些建议。     

猪CD58分子基因克隆、表达及其结构功能预测

CD58在机体免疫系统中具有重要作用,本研究通过对人、绵羊CD58 mRNA序列比对,设计兼并引物,应用反转录PCR技术克隆猪CD58基因,并在大肠杆菌中进行原核表达,同时运用生物信息学方法对其核苷酸序列、编码的氨基酸序列以及蛋白结构进行预测。结果表明:克隆的猪CD58 cDNA全长800 bp,ORF为735 bp;将其在大肠杆菌中进行表达,产物可被CD58抗血清识别;序列比对结果显示猪、羊和人的CD58核苷酸序列及氨基酸序列同源性并不高,但蛋白结构预测表明三者蛋白结构非常相似,尤其是V区三维结构,这是异种动物淋巴细胞和红细胞发生黏附的分子基础。该研究为CD58作为疫苗佐剂或免疫调节药物在临床中的应用、进一步研究CD58分子结构及CD2-CD58复合物激活免疫系统的机理奠定了基础。     

低温冻害对山西省五寨县甜糯玉米全生育期的影响及防御措施

冻害是影响山西省五寨县甜糯玉米生长发育的主要气象灾害之一,防御冻害最为经济有效的措施是了解五寨县低温冻害特征,选择最佳播种和采收时间,规避冻害风险。利用五寨县65 年气温、10 cm地温、霜日等气象资料和近10 年的冻害资料,采用数理统计、概率统计、Excel分析等方法,分析研究了低温冻害对五寨县甜糯玉米全生育期的影响。研究表明,五寨县甜糯玉米生育期内,春季冻害危害风险较高,秋季冻害危害风险较低。甜糯玉米苗期至3叶期,冻害危害风险最高时段为4月25日—5月15日。甜糯玉米采收期,冻害危害风险最高时段为9月下旬。针对研究结果,提出相应的防御对策,旨在为科学合理种植甜糯玉米提供技术支撑。