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为了研究鸡粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)的生物学功能,采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术从刀豆蛋白(ConA)刺激的四川山地乌骨鸡外周血淋巴细胞中扩增出GM-CSF基因,进一步通过PCR等方法将该基因亚克隆入真核表达载体pCI-neo,构建出重组表达质粒pCI-GM-CSF,将pCI-GM-CSF转染COS-7细胞,提取表达产物进行活性检测.序列测定表明,四川山地乌骨鸡GM-CSF全基因长为435 bp,编码144个氨基酸,与GenBank 上公布的瓦赫宁鸡GM-CSF基因(AJ621740)氨基酸序列同源性达95.1%,与其他哺乳动物GM-CSF基因的氨基酸序列同源性低于30%.骨髓细胞增殖实验证实四川山地乌骨鸡GM-CSF能明显促进鸡骨髓细胞的增殖.以上结果表明,本实验成功克隆了四川山地乌骨鸡GM-CSF基因,证实四川山地乌骨鸡GM-CSF重组蛋白具有明显的生物学活性. 相似文献
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鸡粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的原核表达及生物学活性分析 总被引:1,自引:0,他引:1
通过PCR方法扩增不含信号肽的鸡GM-CSF成熟蛋白基因,克隆至原核表达载体pET-32a(+),构建原核表达质粒p32GM-CSF,通过IPTG诱导重组鸡GM-CSF蛋白表达,经镍离子亲和层析纯化后,用MTT法检测表达重组蛋白的生物学活性,并制备兔抗鸡GM-CSF多克隆抗体。结果表明成功地构建了p32GM-CSF原核表达质粒,SDS-PAGE结果显示表达的重组蛋白约34 ku,主要以包涵体形式表达,纯化后得到高纯度目的蛋白。West-ern Blot结果表明,该重组蛋白能与制备的抗鸡GM-CSF抗体特异性结合。MTT试验证实,该重组蛋白具有明显增强鸡骨髓细胞增殖的生物学活性;这些研究结果表明,表达的重组chGM-CSF蛋白及其多克隆抗体拥有相应的生物学功能,这将为进一步研究鸡GM-CSF蛋白的生物学功能及其应用奠定基础。 相似文献
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采用PCR-SSCP技术分析蚯蚓粪便的微生物群落结构 总被引:1,自引:0,他引:1
通过SDS/蛋白酶的方法抽提蚯蚓粪便微生物总DNA,以总DNA为模板,采用通用引物分别成功扩增细菌16S rRNA基因的V4-V5可变区,真菌18S rRNA基因的V8-V9可变区,应用单链构象多态性技术(SSCP)分析了蚯蚓粪便中不同空间层次的微生物种群的多样性。结果表明,在粪便的不同空间层次上呈现出明显的空间分布多样性,并且与纯蚯蚓粪微生物种群的多样性有很大的差别。为进一步的蚯蚓粪生态学功能研究提供了有益的指导。 相似文献
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谭兵 《养殖与饲料.饲料世界》2021,(3)
给生猪及时检疫是提升猪群健康水平的关键措施,能保障生猪养殖的经济效益,保障群众的食用安全,促进生猪养殖业可持续发展。为此,本文介绍了生猪检疫过程中常见的疫病:猪蓝耳病,猪瘟,猪口蹄疫;简述了猪蓝耳病处置措施、猪瘟处置措施、猪口蹄疫处置措施和完善规范化管理准则等。 相似文献
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农村财务管理规范化问题,是当前农村工作中的一个突出热点问题,也是关系到农村稳定的最敏感的因素之一.农村财务管理的好坏,直接影响到农村集体经济的发展和农村社会的稳定.随着农村经济体制改革的深化,各级农经部门进行了有益的探索,并摸索出一些好的方法.但由于缺乏有效和有力的长效机制的保障,农村财务管理不规范、前清后乱的局面仍然... 相似文献
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位点特异性重组系统已经成为基因组操作的强有力工具。来自链霉菌噬菌体φC31的整合酶是丝氨酸重组酶家族的一员,可催化2个不同的识别位点attB和attP间发生有效的单向性重组。总结了φC31整合酶可能的重组机制以及在人类细胞、小鼠胚胎干细胞、果蝇和植物等真核生物基因组操作上的应用,并对该系统的优点和存在问题进行了分析。φC31整合酶系统有望成为高等生物基因功能分析、转基因标记删除、生物合成等研究领域最强有力的手段之一,为此也简要介绍了家蚕个体水平上φC31整合酶介导的盒式交换的研究进展,期望能为家蚕基因组的操作技术研究提供一些借鉴。 相似文献