血清和促性腺激素对山羊卵母细胞核体外成熟的影响

试验研究了清和促性腺激素对山羊卵丘扩展和卵母细胞核成熟的,卵母细胞与卵丘扩展的关系以及卵丘扩展与卵母细胞核成熟的关系。结果表明：（1）培养24h，添加PMSG组卵母细胞核成熟率显著高于不加激素组（P＜0．05），而培养到27h，2者成熟率之间差异变得不显著，说明添加PMSG卵母细胞核的最终成熟率没有明显影响，但加速了卵母细胞核的成熟进程；（2）M199＋BSA培养27h，卵母细胞核成熟率显著高于培养24h，而M199＋FCS培养27h与培养24h的成熟差异不显著，说明添加BSA时，卵母细胞核体外成熟速度比添加FCS的慢；（3）卵丘扩展良好与扩展不好的卵母细胞核成熟率以及第1极体形态无统计学差异，说明山羊卵母细胞的核成熟可能不依赖于卵丘扩展；（4）山羊的卵丘扩展产不依赖于卵母细胞；（5）将带壁颗粒细胞与不带壁颗粒细胞的COC分开培养发现，2者卵母细胞核成熟度无明显差异，带有壁颗粒细胞的COC卵丘扩展情况明显优于一般COC。     

猪卵丘扩展与卵母细胞核成熟关系的研究

 以猪卵丘卵母细胞复合体（COC）为实验对象研究了猪卵丘扩展与卵母细胞核成熟之间的关系,结果表明,（1）全程培养均暴露于激素环境中不利于卵丘的扩展;（2）卵丘扩展良好与卵丘扩展不好的卵母细胞核成熟比例无统计学差异（P>005）;（3）去除卵母细胞的COC培养后,卵丘细胞仍然能发生扩展;（4）培养24h后去掉COC的卵丘细胞不仅不影响卵母细胞的核成熟,而且极体完整的卵母细胞数目还显著增多（P<0.01）;但去颗粒细胞组卵母细胞的质膜不如对照组光滑;（5）带有壁颗粒细胞（mural granulosa cell,MGC）的COC扩展情况明显优于不带MGC的,其中含有极体的成熟卵数也显著高于后者（P<0.01）。     

发情间期注射PMSG对猪卵泡发育及颗粒细胞凋亡影响的研究

为探讨孕马血清促性腺激素 (PMSG)对猪卵泡发育和闭锁及颗粒细胞凋亡的影响 ,实验采用性成熟肥育母猪为实验材料 ,对在情期第 11d(发情当日为 0 d)注射 PMSG后 2 4 ,4 8,72和 96 h的猪卵巢表面各类卵泡数量、颗粒细胞凋亡比例以及外周血浆中类固醇激素浓度等进行了研究。结果表明 ,注射 PMSG后 2 4 h卵巢表面卵泡总数、小卵泡 (直径 <3mm)数和中等卵泡 (直径 3～ 5 m m)数分别为 :5 9,32和 2 5 .5个 /卵巢 ,明显多于同期对照组 (情期第 12 d)猪的数量 ;注射 PMSG72和 96 h卵巢表面大卵泡 (直径≥ 5 m m)数量分别为 7和 6个 /卵巢 ,明显多于对照组 (情期第 14和第 15 d) ,而此时卵汇总数却明显低于对照组。大卵泡颗粒细胞的凋亡比例在注射 PMSG后与对照组相比无显著差异 ,而小卵泡和中等卵泡的颗粒细胞的凋亡比例在注射 PMSG后 2 4 h(6 .4 %和 7.8% )显著 (P<0 .0 5 )降低 ;中等卵泡颗粒细胞凋亡比例到 PMSG后 72 h回升至与对照组无显著差异 ,小卵泡颗粒细胞凋亡比例于 PMSG后 96 h回升至与对照组无显著差异。血清中雌二醇浓度在 PMSG注射后明显升高 ,在 PMSG注射后72 h时达最高值 (72 .3pg· m L- 1 ) ,显著高于对照组 (10 .8pg· m L- 1 )。孕酮的浓度在 PMSG注射后无明显变化。以上结果表明 ,在体内条     

次黄嘌呤维持小鼠卵母细胞减数分裂阻滞的时效性和可逆性研究

为提高体外成熟卵母细胞的发育能力,本实验采用卵泡内存在的减数分裂抑制剂次黄嘌呤(Hypoxanthine,HX)在体外维持小鼠GV期卵母细胞减数分裂阻滞,探讨了次黄嘌呤对卵母细胞减数分裂抑制作用的时效性、可逆性以及对卵丘扩展和解除抑制后的发育能力的影响。结果表明(1)4mmol/LHX维持减数分裂阻滞的作用具有时效性,GV%在18h时显著下降。(2)HX处理时间短于24h时,解除抑制后再成熟时卵母细胞的成熟率不受影响,抑制24h再成熟14h时成熟率仍可达86%。(3)HX处理会抑制卵丘扩展,解除抑制后再成熟时卵丘扩展程度跟抑制时间长短有关。(4)HX处理6h后,卵母细胞的孤雌激活率上升(42%vs20%,P<0.05),但胚胎的发育能力下降。这证明HX维持小鼠卵母细胞减数分裂阻滞的作用具有时效性和可逆性的特点,为建立提高体外成熟卵母细胞的发育能力的培养体系打下了基础。     

卵丘颗粒细胞核移植克隆猪的初步研究

经颗粒细胞核移植已成功获得克隆小鼠(Wakayamaetal.1998,Nature394:369)。在牛,卵丘颗粒细胞核移植胚胎也已经发育到囊胚期(Collasetal.1994,MolReprodDev38:264)。然而,目前在猪尚未见到有关颗粒细胞核移植成功的报道。为此,我们进行了颗粒细胞核移植培育克隆猪的研究。...     

注射hCG后不同时间猪所排卵泡内COC的形态和卵母细胞减数分裂进程

研究了超排处理注射 h CG后不同时间猪卵丘卵母细胞复合体 (COC)的回收率和形态、卵母细胞减数分裂进程以及 COC形态与生发泡 (GV)染色质构型之间的关系。结果表明 :(1)注射 h CG后 4 h COC的回收率为 5 3.1% ,明显低于注射 h CG后 18、2 2、2 4 h(71.2 %、76 .5 %、70 .0 % ,P<0 .0 5 ) ;(2 )注射 h CG后 18、2 2、2 4 h收集的 COC分别有98.9%、98.0 %、91.4 %的卵丘已经发生扩展 ,而注射 h CG后 4 h收集的 COC则无一发生卵丘扩展 ;(3)注射 h CG后 4h,有少量卵母细胞开始恢复减数分裂 ,至 18h左右开始发生生发泡破裂 (GVBD) ,到 2 2～ 2 4 h有 5 8.4 %～ 6 0 .0 %的卵母细胞发生 GVBD;(4)外层卵丘扩展、放射冠轻微扩展的卵母细胞处于 GV- 1期的比例 (6 9.6 % )明显高于卵丘完全扩展的卵母细胞 (47.8% )和放射冠部分扩展、卵丘已经脱落的卵母细胞 (2 9.3% ) ,而后 2者发生 GVBD的比例(40 %、4 4 % )则略高于前者 (2 7% )。     

不同物种输卵管上皮细胞培养、纯度检测及支持小鼠胚胎发育的能力

针对不同物种采用不同方法培养小鼠、山羊和鸡输卵管上皮细胞(OECs)并检测上皮细胞纯度,在此基础上比较了它们支持小鼠胚胎发育的能力。结果表明,3种细胞都能很好地生长,培养的细胞几乎全为上皮细胞(Vi-mentin单克隆抗体检测显示,小鼠、山羊和鸡OECs的阳性细胞率分别为2.4±0.3、1.3±0.3和1.8±0.4)。昆明白小鼠原核胚与小鼠、山羊和鸡OECs共培养,发育到囊胚的比例分别为61.7%、57.2%和56.2%,差异不显著(P>0.05)。说明鸡和山羊OECs能很好地支持小鼠胚胎发育。     

性未成熟小母猪注射PMSG对卵泡闭锁及颗粒细胞凋亡的影响

为探讨孕马血清促性腺激素 (PMSG)对 2～ 3月龄性未成熟的小母猪卵巢中卵泡发育、卵泡闭锁以及卵泡颗粒细胞凋亡的影响 ,就其注射 PMSG后 2 4、4 8、72、96 h卵巢中各类卵泡数量、颗粒细胞凋亡比例及外周血浆中类固醇激素水平等进行了研究。结果如下 :(1)未注射 PMSG前 ,性未成熟小母猪卵巢表面卵泡总数 (10 .5个 /卵巢 )及各类卵泡数 (小卵泡 9个 /卵巢 ,中等卵泡数 1.5个 /卵巢 )均较少 ;注射 PMSG后 2 4 h,小卵泡数 (2 4个 /卵巢 )、中等卵泡数 (6 .5个 /卵巢 )和大卵泡数 (1.5个 /卵巢 )与对照组相比均明显增多 ;至注射 PMSG后 96 h,小卵泡数 (4.5个 /卵巢 )和中等卵泡数 (1.5个 /卵巢 )均明显减少 ,但大卵泡数量仍较多 (4.5个 /卵巢 )。 (2 )未注射 PMSG前 ,性未成熟小母猪各类卵泡中的颗粒细胞凋亡比例均较高 ,小卵泡和中等卵泡分别为 2 4 .8%和 34.4 % ;注射 PMSG后 2 4 h,颗粒细胞凋亡比例显著降低 (P<0 .0 5 ) ,小卵泡和中等卵泡分别为 10 .7%和 13.7% ;至注射 PMSG后 72 h,小卵泡和中等卵泡的颗粒细胞凋亡比例开始显著升高 (P<0 .0 5 ) ,而大卵泡在出现后颗粒细胞凋亡比例较低且无较大波动。 (3)在未注射PMSG前 ,血清中的雌二醇含量仅为 15 .3ng/L,孕酮则由于含量太低而未能检测到 ;在注射 PM     

卵泡表面直径判断山羊卵母细胞的发育能力

试验探讨了山羊卵泡表面直径与实际直径的相关性及卵泡直径与卵母细胞直径和卵母细胞发育能力的关系。结果显示:(1)山羊卵巢表面直径1.5～2.5mm以上卵泡,其表面直径和实测直径相关性显著(r=0.72),可以利用表面直径对这群卵泡进行分类;(2)表面直径1.5～2.5mm以上卵泡,其卵母细胞已经达到最大直径(约130μm),透明带体积也达到最大(约7×105μm3);在此之前的有腔卵泡,卵母细胞直径和透明带体积均随着卵泡直径增加而增加;(3)不同直径卵泡其卵母细胞减数分裂能力不同:≤0.5mm直径卵泡卵母细胞未获得恢复减数分裂的能力;0.8～1.2mm直径卵泡卵母细胞可恢复减数分裂,但只能发育到M 期;1.5～2.5mm和3.0～5.0mm直径卵泡卵母细胞可恢复减数分裂并发育到M 期,24h时M 期比率分别为93%和91%。