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为了使热休克蛋白70(heat shock protein 70,Hsp70)在BRL-3A细胞中过表达,试验以带有标签基因的腺病毒感染BRL-3A细胞,根据感染效率初筛病毒感染的最适浓度和作用时间;然后用初筛出的最适浓度(4×107,2×107,1×107,0.5×107,0.25×107pfu/mL)和时间(24 h和48 h)感染BRL-3A细胞,优化Hsp70重组腺病毒感染BRL-3A细胞的条件,并应用荧光定量RT-PCR和免疫蛋白印记方法检测Hsp70的mRNA和蛋白表达量。结果表明:当用1×107pfu/mL病毒AdCMV-Hsp70按照最佳感染条件的感染复数(MOI)=20感染BRL-3A细胞48 h时,能使Hsp70表达量比病毒空载体感染细胞和无病毒的对照组细胞极显著升高(P0.01)。 相似文献
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为分析运输应激对肉牛肝脏miRNA的影响,寻找肉牛运输应激候选诊断标志物。实验将10头体况良好体重相近的肉牛随机分为运输0 h组和运输3 h组,使用公路运输方式对肉牛进行运输应激,速度为80 km·h~(-1)。采集血液,制备血清,使用ELISA方法检测肉牛血清中CRP和SAA含量的变化。同时采集肝脏并提取总RNA,反转录成cDNA,运用qRT-PCR方法检测肉牛肝脏组织中miR-31、miR-194-5p、miR-125b和miR-186的表达。结果表明,与运输0 h组相比,运输3 h组血清中CRP含量显著升高(P0.05),SAA含量极显著升高(P0.01);与运输0 h组相比,运输3 h组肝脏组织中miR-31相对表达量极显著上升(P0.01),miR-194-5p相对表达量极显著下降(P0.01),miR-125b和miR-186相对表达量显著下降(P0.05),上述结果为运输应激诊断标志物的筛选提供参考依据。 相似文献
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选取15头体况相似的健康肉牛作为研究对象,随机分为运输0h组、运输3h组和运输6h组,每组5头肉牛,采用公路运输方式运输(平均速度为80km/h)。采集各组牛肝脏和脾脏组织样本,用酶联免疫吸附试验(ELISA)和荧光定量PCR(qRT-PCR)2种试验方法检测各组肝脏和脾脏组织中应激蛋白-热休克蛋白70(HSP70)和急性期蛋白-C反应蛋白(CRP)含量的变化。qRT-PCR检测结果显示:与运输0h组相比,运输3h和6h肝脏组织中HSP70mRNA的表达量极显著升高(P0.01);而脾脏组织中HSP70mRNA只在运输应激6h后表达量显著增加(P0.05)。与0h组相比,运输应激后肝脏组织中CRP mRNA的表达量极显著升高(P0.01),脾脏组织中CRP mRNA的表达量显著升高(P0.05)。ELISA检测结果显示:与0h组相比,运输应激3h和6h肝脏中的HSP70质量浓度极显著升高(P0.01),脾脏中HSP70的质量浓度在运输6h后显著升高(P0.05);肝脏和脾脏CRP的表达在运输应激6h后极显著升高(P0.01)。结果表明:不同运输时间的运输应激可导致肝脏和脾脏中HSP70和CRP的浓度和mRNA转录水平升高,且肝脏中HSP70和CRP的表达量高于脾脏。HSP70和CRP可作为肉牛运输应激候选诊断标志物。 相似文献