间接ELISA检测鸭疫里氏杆菌抗体的研究

本文成功地建立了一种快速、敏感、特异性强的检测鸭疫里氏杆菌１型抗体的方法—酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）。探讨和确定了ＥＬＩＳＡ的最适条件。通过对３２份阳性血清效价的测定，发现血清１∶１００稀释时的ＯＤ值与血清效价倒数的以２为底的对数之间存在直线相关性，相关系数为０．９７，并由此建立了标准曲线和回归方程。对用不同疫苗免疫鸭的抗体消长规律测定发现，油佐剂疫苗效果最好，甲醛灭活苗两次免疫次之，甲醛灭活苗一次免疫效果最差。从抗体水平角度推断，雏鸭１０日龄左右用苗最好，每只鸭注射０．５ｍｌ是可行的。     

第二届国际蓝舌病、非洲马瘟及有关环状病毒的专题研讨会

1991年6月17日至21日在巴黎国际兽疫事务局(OIE)总部召开了第二届蓝舌病、非洲马瘟及有关环状病毒的国际专题研讨会,有近160人参加这次会议。与会的科学家、管理专家和生产部门的权威讨论了这些病目前的状况,科学地提出了有关制定管理制度方面的合理化建议,并确定了研究重点。会上重点讨论了蓝舌病、非洲马温、流行性出血热、马的器质性脑病及能在家养和野生反刍动物和马科动物中引起疾病的Palyarn病毒。     

Dot─ELISA检测猪生殖和呼吸综合征抗体的研究

用差速离心法提纯ＰＲＲＳ病毒，利用ＮＣ膜作为载体，在国内外首次成功建立了检测ＰＲＲＳ血清抗体的斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）。抗原包被浓度为１００μｇ／ｍｌ，被检血清工作浓度为１∶１０，酶标兔抗猪ＩｇＧ工作浓度为１∶６００。对７２份北京地区猪血清分别用Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ和ＩＦ检测，Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测阳性率为３３．３％，ＩＦ检测阳性率为３０．６％，与ＩＦ符合率较高，对部分待检血清检测结果表明：６１份１９９１年进口美国猪血清阳性率为０％，１８２份１９９５年进口加拿大猪血清阳性率为４．９４％。本法不需特殊仪器，适用于基层兽医部门和猪场对该病的血清学诊断和流行病学普查     

禽流感病毒多重荧光RT-PCR检测技术的建立与初步应用

国内外检测禽流感病毒最常用和经典的方法是鸡胚病毒分离,该方法是O IE推荐的方法,但是耗费时间长。为缩短检测时间,目前我们已成功建立了灵敏、特异的荧光RT-PCR检测方法,并已经应用于活禽、禽组织及环境中禽流感病毒的快速检测与H 5、H 7、H 9亚型的分型鉴定。鉴于我国2004年年初暴发H 5N 1亚型禽流感疫情,以及高致病力禽流感通常由H 5和H 7亚型引起,因此在平时疫情检测和实施扑灭措施时对这些病毒亚型进行快速检测和定型非常重要,在本研究中,为能进一步提高检测效率,节约成本,我们进一步研制开发的H 5/H 7和H 5/N 1多重荧光PCR…     

IPMA检测猪生殖和呼吸综合征病毒抗体的研究

本研究在国内首次成功地建立了免疫过氧化物酶单层细胞试验（ＩＰＭＡ）检测猪生殖和呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）抗体。应用ＩＰＭＡ检测了北京地区３个猪场９４份血清发现，英国株抗体阳性检出率为９．６％（９／９４），美国株Ｍ１的抗体阳性检出率为５１％（４８／９４）。同间接荧光抗体试验ＩＦＡ比较阳性检出率基本一致。利用ＩＦ和ＩＰＭＡ两种方法检测１８２份加拿大进口猪血清均有３头阳性，且编号相同，本试验证实了ＩＰＭＡ是一种检测ＰＲＲＳ抗体的有效方法，可应用于ＰＲＲＳ的血清学检测     

牛阴茎纤维乳头状瘤病毒的分离初报

牛纤维乳头状瘤病毒(BPV)是导致牛纤维乳头状瘤的病原。国外根据发病部位将BPV分为6个血清型(BPV1—6),并且认为不同血清型的病毒DNA有差异,且对组织的特异性不同。根据临床症状和病理变     

亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒核酸检测标准物质的制备研究

针对目前口蹄疫病毒核酸扩增检测缺乏标准物质的现状,以口蹄疫病毒亚洲Ⅰ型核酸为模板,分别设计引物扩增具有检测意义的5′端1nt～2208nt的片段(含完整的5′NCR)和3012nt～5155nt片段(含完整1D～2B区域),并克隆于pMD20-T。测序后采用体外转录方法制备2种RNA纯品,进行初步定量稀释后等量混合分装。采用荧光定量RT-PCR方法进行均匀性和稳定性检验后,委托外部实验室对RNA片段进行拷贝数定值。结果显示,制备的标准品均匀性和稳定性良好。     

牛肠道病毒TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立

为建立快速、准确地检测牛肠道病毒(BEV)及对北京周边地区牛群中BEV感染情况进行检测,本研究通过设计合成扩增BEV 5＇UTR序列的引物及探针建立了检测BEV的通用型TaqMan荧光定量RT-PCR快速检测方法并对反应条件进行了优化.该方法对BEV的最小检测量为0.1 TCID50/0.1mL,敏感性比病毒分离法高10倍.而且该方法对其他牛相关病毒均无交叉反应.用3批试剂对3个稀释度的BEV培养物进行批内和批间重复性试验,其变异系数均小于1.1％,表明该方法具有良好的重复性.采用该方法对北京周边地区牛群采集的852份临床样品进行检测,并与病毒分离方法比较,两种方法检测结果完全一致.因此,本研究所建立的BEVTaqMan RT-PCR检测方法具有快速、准确、特异性强、敏感性高、重复性好的优点,为国内BEV的检测提供了有力的技术支持.本研究首次通过病毒核酸检测证明了我国部分地区的牛群中存在BEV感染.     

新城疫病毒通用型实时RT-PCR检测方法的建立与应用

采用TaqMan方法,经引物和探针的设计、筛选及反应条件优化,研究了检测活禽和禽产品中新城疫病毒的通用型实时RT-PCR(RRT-PCR)方法。结果显示,对12株分别为速发型、中发型、缓发型和疫苗株新城疫病毒的尿囊液倍比稀释液的检测极限在10-5~10-7之间;建立的方法与常见禽类病毒无交叉反应,特异性良好;在检测人工感染肉鸡的脏器组织、咽喉、泄殖腔拭子中病毒的灵敏度同鸡胚分离试验基本一致;弱毒疫苗免疫鸡群在免疫后14 d,应用本方法不能从咽喉、泄殖腔拭子中检测到病毒;临床样品检测表明,该方法不仅可以检出中强毒力新城疫毒株,也可检出缓发型野毒株和疫苗毒株。