11株枯草芽孢杆菌益生特性研究

试验旨在研究11株枯草芽孢杆菌的抑菌、产酶、耐受性和体外消化率等益生特性。从11株枯草芽孢杆菌中初筛得到9株体外抑菌特性和产酶特性均较好的芽孢杆菌;经过热、人工胃肠液、胆盐等耐受性复筛,结果表明9株芽孢杆菌中有6株对胆盐、胃酸、肠液等人工模拟的消化道内环境和生产过程中的热耐受性较强;经模拟动物体消化道的试验结果表明,9株芽孢杆菌中有5株（BLCC1-1、BLCC1-2、BLCC1-3、BLCC1-4、BLCC1-6）对不同组合饲料的消化效果较好。综合以上试验结果,既表现出较好的产酶、抑菌和耐受性,又对组合饲料有良好的消化效果的枯草芽孢杆菌有BLCC1-1、BLCC1-2、BLCC1-4和BLCC1-6,这4株枯草芽孢杆菌具有作为饲料添加剂应用于畜禽饲料中的潜力,可进一步开展研究。     

一株鼠伤寒沙门氏菌噬菌体的分离鉴定及对小鼠的防制效果研究

本研究旨在通过双层平板法从鸡粪中分离鼠伤寒沙门氏菌烈性噬菌体,并通过电镜观察、热稳定性、pH稳定性、最佳感染复数、一步生长曲线和在小鼠上的防制效果试验对噬菌体进行评估。结果显示,从鸡粪中成功分离出一株鼠伤寒沙门氏菌噬菌体(ФBLCC8-0050-3),该噬菌体有一个正多面体立体对称的头部,头径直径约65nm,无尾部结构,应属于盖噬菌体科(Tectiviridae)烈性噬菌体;噬菌斑成圆形空斑,周围有晕环,直径为2~3mm;温度耐受范围是30~50℃;pH耐受范围为3~10。当感染复数(multiplicity of infection,MOI)为0.0001时,子代噬菌体滴度最高;按照一步生长曲线结果,潜伏期为20 min左右,爆发时间为180 min左右,爆发量为43 333PFU/cell;从噬菌体对鼠伤寒沙门氏菌的防制效果来看,处理14d后,阳性对照组小鼠存活率为0,噬菌体预防组小鼠存活率为90%,噬菌体治疗组小鼠存活率为70%。说明与阳性对照组相比,预防组和治疗组都对小鼠抵抗沙门氏菌感染有一定的作用。结果表明,ΦBLCC8-0050-3是一株具有良好应用前景的噬菌体,可作为一种生物抑菌剂用于鼠伤寒沙门氏菌的防制。     

一株鼠伤寒沙门氏菌噬菌体的分离鉴定及对小鼠的防制效果研究

本研究旨在通过双层平板法从鸡粪中分离鼠伤寒沙门氏菌烈性噬菌体，并通过电镜观察、热稳定性、pH稳定性、最佳感染复数、一步生长曲线和在小鼠上的防制效果试验对噬菌体进行评估。结果显示，从鸡粪中成功分离出一株鼠伤寒沙门氏菌噬菌体（φBLCC8-0050-3），该噬菌体有一个正多面体立体对称的头部，头径直径约65 nm，无尾部结构，应属于盖噬菌体科（Tectiviridae）烈性噬菌体；噬菌斑成圆形空斑，周围有晕环，直径为2~3 mm；温度耐受范围是30~50℃；pH耐受范围为3~10。当感染复数（multiplicity of infection，MOI）为0.0001时，子代噬菌体滴度最高；按照一步生长曲线结果，潜伏期为20 min左右，爆发时间为180 min左右，爆发量为43 333 PFU/cell；从噬菌体对鼠伤寒沙门氏菌的防制效果来看，处理14 d后，阳性对照组小鼠存活率为0，噬菌体预防组小鼠存活率为90%，噬菌体治疗组小鼠存活率为70%。说明与阳性对照组相比，预防组和治疗组都对小鼠抵抗沙门氏菌感染有一定的作用。结果表明，φBLCC8-0050-3是一株具有良好应用前景的噬菌体，可作为一种生物抑菌剂用于鼠伤寒沙门氏菌的防制。     

微量元素对益生菌在饲料贮存中的应用评估

本试验研究了夏季饲料贮存过程及饲料中额外添加铜、锌微量元素对8株益生菌活性的影响,筛选出活性高的微生态制剂菌种。将8株实验室保藏的益生菌分别制成单一菌制剂添加到空白、35mg/kg铜、200mg/kg锌的肉鸡料中,分别贮存30d。结果表明,无论在饲料贮存过程中还是额外添加铜、锌后,4株芽孢杆菌的活菌数都没有显著变化。乳酸菌和酵母菌在贮存过程中活菌数有不同程度地降低,且对高铜、高锌有不同耐受性,对环境及铜、锌的抗逆性由强到弱顺序为:屎肠球菌C2-0012、海洋红酵母C4-0001、植物乳杆菌C2-0015、干酪乳杆菌C2-0003,但活性均不如芽孢杆菌。     

饲用抗生素不同作用方式对4株益生菌活性的影响

本试验研究了饲料贮存、饮水作用方式过程中常用饲用抗生素对4株益生菌活性的影响。结果表明,在饲料贮存过程中,2株芽孢菌保持较高存活率,而植物乳杆菌与戊糖片球菌活菌数分别下降1、0.3个数量级,且抗生素组与空白组之间无明显差异;饮水作用方式过程中,芽孢菌对12种抗生素不敏感,乳杆菌对50ppm的左氧氟沙星作用1小时活菌数下降1个数量级,戊糖片球菌对不同饲用抗生素呈现不同敏感性;这为益生菌在畜牧生产中的实际应用提供一定的理论依据。     

苹果酸对枯草芽孢杆菌及其噬菌体的影响

为了研究苹果酸对枯草芽孢杆菌及其噬菌体的影响,按2%比例转接枯草芽孢杆菌菌液至数瓶新的液体培养基中,随机分配为四个处理组,每组3个平行,180 r/min、37℃摇瓶培养至对数期后,分别添加噬菌体和苹果酸,21h时用分光光度计测菌液OD600值。结果表明,添加苹果酸对枯草芽孢杆菌的生长及芽孢的形成均无不利影响,对枯草芽孢杆菌噬菌体也无明显抑制效果。因此,苹果酸不适宜作为枯草芽孢杆菌噬菌体的抑制剂。     

噬菌体的应用与防治

噬菌体结构简单,有严格的宿主特异性,可用于治疗致病菌感染引起的疾病,对医学微生物学、遗传学、分子生物学等学科的发展起到推动作用。噬菌体作为生物界的一员,在自然界中分布极广,给人类生产发酵带来了极为不利的影响。综述了噬菌体的应用前景、潜在风险及防治措施。     

HIV-1可溶性单链抗体b12-scFv的表达与活性分析

【目的】合成并克隆HIV-1单克隆抗体b12的单链抗体基因,在大肠杆菌中诱导表达,并分析表达产物的活性。【方法】以单抗b12的重链和轻链全基因为模板,分别扩增其可变区基因片段后,用重叠PCR的方法将二者拼接起来,形成scFv-VL-Linker-VH结构,并将其插入pET28a载体,构建原核表达载体pETb12-scFv。将pETb12-scFv转入大肠杆菌BL21StarTM(DE3),经IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE分析;用Ni-NTA金属螯合层析柱对表达产物进行分离纯化,用酶联免疫吸附试验(ELISA)、荧光显微镜和流式细胞仪(FCM)检测纯化蛋白与HIV-1gp120的结合活性。【结果】得到了b12的单链抗体基因b12-scFv,长度为768bp;SDS-PAGE电泳结果显示,b12-scFv表达量较高,蛋白质分子质量约为29ku,主要以可溶性蛋白的形式存在,但也有部分形成不溶的包涵体;纯化后蛋白的产量约为2mg/L;活性检测结果表明,b12-scFv对分泌表达和锚定在细胞膜表面的HIV-1gp120都具有良好的特异性结合活性。【结论】单链抗体b12-scFv可以用于HIV-1受体结合位点的表位检测。