伪狂犬病毒TK基因缺失通用转移载体的构建及初步应用

以伪狂犬病毒为载体表达其他病原体抗原蛋白是伪狂犬病疫苗研究的一个重要方向。根据已发表的伪狂犬病毒（PRV）Ra株TK基因序列设计2对引物,用PCR方法得到同源左右臂,克隆入PUC19载体中。利用平末端连接的方法将绿色荧光蛋白（EGFP）的基因表达盒插入到缺失位点,并在下游引入1个多克隆位点,构建缺失通用转移载体PUC19TK-EGFP。用脂质体转染试剂盒将PUC19TK-EGFP和PRV-Ra株的基因组共转染BHK细胞,以EGFP为标记基因,用噬斑法得到纯化的重组病毒,命名为TK/EGFP,为研制以伪狂犬病毒为载体的二价或多价基因工程疫苗奠定了物质基础。     

动物疫苗的科学免疫（二）

1免疫程序 免疫程序是根据每种传染病的危害、流行情况、动物的免疫状态及疫苗特性等制定出来的免疫计划,涉及疫苗的类型、不同疫苗接种的先后顺序、每种疫苗的首免时间、接种次数和间隔时间等。合理的免疫程序应该考虑各种疫苗的最佳接种时机、不同疫苗之间的互相干扰、母源抗体的影响等因素。每种疫苗可按该产品使用说明书推荐的方法免疫,还要根据各场实际防疫效果作适当修正。免疫时机、方法不当,则不但起不到预防疾病的作用,还可能带来不良后果。首先要确定你所在的畜禽场需要免疫的疫病种类,可以从当地的兽医业务部门或专家等途径了解所养动物的疫病流行规律;     

猪圆环病毒2型疫苗研究进展

猪圆环病毒2型(PCV-2)感染是一种新发现的猪传染病,以5周龄～12周龄仔猪高发病率、高死亡率及导致机体淋巴系统损伤与免疫缺陷为主要特征。PCV-2感染在世界各养猪国家广泛流行,给各国养猪业造成了巨大的经济损失。PCV-2疫苗研究已成为国内外学者的研究焦点。迄今为止,西欧与美国已有PCV-2疫苗注册上市,主要为灭活疫苗与亚单位疫苗。由于灭活疫苗与亚单位疫苗成本高,且注射次数多,容易造成机体应激,因此,弱毒疫苗、活载体疫苗及核酸疫苗等新型疫苗是目前研究的重点,并取得了长足的进展。论文主要概述了PCV-2疫苗研究的最新进展,以期为PCV-2疫苗研究提供一定的参考资料。     

伪狂犬病病毒Ra株体外感染ST细胞超微结构的研究

本研究以伪狂犬病病毒(pseudorabies virus, PRV)Ra株体外感染ST细胞为生物模型,通过透射电镜对PRV的增殖规律和致细胞病变的显微结构进行观察。结果显示,PRV能诱导ST细胞发生明显病变,细胞的病变程度与PRV感染时间密切相关。PRV Ra株感染ST细胞,病毒吸附于ST细胞表面,以膜融合内陷的方式进入细胞和细胞核内,在细胞核内复制,出现包涵体结构,以出芽方式离开细胞核,在高尔基体等细胞内膜结构处完成病毒粒子的囊膜化过程。感染前期,病毒通过膜融合方式被释放到细胞外,完成细胞间病毒的传播;感染后期,细胞溶解,大量释放病毒粒子。感染细胞超微结构的变化主要体现为:线粒体肿胀、数目减少,嵴面积减少,核内出现包涵体,细胞融合,细胞内空泡化严重,溶细胞现象。     

浅谈PED防控中的饲养管理关键点

正猪流行性腹泻(PED)防控的关键是控制产房仔猪发病。仔猪是否发病,主要取决于两个因素:母源抗体水平和产房环境病毒含量(如图1)。仔猪母源抗体:一般在出生后1~2?d内达到峰值,然后随着时间推移逐步下降(图1中母源抗体达到峰值后并不下降,这主要是为了突出饲养管理在PED防控中的重要性,并不影响讨论逻辑)。产房环境病毒含量:PED防控的主要威胁是母猪带毒,当带毒母猪进入产房后,产房环境中的病原浓度会随着饲     

动物疫苗及其合理使用（一）

疫苗接种是预防动物传染病发生的重要举措。依据免疫学理论,疫苗作为抗原,通过激发动物机体免疫系统,产生特异的体液免疫和细胞免疫,从而获得针对某种疾病的特异性免疫。疫苗一般分为细菌疫苗、病毒疫苗和类毒素疫苗等。用于防病治病的各种疫苗、菌苗又是特殊的生物药品,与普通化学药品具有完全不同的成分、功能和特性,疫苗中含有多种蛋白质（除细菌或病毒外,有的还含有保护剂、鸡胚尿囊液或细胞培养液）,它们均适合许多病原体的生长,有些制品还是活的微生物,一旦污染后果不堪设想。疫苗在保存、运输和使用时有其特别要求。如果方法不当,不但会使活性物质失活,起不到免疫防病作用;而且还可能适得其反,引发动物新的疾病,造成重大损失。     

猪伪狂犬病毒TK缺失株PRV/TK~-的构建及其生物学特性

为了构建伪狂犬病毒容A株(PRV-Ra)TK基因缺失重组病毒,本研究利用PCR从PRV-Ra株基因组分别扩增TK基因两侧的序列LTK和RTK,将LTK和RTK克隆到pUC19载体,构建转移质粒pUC19-TK/HEK。进一步将增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)表达盒克隆到pUC19-TK/HEK质粒中,构建转移质粒pUC19-TK/EGFP。用pUC19-TK/EGFP与PRV-Ra株基因组共转染BHK21细胞,通过噬斑纯化获得重组病毒PRV/TK-/EGFP;用pUC19-TK/HEK与PRV/TK-/EGFP病毒基因组共转染BHK21细胞,噬斑纯化获得不含EGFP基因的重组病毒PRV/TK-。该重组病毒在体外传30代后仍其有良好的遗传稳定性;PRV/TK-体外增殖速度、对家兔的毒力以及对仔猪的安全性和抗体反应性研究表明,重组毒株与原始株(PRV-Ra)在BHK21上具有相似的增殖规律;PRV/TK-对家兔的毒力比PRV-Ra下降了10000倍;以105.0TCID50PRV/TK-免疫小猪后4周,体内产生的平均中和抗体水平达101.9,略高于对照疫苗产生的抗体水平(101.8)。本试验为PRV基因功能的研...     

我国非洲猪瘟防控进展

非洲猪瘟（ASF）是威胁我国养猪业的重大疫病之一。